Sekreční IgE ve sputu

Místo SIgE je podobné místu SIgA a je také produkováno plazmatickými buňkami v lamina propria respiračního traktu. Je distribuováno ve sliznicích a exokrinních tekutinách. Tato místa jsou místem invaze alergenů a místem alergických reakcí. IgE je monomer, 8S, 19 × 104 ku, a jeho těžký řetězec je delší než y řetězec. Jedna další funkční oblast (CH4), která se může vázat na buňky (jako jsou žírné buňky, bazofily) a za určitých podmínek může uvolňovat intracelulární bioaktivní látky, proto je IgE hlavní protilátkou způsobující alergii typu I. . Základní informace Odborná klasifikace: Klasifikace respiračních vyšetření: vyšetření sputa Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Připomenutí: Pokud jsou hlavní složky reagencií nesprávně připraveny nebo nesprávně skladovány, snadno se rozloží a deaktivují. Normální hodnota 0,1 až 9 mg / l. Klinický význam Zvýšení: IgE je monomer, 8S, 19 × 104ku a jeho těžký řetězec je delší než y řetězec. Jedna další funkční oblast (CH4), která se může vázat na buňky (jako jsou žírné buňky, bazofily) a za určitých podmínek může uvolňovat intracelulární bioaktivní látky, proto je IgE hlavní protilátkou způsobující alergii typu I. . U pacientů s bronchiálním astmatem a hypersenzitivní pneumonitidou lze zvýšit obsah SIgE ve sputu. Vysokými výsledky mohou být onemocnění: bronchiální astma, alergická pneumonie Hlavní složky reagencií v ELISA, jako jsou antigeny, protilátky, enzymové konjugáty, substráty atd., Se snadno degradují a inaktivují, pokud nejsou řádně připraveny nebo nesprávně skladovány. V ELISA je mnoho kroků a pokud není operace standardizovaná, je obtížné získat přesné výsledky. Proto, aby byla zajištěna účinnost zkoušky, musí být pro každou zkoušku provedena kontrola kvality. Pozitivní a negativní kontroly poskytnuté ve výborných soupravách mohou být obecně použity jako kontrola kvality testu. Podle pokynů lze účinnost testu posoudit ze získaných hodnot absorbance. Jako příklad lze uvést nejčastěji používaný test HBsAg v klinických testech. Negativní kontrolou v soupravě by mělo být HBsAg-negativní lidské sérum a pozitivní kontrola by měla ukazovat na obsah HBsAg (např. 9 ± 2 ng / ml). Pro každou šarži testů by měly být provedeny současně tři negativní kontroly a dvě pozitivní kontroly. Hodnota absorbance získaná testem negativní kontroly by měla být menší než určitá hodnota (například 0,100) a střední hodnota absorbance pozitivní kontroly mínus absorbance negativní kontroly by měla být větší než určitá hodnota (například 0,200). Tyto hodnoty jsou specifické experimentální hodnoty pro soupravu za specifikovaných podmínek testu. Pokud tedy výsledky zkoušek splňují požadavky, znamená to jak účinnost použitých činidel, tak správnost operace. Pouze v tomto případě je zkouška šarže účinná. Některé pozitivní a negativní kontroly obsažené v soupravě nesplňují požadavky na kontrolu kvality nebo laboratorní podmínky měření, jako je kolorimetr atd., A rozdíl v popisu soupravy by měla být použita odpovídající kvalita podle skutečné situace. Kontroly a hodnoty kontroly kvality z laboratoře odvozené z experimentu. Sérum kontroly kvality komodity je drahé. Kvalitativní stanovení produktů kontroly kvality ELISA lze obecně připravit samy. Příkladem je test HBsAg. Negativní kontroly mohou být získány od dárců krve, kteří jsou HBsAg negativní s vysoce kvalitními reagenty. Pozitivní kontrola může být připravena přidáním vhodného množství HBsAg-pozitivního séra do negativního kontrolního séra a porovnáním smíšeného séra s referenčním standardem nebo kvantitativní kontrolou pro stanovení obsahu HBsAg. Poté se provede vhodné zředění za účelem získání HBsAg-pozitivního séra o požadované koncentraci, potom se přidá vhodné množství antibakteriálních konzervačních látek, jako je gentamicin a kyselina salicylová, a pak se konzervují při nízké teplotě kryokonzervou. Proces inspekce ELISA je vícestupňová, vícesložková, vícestupňová zkušební metoda, která musí být pečlivě a pečlivě provozována podle požadavků, jinak nebudou získány přesné výsledky. Postupy ELISA používané k detekci různých položek se mírně liší, ale zahrnují kroky, jako je plnění, držení, praní a kolorimetrie. Pracovní body každého kroku jsou popsány níže. 1. Příprava činidla: Zřeďte nebo připravte činidla potřebná pro zkoušku podle pokynů v soupravě. Destilovaná nebo deionizovaná voda použitá v testu ELISA, včetně mytí, by měla být čerstvá a vysoce kvalitní. Samostatný pufr by měl být měřen pH metrem. Teplota zkušebního činidla vyjmutého z chladničky by měla být použita po dosažení pokojové teploty. Při zkouškách používajících HRP jako marker nejsou k dispozici nádoby kontaminované kovem. 