B lymfocytární povrchové markery

Testování humorální imunitní funkce je typ testu, při kterém laboratoř vyhodnocuje jednotlivé humorální imunitní funkce. Detekce humorální imunitní funkce je založena na základních procesech humorální imunity, včetně detekce B lymfocytů, Ig detekce a detekce funkcí produkce protilátek. Základní informace Odborná klasifikace: klasifikace růstu a vývoje: imunologické vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: ne půst Tipy: Pokud vzorek nelze pozorovat v den, buňky se suspendují ve fluorescenčním roztoku pro uchování protilátek, uloží se při 4 ° C a odpočítají se následující den. Normální hodnota Průměrný IgM byl 11,2 ± 6,0%, průměrný IgG byl 7,5 ± 3,3%. Klinický význam Snížení počtu B buněk souvisí s humorální imunodeficiencí a zvýšení počtu B buněk souvisí s maligní proliferací B buněk. Opatření (1) Přítomnost aglomerovaného IgG ve fluorescenčním protilátkovém činidle a aglomerovaný IgG může být falešně pozitivně vázána k Fc receptoru na povrchu B buňky. Proto, aby se zabránilo aglomeraci IgG, je třeba věnovat pozornost: 1 Fluorescenční protilátky s nadměrným molárním poměrem F / P nelze použít a obecně se dává přednost 1 až 3. 2 Fluorescenční protilátky obsahující proteiny s nízkou koncentrací jsou nestabilní při nízké teplotě a neměly by být nižší než 2 mg / ml. 3 Fluorescenční protilátky uchovávané při nízké teplotě by neměly být opakovaně zmrazovány a rozmrazovány a před použitím odstředěny po dobu 30 minut při 150 000 r / min, aby se odstranily agregáty. (2) Pokud jsou pro imunofluorescenční barvení použity živé lymfocyty, přidá se NaN3 ke všem činidlům (značená protilátka, Hankův roztok atd.), Aby se omezila tekutost buněčné membrány. Jinak dojde k fluorescenci a fagocytóze podobné čepici a sníží se skutečný počet fluorescenčních buněk. (3) Když je imunitní komplex antigen-protilátka (IgG typu) obsažený ve vzorku obarven anti-IgG fluorescenční protilátkou, váže se na Fc receptor na povrchu B buňky a je fluorescenčně pozitivní. Z tohoto důvodu bylo navrženo barvení fluorescenčně značenou anti-F (ab) 2 protilátkou, aby se vyloučily Fc receptory z barvení. V posledních letech bylo v důsledku příchodu monoklonálních protilátek proti molekulám specifickým pro povrch B lymfocytů (CD19, CD20 atd.) Tendence používat fluoresceinem značené monoklonální protilátky proti CD19 nebo CD20 pro přímou reakci s lymfocyty periferní krve; Monoklonální protilátky (primární protilátky) CD19 a CD20 se nejprve nechají reagovat s lymfocyty, poté se kombinují s králičí nebo kozí anti-myší IgG (druhá protilátka) značenou fluoresceinem, počítají se fluorescenční mikroskopií nebo průtokovou cytometrií, aby se spočítala periferní krev. B lymfocyty. Proces inspekce (1) Vezměte heparinový antikoagulant 2 ml, přidejte stejné množství Hankovy kapaliny a dobře promíchejte. Opakujte vrstvu na stratifikovaném roztoku, 2000 r / min, odstřeďte po dobu 20 minut. Vrstva lymfocytů byla vyjmuta, byl přidán Hankov roztok, promyt 3krát, 1200 r / min, odstředěn po dobu 10 minut, koncentrace lymfocytů byla upravena na 1 x 107 / ml a 0,1 ml bylo rozděleno do dvou zkumavek. (2) Promyjte lymfocytovou suspenzi ještě jednou Hankovým roztokem, odstraňte supernatant a pomocí filtračního papíru odstraňte zbývající tekutinu z vnitřní stěny zkumavky a přidejte 2 kapky králičí anti-lidské IgG a anti-lidské IgM fluorescenční protilátky (asi 0,08 ml). Po jemném protřepání umístěte inkubátor při 37 ° C na 30 min. (3) Vyjměte z inkubátoru a dvakrát promyjte Hankovým roztokem, odstřeďujte při 1000 r / min po dobu 10 minut, opatrně absorbujte veškerý supernatant, přidejte 1 kapku 50 ml PBS pufrovaného glycerinu na dno zkumavky, promíchejte a přidejte 1 kapku pro přidání Na sklíčku zakryjte krycí sklíčko a sledujte pod fluorescenčním mikroskopem. Nevhodné pro dav Nejsou žádná tabu. Nežádoucí účinky a rizika Žádné komplikace nebo rizika.