Elektroforéza sérových proteinů (SPE)

Biomolekuly, jako jsou proteiny, nesou v pufru negativní nebo pozitivní náboj a pohybují se směrem k anodě nebo katodě v elektrickém poli, které se nazývá elektroforéza. Kvůli jejich různým isoelektrickým bodům, rozdílné molekulové velikosti, tvaru a poměru náboje k hmotnosti mají různé proteinové molekuly různou elektroforetickou mobilitu a různé proteiny mohou být separovány v určitém nosném médiu. Mezi běžně používané elektroforetické techniky patří elektroforéza na membráně acetát celulózy, elektroforéza na agarózovém gelu, elektroforéza na polyakrylamidovém gelu a imunoelektroforéza. Navíc mnohočetný myelom má často M globulinové pásy mezi beta globulinovou oblastí a gama globulinovou oblastí, dvojitá albuminémie ukazuje dvojitý albuminový pás. Základní informace Odborná klasifikace: klasifikace kontroly růstu a vývoje: biochemické vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Včetně položek: sérový β2 mikroglobulin (β2-MG), sérový α2-makroglobulin, sérový α1-mikroglobulin Tipy: půst 12 hodin, žilní krevní test, vzorky musí být čerstvá krev. Před testem byste měli informovat lékaře o lécích, které jste užívali nedávno, ao nedávných fyziologických změnách. Normální hodnota Celulóza-acetátová membránová elektroforéza albumin 0,61 ~ 0,71 (61% ~ 71%), al globulín 0,03 ~ 0,04 (3% ~ 4%), a2 globulin 0,06 ~ 0,10 (6% ~ 10%), beta globulin 0,07 až 0,11 (7% až 11%) a gama globulin 0,09 až 0,18 (9% až 18%). Klinický význam 1, redukce albuminu se vyskytuje u chronické hepatitidy, cirhózy, rakoviny jater a tak dále. 2, a1 globulin (glykoprotein) se zvýšil v primárním karcinomu jater. Snižuje se u těžké hepatitidy, cirhózy a jaterního kómatu a pozitivně koreluje s albuminem. Stanovení α1 globulinu v jaterním onemocnění má referenční hodnotu pro posouzení závažnosti a prognózy hepatitidy. Obecně vzrůst a1 globulinu naznačuje, že je stav mírný, a pokles a1 globulinu ukazuje, že je stav těžší. Při závažném selhání jater může být obsah séra významně snížen. 3. V počátečním stádiu a2 globulinové virové hepatitidy nedošlo k žádné významné změně a po jednom týdnu se postupně zvyšovala Subakutní hepatitida a akutní jaterní nekróza a dekompenzovaná cirhóza byly sníženy. 4, beta globulin zvyšuje v mastných játrech, hyperlipidemii, nefrotický syndrom, diabetes s hypercholesterolémií, obstrukční žloutenku, maligní nádory. Při onemocnění jater cholestázou je jeho obsah zvýšen souběžně s růstem α2 globulinu. Snížení u akutní a chronické hepatitidy, cirhózy, zejména dekompenzované cirhózy a nekrotické cirhózy, se snížilo nejvýrazněji. 5, gama globulin se zvýšil u chronické hepatitidy, cirhózy, onemocnění jater a žlučníku. Typická cirhóza může být viděna ve fúzi P a y pásů za vytvoření můstku P-y. Změny v gama globulinu u pacientů s onemocněním jater mohou odrážet závažnost stavu. Jak se stav zlepšuje, jeho obsah se může postupně snižovat na normální. Pokud nadále klesá na vysoké úrovni, znamená to, že je stav závažný, prognóza je špatná a existuje tendence k rozvoji chronické hepatitidy a cirhózy. Kromě toho lze také zvýšit infekci, schistosomiázu, mnohočetný myelom, onemocnění pojivové tkáně atd. Snižte výskyt nedostatku gama globulinu, pacientů s parciální chemoterapií. Navíc mnohočetný myelom má často M globulinové pásy mezi beta globulinovou oblastí a gama globulinovou oblastí, dvojitá albuminémie ukazuje dvojitý albuminový pás. Nízké výsledky mohou být nemoci: vysoké výsledky cholestatické žloutenky mohou být nemoci: jaterní cirhóza, primární rakovina jater, mnohočetný myelom ve stáří 1, půst 12 hodin, žilní krevní test, vzorky musí být čerstvá krev. 2. Před testem byste měli informovat lékaře o lécích, které jste užívali nedávno, ao nedávných fyziologických změnách. 3. Fyziologické zvýšení se může objevit v následujících případech: (1) Nárůst a1-globulinu lze pozorovat po 6 měsících těhotenství. (2) Nárůst a2-globulinu lze pozorovat u kojenců narozených 1 až 6 měsíců, s mírným nárůstem ve 4 až 6 měsících těhotenství a výrazným zvýšením v 7 až 9 měsících. (3) Zvýšení β-globulinu se pozoruje u dítěte po narození, 4 až 6 měsíců těhotenství. (4) Nárůst y-globulinu je patrný po vakcinační imunizaci. Proces inspekce 1. Přidejte pufr do elektroforetické nádrže a upravte pufr v nádržích na obou stranách tak, aby byly ve stejné rovině. 