Sérový lipoprotein a elektroforéza sérového lipoproteinu

Elektroforéza lipoproteinů se používá hlavně pro klasifikaci hyperlipoproteinémie a je také užitečné porozumět stavu lipidů v krvi u koronárních srdečních chorob a lépe vést klinickou diagnózu a léčbu. Základní informace Odborná klasifikace: klasifikace kardiovaskulárních vyšetření: biochemické vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Výsledky analýzy: Pod normální: Nachází se při nízké lipoproteinémii a tak dále. Normální hodnota: Lipoprotein o velmi nízké hustotě: 0,06-0,3 g / l Lipoprotein o nízké hustotě: 0-7 g / l Lipoprotein o vysoké hustotě (samec): 0,41-0,63 g / l Zheng s vysokou hustotou? 0,42 - 0,68 g / l Nad normální: Nachází se v primární hyperlipidemii atd. Negativní: Pozitivní: Tipy: Před vyšetřením je strava lehká a alkohol je zakázán. Podívejte se ráno na prázdný žaludek. Normální hodnota Membránová elektroforéza na acetát celulózy Částice ostropestřce mariánského 0 g / l (0 mg / dl); Lipoprotein o velmi nízké hustotě 0,06 až 0,3 g / l (6 až 30 mg / dl); Lipoprotein o nízké hustotě <7 g / l (<700 mg / dl); Lipoprotein o vysoké hustotě: Samec 0,52 ± 0,11 g / l (43 ± 18 mg / dl); Žena 0,55 ± 0,13 g / l (47 ± 2 mg / dl). Klinický význam 1, zvýšené: pozorováno u primární hyperlipidémie. 2, nižší: při nízké lipoproteinemii. Vysokými výsledky mohou být onemocnění: hyperlipidémie, hyperlipoproteinémie typu II, úvahy o srdečních chorobách 1. Vzorek: Lipoprotein lze izolovat z čerstvého, nezmrazeného séra. Plazma není vhodná pro elektroforézu lipoproteinů, protože se objeví fibrinogenový pás. 2. Lipoproteinové profily s jasnými separačními složkami jsou předpoklady pro přesnou interpretaci. Pokud jsou tyto podmínky dobře splněny, může být elektroforéza lipoproteinů a referenční metoda (ultracentrifugace) docela konzistentní. Přesnost každé složky je odlišná a odhaduje se pomocí variačního koeficientu, který je obecně menší než 5%. 3. Občas alfa-lipoproteiny zmizí a / nebo se objeví úzký alfa-lipoproteinový pás. Důvodem je to, že volné mastné kyseliny jsou v. Akumulace alfa-lipoproteinů způsobuje, že tyto částice mají stejný náboj. Se zvyšující se hustotou a-zóny je výsledek vysoký. Ve srovnání s technikami srážení je kvantitativní elektroforéza lipoproteinů nákladná. Proces inspekce Ihned po odběru žilní krve zkušební operace: 1. Přidejte pufr do elektroforetické nádrže a upravte pufr v nádržích na obou stranách tak, aby byly ve stejné rovině. 2. Příprava filmu z acetátu celulózy: Vezměte film z acetátu celulózy (2 cm × 8 cm) a nakreslete vodorovnou čáru tužkou ve vzdálenosti 1,5 cm (jedna strana negativní strany) drsného povrchu, abyste vytvořili tečkovanou značku. Po očíslování a označení pozitivních a negativních elektrod byl film ponořen do roztoku sodného pufru barbiturát-barbitál sodný a po dostatečné nasycení (obvykle 20 minut) byl přebytek pufru odstraněn vložením čistého filtračního papíru. 3. Vlasový film z acetátu celulózy je připojen k držáku nádrže pro elektroforézu a narovnán. Pipetujte 3 ~ 5 μl nehemolytického séra pomocí mikropipety a přidejte jej podél vodorovné linie na vodorovné linii. Vzorek by se měl udržovat v určité vzdálenosti od okraje filmu, aby se zabránilo deformaci proteinového proužku ve vzorci elektroforézy.Po průniku séra do filmu se film obrátí. Světlou stranou směrem nahoru ji nalepte rovně na držák nádrže pro elektroforézu a spojte dva konce filmu s pufrem pomocí dvouvrstvého filtračního papíru nebo čtyř vrstev gázy a chvíli vyčkejte. 