elektroforéza hemoglobinu

Různé isoelektrické body různého hemoglobinu mají v určitém pH pufru různé kladné a záporné náboje a hemoglobin se po elektroforéze pohybuje v různých směrech. Základní informace Specializovaná klasifikace: klasifikace vyšetření růstu a vývoje: vyšetření krve Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Tipy: Před vyšetřením je strava lehká a alkohol je zakázán. Normální hodnota Metoda elektroforézy byla HbA 95%, HbA 21,1% až 3,2% a HbA 32% až 3%. Singerova metoda má HbF <4%. Klinický význam 1, hlavní složkou je HbS a bez HbB, lze pozorovat u srpkovité hemoglobinové choroby. 2, HbS, HbF a HbA2 mírně vzrostly, zatímco HbA zřídka nebo zmizel, v kombinaci s vyšetřováním lze diagnostikovat jako HbS-β-mořská anémie, běžnější ve Středomoří. 3, kromě HbS, obsahující 10% -30% HbA a mírně zvýšené HbF a HbA2, lze také zvážit HbS-P-mořskou anémii. 4. HbS představuje 20% -30%, HbA 65% -75% a obsahuje normální HbF a HbA2, které lze diagnostikovat jako HbS-α-mořská anémie. 5, HbA zmizí, HbC představuje 28% - 44% z celkového hemoglobinu, lze diagnostikovat jako hemoglobinové onemocnění, častější u černochů, více cílových buněk lze vidět v krvi. 6, tam je HbS, HbD také se objevuje, tam jsou cílové buňky v krevním filmu, může být diagnostikována jako hemoglobin D onemocnění, častější v severní Číně. 7, HbE vede k elektroforéze, lze diagnostikovat jako onemocnění hemoglobinu E, vyskytující se hlavně v jihovýchodní Asii, Indii atd., Čína je běžnější v jižním Guangdongu. Opatření Přímá kolorimetrie na voskové kyselinové vláknové membráně Činidlo: Elektroforéza s mikrohemoglobinem z membrány acetátu celulózy. Provoz: (1) Membrána z acetátu celulózy byla nařezána na 1/3 (4 cm x 8 cm) v TEB pufru po dobu 10 minut nebo více. (2) Odstraňte film z acetátu celulózy a k odstranění přebytečné vody použijte filtrační papír. 10 μl 100 g / l rozpuštěné krve bylo absorbováno pomocí Hb pipety a rovnoměrně naneseno na spodní okraj tlačného skla a bylo umístěno na matnou stranu ve vzdálenosti 1,5 až 2,0 cm od katodového konce filmu. Vytvořte dvě kopie každého vzorku současně. (3) Elektroforéza: Pufr je elektroforézován stopovým množstvím hemoglobinu. Napětí je 180 V a doba je 40 minut ~ 1 h. (Buňky jsou v každé zóně jasně odděleny.) Po elektroforéze jsou elektrody vyměněny a pufr lze opakovaně použít. (4) Eluce a kvantifikace HbA, HbA2 a kontrolní zóna odpovídající velikosti HbA2 byly odděleny. Pokud jsou zároveň narezány také neobvyklé zóny Hb (HbX), umístí se do odpovídajících zkumavek. Do zkumavky HbA přidejte 10 ml TEB pufru, do každé zkumavky přidejte 2 ml TEB pufru, nechejte jej 30 minut promíchat a neustále protřepávejte. Po úplném vymytí. Eluát byl smíchán a 721 spektrofotometr s vlnovou délkou 413 nm. Polotovar se vynuluje a změří se absorbance každé zkumavky. Proces inspekce (1) Elektroforéza stopového hemoglobinu: 1 ponorný film: Fólie z acetátu celulózy se vznáší na povrchu pufru TEB a po rovnoměrném namočení a potopení se může používat po dobu nejméně 20 minut. Tím se zabrání tvorbě bublin. 2 Tečka: Odstraňte film z acetátu celulózy a použijte přebytečnou vodu pomocí filtračního papíru. Hemoglobinový roztok byl nasát do mikropipety a umístěn do konkávní drážky aplikátoru pro více vzorků Hemoglobinový roztok byl odebrán pipetou pro více vzorků a nanesen na matnou stranu filmu z acetátu celulózy. 1,5 až 2 cm od konce katody je množství špinění přibližně 3 až 5 μl a jako kontrola se použije normální roztok hemoglobinu v paralelní poloze. 3 Elektroforéza: Přidejte stejné množství roztoku pufru BB do vyrovnávací nádrže na obou stranách nádrže na mikroelektroforézu a použijte dvouvrstvý filtrační papír jako solný můstek na membránovém nosiči acetátu celulózy. Film byl matný ke dnu a záporná elektroda byla zakončena bodkou a ekvilibrována po dobu 5 minut. Zapněte napájení. Napětí je 180 V, aktuální množství je asi 0,2 mA / cm a doba elektroforézy je 20 až 30 minut. Pufr v nádrži lze znovu použít po přepnutí elektrod. 