2. Plnění: Podle potřeby připravte dobrou destičku ELISA. Vzorky séra (pokožky) by měly být odebírány čerstvě nebo správně uchovávány v chladničce. Neměly by se používat vysoce hemolyzované nebo zakalené vzorky. Vzorky obsahující azid sodný jako konzervační látky nejsou k dispozici pro jednostupňový test ELISA pro značení HRP. Při přidávání vzorku přidejte vzorek na dno díry, nevyvarujte se jeho přidání do horní části stěny díry a dávejte pozor, abyste jej nestříkali, a neměly by se objevit žádné vzduchové bubliny. Přesnost množství přidaného vzorku při kvantitativním stanovení by měla splňovat kvantitativní požadavky. Při kvalitativním měření není někdy přesnost množství vzorku zdůrazněna, například je předepsána jako kapka. V tomto okamžiku byste měli použít kapátko se stejným průměrem a udržovat správnou polohu nakládky tak, aby objem každé kapky byl v podstatě stejný. Činnost a požadavky na přidání enzymového konjugátu a přidání substrátu jsou stejné jako na přidání vzorku. 3. Izolace: V testu ELISA jsou obecně dvě reakce antigen-protilátka, tj. Po přidání vzorku a po přidání kombinace. V tomto okamžiku by měla být teplota a doba reakce stejně přesná, jak je požadováno. Izolovaná nádoba je s výhodou vodní lázeň a dno destičky ELISA by mělo být umístěno do vody, aby se teplota rychle vyrovnala. Každá destička ELISA by neměla být stohována dohromady. Aby se zabránilo odpařování, deska by měla být zakryta. Desku lze také umístit naplocho do mokré krabičky s mokrou gázou na dně. Mokrý box by měl být předehřát na specifikovanou teplotu, například izolace inkubátoru je důležitější. 4, praní: praní v procesu ELISA není reakčním krokem, ale rozhodlo se uzavřít klíč k úspěchu. Účelem promývání je vymytí látek v reakčním roztoku, které jsou vázány na antigen nebo protilátku v pevné fázi a interferující látky, které jsou nespecificky adsorbovány na nosiči pevné fáze během reakce. Adsorpce proteinů plasty, jako je polystyren, je univerzální, proto by se během testu ELISA mělo co nejvíce zabránit nespecifické adsorpci a tato nespecificky adsorbovaná interferující látka by měla být během praní vymyta. Přidání Tweenu do promývací kapaliny může zlepšit prací účinek. Pokud promytí není důkladné, zejména v poslední době, pokud dojde k nespecifické adsorpci enzymového konjugátu, zvýší se hodnota slepého pokusu. Kromě toho v nepřímé metodě, pokud je nespecifický IgG ve vzorku adsorbován na pevné fázi, aniž by byl promyt, bude také interferovat s enzymem značenou protilátkou. Destička ELISA se obvykle promyje následujícími způsoby: 1 absorbováním reakčního roztoku, 2 naplněním destičky promývacím roztokem, 3, umístěním na 2 minuty, mírným třepáním, 4 absorpcí nebo nalitím kapaliny do otvoru a nanesením na absorpční papír. Počet promývání je obvykle 3 až 4krát a někdy dokonce 5 až 6krát. Lze také použít automatickou podložku ELISA, ale nejprve byste měli zkontrolovat skutečné použití přístroje. Každá pipeta pračky musí být také umístěna blízko dna odpovídajícího otvoru. Pro zajištění stejného mycího účinku každé díry. 5. Vývoj barvy a kolorimetrický: Teplota a doba reakce po přidání substrátu při kvantitativním stanovení by měla být stále přesná podle předpisů. Reakce však může být obecně prováděna při pokojové teplotě v kvalitativním testu. Pokud je substrát OPD, měl by být umístěn mimo světlo. Reakční doba nemusí být přísně kontrolována a někdy lze zastavovací roztok přidat v čase podle zbarvení pozitivní kontroly a negativní kontroly. Pro zajištění stejné reakční doby pro každou jamku by měl být postup a rychlost přidávání zastavovacího roztoku stejná jako při přidávání substrátu. Kvalitativní určení, jako je negativní reakce, je lehké a někdy lze výsledky posuzovat vizuálně. Destička ELISA obecně používá čtečku enzymových značek ke čtení absorbance při specifikované vlnové délce. Automatická čtečka štítků by měla být před použitím testována na kompatibilitu s jamkami použité destičky ELISA a opakovatelnost výsledků. Pokud je kolorimetrický, nejprve zkontrolujte nulový bod destilovanou vodou, odečtěte póry substrátu (póry bez jakékoli reakce a pouze přidejte substrát) a prázdné jamky (póry měřené fyziologickým roztokem nebo PBS namísto vzorku pro celý proces), abyste zaznamenali tuto dobu. Stav činidla v testu. Poté lze prázdnou díru použít ke kalibraci nulového bodu a odečíst absorbanci díry vzorku, standardní díry a kontrolního otvoru. Pokud je nulový bod stále korigován destilovanou vodou, měla by se absorbance výše uvedených otvorů při výpočtu odečíst od absorbance slepých otvorů. Nevhodné pro dav Nevhodné osoby: Obecně neexistují lidé, kteří nejsou vhodní. Nežádoucí účinky a rizika Žádné nežádoucí účinky.