4, zapněte napájení, dávejte pozor na kladné a záporné elektrody na filmu acetátu celulózy, nepřipojujte špatně. Napětí 90 ~ 150 V, proud 0,4 ~ 0,6 mA / cm (různé požadované elektroforetické napětí, proud může být různý, měl by být flexibilní), letní energie 45min, zimní doba zapnutí je o něco delší, asi 60min, elektroforetická zóna rozšíření asi 25 ~ 35 mm může být. 5, barvení: Po dokončení napájení odstraňte film a přímo ho ponořte do roztoku barviva Lichunhong S nebo do barvicího roztoku aminokyseliny 10B, obarvte po dobu 5 až 10 minut (albuminovou zónou), poté zbývající zbytek opláchněte. Barvte, dokud není pozadí bezbarvé. 6, kvantitativní: 1 kolorimetrická metoda: opláchněte opláchnutý film, nařežte obarvenou bílkovinnou oblast do odpovídající zkumavky, přidejte 0,6 ml / l hydroxidu sodného 6 ml do albuminové zkumavky (vypočtěte absorbance vynásobenou 2), zbytek Do každé zkumavky přidejte 3 ml, několikrát ji protřepejte a vložte ji do vodní nádrže o teplotě 37 ° C po dobu 20 minut, aby se její barva vyluhovala. Amino Black 10B obarvení Absorbance každé zkumavky byla odečtena při 620 nm pomocí spektrofotometru a poté byl vypočítán obsah každé zkumavky (simultánní kontrola prázdné zkumavky). Když se barvil Lichunhong S, na výluh se působilo 0,1 mol / l hydroxidu sodného a množství bylo stejné jako výše. Po 10 minutách přidejte do albuminové zkumavky 0,6 ml 400 ml / l kyseliny octové (vynásobte absorbanci 2) a do dalších zkumavek přidejte 0,3 ml, aby se neutralizoval část hydroxidu sodného, ​​aby se barva zbarvila hlouběji. V případě potřeby odstřeďte a odeberte supernatant. Absorbance každé zkumavky byla odečtena při 520 nm spektrofotometrem (simultánní kontrola slepého pokusu) a poté byl vypočten příslušný obsah. 2 Metoda skenování denzitometrem: A. Transparentní: Aspirujte oplachovací kapalinu na fólii (abyste zabránili tomu, aby se transparentní kapalina zředila tak, aby ovlivnila průhledný výsledek), ponořte fólii do průhledné kapaliny na 2 až 3 minuty, poté ji vyjměte a válcováním ji vyrovnejte. Vyčistěte skleněné sklíčka bez poškrábání (nevytvářejí bubliny), na chvíli sklouzněte sklíčka, odstraňte přebytečnou průhlednou tekutinu, vložte do trouby při konstantní teplotě 90–100 ° C, pečte 10–15 minut, vyjměte a ochlaďte na pokojovou teplotu. Proteinové oblasti průhledné tímto způsobem jsou odlišné, film je plochý a lze jej přímo naskenovat a trvale uchovat (průhledný vodíkem naftalenu nebo kapalným parafinem. Opláchnutý film by měl být vysušen a průhledný a průhledný film nelze uložit. Dlouhá a snadno zvrásněná). 2 Kvantifikace skenování: Průhledná fólie je umístěna do plně automatického denzitometru nebo jiného tmavého boxu denzitometru pro skenovací analýzu. Nevhodné pro dav Nevhodné osoby: Obecně neexistují lidé, kteří nejsou vhodní. Nežádoucí účinky a rizika 1, lokální subkutánní krvácení: po odběru krve by mělo být stlačeno dostatečně dlouhou dobu, zejména u těch s tendencí ke krvácení, aby nedošlo k subkutánnímu vytekání a tvorbě modřin v důsledku žádné koagulace krve. 2, infekce: pozor na aseptické operace během odběru žilní krve, aby nedošlo k lokální infekci.