4 Barvení: Elektroforézní film byl vyjmut v barvicím roztoku Ponceau red po dobu asi 10 minut a několikrát propláchnut 3% kyselinou octovou, dokud nebylo pozadí bílé a vysušeno. 5 Transparentní: Film z acetátu celulózy je namočen do průhledné kapaliny, přilepen na čisté skleněné desce a bubliny mezi nimi jsou odstraněny skleněnou tyčí. Malé množství ledové kyseliny octové bylo nalito do chromatografického válce a skleněná deska byla obráceně zakryta na chromatografickém válci (film směřující dovnitř). Kouřte těkavou ledovou kyselinou octovou po dobu 10 až 20 minut, a pokud je průhledná, film odstraňte. (2) Kolorimetrická metoda s membránovou elektroforézou na celulosovém acetátu: 1 Odstraňte 4 cm x 6 cm membránu z acetátu celulózy namočenou v TEB pufru a přebytečnou vodu osušte filtračním papírem. Ve vzdálenosti 1,5 cm od katodového konce matného povrchu bylo lineárně a rovnoměrně naplněno hemoglobinovou pipetou asi 5 μl roztoku Hb 50 g / l. Poté, co roztok hemoglobinu pronikl do membrány, byla membrána převrácena na můstek filtračního papíru na nosné desce pro elektroforézu. 2 Elektroforéza: napětí 180 V, čas 30 ~ 40 minut, s výhradou úplného oddělení zón Hb. Elektroda je vyměněna po elektroforéze a elektroforetický pufr může být použit vícekrát. 3 Barvení: Fólie je ponořena do barvicího roztoku, musí být barvena 2 hodiny v zimě a 25 ~ 30 ° C v létě, může být barvena pouze 30 minut. Všimněte si, že pokud barvení není transparentní (jako je čas příliš krátký nebo je roztok hemoglobinu příliš koncentrovaný), nebo je-li příliš vysoké napětí, je pásmo HbA příliš koncentrované a pásek je snadno odloupnut, což ovlivňuje přesnost kvantifikace. Promyjte bělícím roztokem několikrát, dokud není pozadí opláchnuto. 4 Kvantifikace: Opláchnutá membrána byla vyjmuta a každá zóna byla odříznuta a do každé odpovídající zkumavky byla umístěna kontrolní zóna odpovídající velikosti HbA2. Do zkumavky HbA bylo přidáno 10 ml výluhu a zbývající zkumavky byly ponořeny do 2 ml, namočeny po dobu 20 minut a čas od času protřepávány. Stuhu nechejte zcela eluovat (všimněte si, že při vyšších teplotách by doba eluování neměla být příliš dlouhá, jinak se eluční modrá sníží a postupně zčervená). Eluát byl smíchán a absorbance každé zkumavky byla měřena pomocí spektrofotometru 721 při vlnové délce 620 nm a vynulováním slepým pokusem. 5 výpočet: stejná přímá kolorimetrie. Přímá kolorimetrie na voskové kyselinové vláknové membráně Činidlo: Elektroforéza s mikrohemoglobinem z membrány acetátu celulózy. Provoz: (1) Membrána z acetátu celulózy byla nařezána na 1/3 (4 cm x 8 cm) v TEB pufru po dobu 10 minut nebo více. (2) Odstraňte film z acetátu celulózy a k odstranění přebytečné vody použijte filtrační papír. 10 μl 100 g / l rozpuštěné krve bylo absorbováno pomocí Hb pipety a rovnoměrně naneseno na spodní okraj tlačného skla a bylo umístěno na matnou stranu ve vzdálenosti 1,5 až 2,0 cm od katodového konce filmu. Vytvořte dvě kopie každého vzorku současně. (3) Elektroforéza: elektroforéza pufru a mikro hemoglobinu. Napětí je 180 V a doba je 40 minut ~ 1 h. (Buňky jsou v každé zóně jasně odděleny.) Po elektroforéze jsou elektrody vyměněny a pufr lze opakovaně použít. (4) Eluce a kvantifikace HbA, HbA2 a kontrolní zóna odpovídající velikosti HbA2 byly odděleny. Pokud jsou zároveň narezány také neobvyklé zóny Hb (HbX), umístí se do odpovídajících zkumavek. Do zkumavky HbA přidejte 10 ml TEB pufru, do každé zkumavky přidejte 2 ml TEB pufru, nechejte jej 30 minut promíchat a neustále protřepávejte. Po úplném vymytí. Eluát byl smíchán a 721 spektrofotometr s vlnovou délkou 413 nm. Polotovar se vynuluje a změří se absorbance každé zkumavky. Nevhodné pro dav Žádná tabu. Nežádoucí účinky a rizika Riziko infekce: Používáte-li nečistou jehlu, můžete být vystaveni riziku infekce.