2. Příprava filmu z acetátu celulózy: Vezměte film z acetátu celulózy (2 cm × 8 cm) a nakreslete vodorovnou čáru tužkou ve vzdálenosti 1,5 cm (jedna strana negativní strany) drsného povrchu, abyste vytvořili tečkovanou značku. Po očíslování a označení pozitivních a negativních elektrod byl film ponořen do roztoku sodného pufru barbiturát-barbitál sodný a po dostatečné nasycení (obvykle 20 minut) byl přebytek pufru odstraněn vložením čistého filtračního papíru. 3. Vlasový film z acetátu celulózy je připojen k držáku nádrže pro elektroforézu a narovnán. Pipetujte 3 ~ 5 μl nehemolytického séra pomocí mikropipety a přidejte jej podél vodorovné linie na vodorovné linii. Vzorek by se měl udržovat v určité vzdálenosti od okraje filmu, aby se zabránilo deformaci proteinového proužku ve vzorci elektroforézy.Po průniku séra do filmu se film obrátí. Světlou stranou směrem nahoru ji nalepte rovně na držák nádrže pro elektroforézu a spojte dva konce filmu s pufrem pomocí dvouvrstvého filtračního papíru nebo čtyř vrstev gázy a chvíli vyčkejte. 4, zapněte napájení, dávejte pozor na kladné a záporné elektrody na filmu acetátu celulózy, nepřipojujte špatně. Napětí 90 ~ 150 V, proud 0,4 ~ 0,6 mA / cm (různé požadované elektroforetické napětí, proud může být různý, měl by být flexibilní), letní energie 45min, zimní doba zapnutí je o něco delší, asi 60min, rozšíření elektroforetické zóny asi 25 ~ 35 mm může být. 5, barvení: Po dokončení napájení odstraňte film a přímo ho ponořte do roztoku barviva Lichunhong S nebo do barvicího roztoku aminokyseliny 10B, obarvte po dobu 5 až 10 minut (albuminovou zónou), poté zbývající zbytek opláchněte. Barvte, dokud není pozadí bezbarvé. 6, kvantitativní: 1 kolorimetrická metoda: opláchněte opláchnutý film, nařežte obarvenou bílkovinnou oblast do odpovídající zkumavky, přidejte 0,6 ml / l hydroxidu sodného 6 ml do albuminové zkumavky (vypočtěte absorbance vynásobenou 2), zbytek Do každé zkumavky přidejte 3 ml, několikrát ji protřepejte a vložte ji do vodní nádrže o teplotě 37 ° C po dobu 20 minut, aby se její barva vyluhovala. Amino Black 10B obarvení Absorbance každé zkumavky byla odečtena při 620 nm pomocí spektrofotometru a poté byl vypočítán obsah každé zkumavky (simultánní kontrola prázdné zkumavky). Když se barvil Lichunhong S, na výluh se působilo 0,1 mol / l hydroxidu sodného a množství bylo stejné jako výše. Po 10 minutách přidejte do albuminové zkumavky 0,6 ml 400 ml / l kyseliny octové (vynásobte absorbanci 2) a do dalších zkumavek přidejte 0,3 ml, aby se neutralizoval část hydroxidu sodného, ​​aby se barva zbarvila hlouběji. V případě potřeby odstřeďte a odeberte supernatant. Absorbance každé zkumavky byla odečtena při 520 nm spektrofotometrem (simultánní kontrola slepého pokusu) a poté byl vypočten příslušný obsah. 2 Metoda skenování denzitometrem: A. Transparentní: Aspirujte oplachovací kapalinu na fólii (abyste zabránili tomu, aby se transparentní kapalina zředila tak, aby ovlivnila průhledný výsledek), ponořte fólii do průhledné kapaliny na 2 až 3 minuty, poté ji vyjměte a válcováním vyrovnejte. Vyčistěte skleněný díl bez poškrábání (nevytvářejte bubliny), na krátkou dobu posuňte sklíčko, odstraňte přebytečnou průhlednou tekutinu, vložte ji do trouby při konstantní teplotě 90 ° C až 100 ° C, pečte 10 až 15 minut, vyjměte a ochlaďte na Při pokojové teplotě jsou průsvitné bílkoviny transparentní touto metodou odlišné, film je plochý a lze jej přímo naskenovat a trvale uchovat (transparentní vodíkem naftalenu nebo kapalným parafinem. Opláchnutý film by měl být vysušen a průhledný a průhledný film nemůže být průhledný) Trvá dlouho a je náchylný k vráskám). B. Kvantifikace skenování: Průhledná fólie se umístí do plně automatického denzitometru nebo jiného tmavého boxu denzitometru pro skenovací analýzu. Nevhodné pro dav Ne. Nežádoucí účinky a rizika Ne.