Test smíšené kultury lymfocytů

Kultura smíšených lymfocytů (MLC) je testovací metoda pro stanovení stupně kompatibility mezi receptorem a hlavním histokompatibilním antigenem dárce (antigen HLA) dárce a běžně se používá pro přizpůsobení tkáně před transplantací orgánů. Smíšená kultura lymfocytů je obousměrná smíšená kultura dárcovských a recipientních lymfocytů nebo inaktivace dárcovských lymfocytů na smíšené kultuře a rozsah buněčné odpovědi je negativně korelován se stupněm kompatibility mezi dárcem a příjemcem. Základní informace Odborná klasifikace: klasifikace růstu a vývoje: imunologické vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: ne půst Tipy: Lidé s vysokým odmítnutím by tuto kontrolu neměli provádět. Normální hodnota Konverzní poměr morfologické metody počítání je <10%. Metoda počítání izotopů porovnává cpm pro získání P> 0,05. Klinický význam Abnormální výsledky: Při transplantaci ledvin by měla být míra konverze žijících dárců <10%, míra konverze kadaverózních dárců> 10%. Shoda s nízkou reakcí může být použita pouze ve stejné šarži experimentů. Míra konverze lymfocytů 10% je kompatibilní mezi tkáněmi různých těl. Test na smíšenou kultivaci lymfocytů se používá k detekci imunitního stavu pacienta. Když se sníží počet T lymfocytů, sníží se také míra konverze. Může být použit jako metoda párování při transplantaci orgánů a kostní dřeně k výběru vhodného dárce. Pokud je konverzní poměr vysoký, použije se pro rozdíl mezi příjemcem a příjemcem. Konverzní poměr je nízký a úspěšnost po transplantaci je vysoká. Potřeba odhalit lidi: Lidé se zhoršenou imunitou nebo chybějícími. Opatření V době vyšetření: Tento test může být použit jako metoda pro screening dárců k transplantaci orgánů. Proces inspekce 1. Příprava dárcovských lymfocytů: Čerstvá periferní žilní krev byla přidána do centrifugační zkumavky obsahující roztok pro separaci lymfocytů se měrnou hmotností 1,077 v poměru 1: 1 a jemně nanesena na povrch kapaliny. Dvakrát se promyje. Obarvení trypanově modrou, počítání destiček. Upravte hustotu buněk na 2 × 109 / l, rozdělte do 3 zkumavek, odstřeďte odděleně a nechte sraženinu. Do každé zkumavky přidejte 250 μl mitomycinu (konečná koncentrace 50 mg / l) A 1,75 ml fyziologického roztoku, vodní lázeň při 37 ° C po dobu 40 minut a dvakrát promyta fyziologickým roztokem. Hustota buněk se upraví na 1 x 10 10 / l roztokem RPMI1640 obsahujícím 100 ml / l fetálního hovězího séra. Přidá se protilátka, aby se blokoval antigen. 2. Příprava lymfocytů receptoru: Čerstvá periferní žilní krev byla přidána do centrifugační zkumavky obsahující roztok pro separaci lymfocytů se měrnou hmotností 1,077 v poměru 1: 1 a jemně nanesena na povrch kapaliny. Promyjte dvakrát a upravte hustotu buněk na 1 x 1010 / l pomocí média RPMI1640 obsahujícího 120 ml / l fetálního hovězího séra. 3. Smíšená kultura lymfocytů: Připravené R a D byly přidány do 96-jamkové destičky následujícím způsobem a kultivovány v inkubátoru 50 ml / l CO2 po dobu 24 hodin při 37 ° C. Skupina A: R50 μL + D 50 μL; Skupina B: R50 μL + D50 μL + IL 2 čištění a neutralizace mAb 15 μL Skupina C: R50μL + ILp2 purifikovaná a neutralizovaná mAb 15μL; Skupina D: R50μL Každá skupina měla 3 duplicitní jamky a slepá kontrolní skupina byla 100 uL média RPMI1640. Nevhodné pro dav Nevhodné pro lidi: lidé s vysokým odmítnutím. Nežádoucí účinky a rizika Nejsou žádné související komplikace a rizika.