Test transformace PHA lymfocytů

Test transformace lymfocytů PHA je morfologická a biochemická změna, při které se T lymfocyty a mitogeny kultivují in vitro a některé malé lymfocyty se transformují do nezralých mateřských buněk a podrobí se mitóze. Metoda. Základní informace Specializovaná klasifikace: Klasifikace onkologických vyšetření: imunitní vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: ne půst Tipy: Věnujte pozornost zdravé stravě a udržujte dobrou náladu. Normální hodnota Počítání lymfocytů 200, identifikace lymfoblastů (více než 2 až 4krát více než normální lymfocyty, čirá jaderná membrána, volný jaderný plak, jemné jádro, zjevné nukleoly, hojná cytoplazma, bazofilní), přechodné Lymfocyty (menší změna objemu, pouze výše uvedené zřejmé jaderné změny), malé lymfocyty (mírně větší než červené krvinky, hustý jaderný chromatin, bez jader), byla spočítána míra konverze. Normální dermatologický konverzní poměr je vyšší než 58%. Klinický význam Snížení rychlosti transformace lymfocytů PHA je odpovědí na snížení buněčné imunitní funkce. Toto vyšetření, dermatologie, se většinou používá pro klasifikaci nemocí (jako je malomocenství), posuzování nemoci (jako jsou kožní maligní nádory), sledování účinnosti léků a některé studie imunodeficience a alergických kožních onemocnění. Abnormální výsledek Různé příznaky způsobené sníženou imunitní funkcí. Osoba, která potřebuje vyšetření, je podezřelá z příznaků malomocenství nebo malignity kůže. Opatření 1. Složení média má velký vliv na konverzní poměr, věnujte pozornost jeho efektivní době. 2. Telecí sérum by mělo být před použitím inaktivováno. 3. Při kultivaci zajistěte dostatek plynu Obecně by celkové množství tekutiny v 10 ml kultivační láhvi nemělo překročit 2 ml. 4. Nadměrná dávka PHA je toxická pro buňky, příliš nízká, aby stimulovala transformaci lymfocytů. Dávka konverzní reakce PHA by měla být stanovena před testem. 5. V experimentu by se měla provádět přísná aseptická operace, aby se zabránilo znečištění. Tabu před testem: věnujte pozornost zdravé stravě a udržujte dobrou náladu. Požadavky na kontrolu: Aktivně spolupracujte s lékařem. Proces inspekce Způsob operace: 1. Vezměte aseptický heparinový antikoagulant 0,1 ml, přidejte 1,8 ml kultivačního média pro buňky, přidejte 1 000 μg / ml PHA0,1 ml, kontrolní zkumavka bez PHA, kultivujte buňky při 37 ° C, 5% CO2 po dobu 3d, třepejte 1 denně Krát. 2. Na konci kultivace byla většina supernatantu odstraněna a bylo přidáno 8,5 g / l NH4CI 4 ml, promícháno a umístěno do vodní lázně o teplotě 37 ° C po dobu 10 minut. Centrifugujte při 3,2500 r / min po dobu 10 minut, zlikvidujte supernatant, přidejte 5 ml fixativu do pelety a nechte jej stát při teplotě místnosti po dobu 5 minut. Centrifugujte při 4 500 ot / min po dobu 10 minut, zlikvidujte supernatant, ponechejte 0,2 ml peletovaných buněk pro tabletování a rychle vyfukujte. 5. Roztok barvení Giemsa se obarví 10-20 minut, promyje se vodou a suší se. 6. Zrcadlo oleje Počítá počet buněk transformovaných ve 200 lymfocytech a vypočítává míru konverze. Výsledek se posuzuje: 1. Morfologická kritéria lymfoblastů: velikost jádra, poměr jádra k cytoplazmě, obarvení cytoplasmy a struktura jádra a přítomnost nebo nepřítomnost jader. (1) Zralé malé lymfocyty: velikost nekultivovaných malých lymfocytů je 6-8 μm, jaderné zbarvení je husté, žádné jádro, poměr jader k cytoplazmě je velký a cytoplazma je obarvena na mírnou bazofilní. (2) Přechodné lymfocyty: větší než malé lymfocyty, asi 10 ~ 20μm, jaderné zbarvení je husté, ale objevují se jádra, což je klíčový bod pro identifikaci zralých malých lymfocytů. (3) lymfoblasty: zvětší se objem buněk, asi 20 ~ 30μm, tvar není čistý, často malý výčnělek, jaderné zvětšení, uvolnění jaderného zbarvení, jsou zde 1 nebo 2 jádra, rozšíření cytoplazmy, často cytoplazma Prázdná bublina. (4) Ostatní buňky: Například po kultivaci neutrofilů po dobu 72 hodin je většina rozpadu nebo smrti fragmentace. 2. Výpočet rychlosti transformace lymfocytů Hlava, tělo a ocas byly vyšetřeny ve výše uvedené klasifikaci a bylo vypočteno procento 200 lymfocytů. Transformované lymfocyty zahrnují lymfoblasty a přechodné lymfocyty a netransformované lymfocyty odkazují na zralé malé lymfocyty. Za normálních okolností je rychlost transformace lymfocytů indukovaná PHA 60 až 80%, a pokud je 50 až 60%, je nízká a pokud je 50% nebo méně, je snížena. Podle výsledků se získá správný úsudek. Nevhodné pro dav Nevhodný dav: dočasně neznámý. Nežádoucí účinky a rizika Nejsou žádné související komplikace a rizika.