Serumproteinelektroforese (SPE)

Biomolekyler såsom proteiner bærer en negativ eller positiv ladning i en buffer og bevæger sig mod en anode eller en katode i et elektrisk felt, der kaldes elektroforese. På grund af deres forskellige isoelektriske punkter, forskellige molekylstørrelser, form og ladning-til-masse-forhold, har forskellige proteinmolekyler forskellig elektroforetisk mobilitet, og forskellige proteiner kan adskilles i et bestemt understøttelsesmedium. Almindeligt anvendte elektroforeseteknikker inkluderer celluloseacetatmembranelektroforese, agarosegelelektroforese, polyacrylamidgelelektroforese og immunoelektroforese. Derudover har multiple myelomer ofte M globulinbånd mellem beta globulinregionen og gamma globulinregionen; dobbelt albuminæmi viser et dobbelt albuminbånd. Grundlæggende information Specialistklassificering: vækst og udviklingskontrolklassificering: biokemisk undersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Inkluderet genstande: serum β2 microglobulin (β2-MG), serum α2-makroglobulin, serum α1-mikroglobulin Tips: fastende 12 timer, venøs blodprøve, prøver skal være frisk blod. Før testen skal du informere lægen om de lægemidler, du har taget for nylig, og om de nylige fysiologiske ændringer. Normal værdi Celluloseacetatmembranelektroforese-albumin 0,61 ~ 0,71 (61% ~ 71%), α1 globulin 0,03 ~ 0,04 (3% ~ 4%), α2 globulin 0,06 ~ 0,10 (6% ~ 10%), beta-globulin 0,07 til 0,11 (7% til 11%) og gammaglobulin 0,09 til 0,18 (9% til 18%). Klinisk betydning 1 findes albuminreduktion ved kronisk hepatitis, skrumpelever, leverkræft og så videre. 2, α1 globulin (glycoprotein) steg i primær levercancer. Det reduceres ved svær hepatitis, skrumpelever og leverkoma og er positivt korreleret med albumin. Bestemmelsen af ​​α1 globulin ved leversygdom har referenceværdi til at bedømme sværhedsgraden og prognosen for hepatitis. Generelt indikerer stigningen af ​​α1 globulin, at tilstanden er mild, og faldet af α1 globulin indikerer, at tilstanden er tungere. Ved alvorlig leversvigt kan serumindholdet reduceres markant. 3. Der var ingen signifikant ændring i det indledende trin af α2 globulin viral hepatitis og steg gradvist efter en uge Subakut hepatitis og akut levernekrose og dekompenseret cirrhose blev reduceret. 4 steg beta-globulin i fedtlever, hyperlipidæmi, nefrotisk syndrom, diabetes med hypercholesterolæmi, obstruktiv gulsot, maligne tumorer. Ved cholestasis leversygdom øges indholdet parallelt med stigningen i α2 globulin. Nedsat ved akut og kronisk hepatitis faldt cirrhose, især dekompenseret cirrhose og nekrotisk skrumpelever mest. 5, gammaglobulin steg ved kronisk hepatitis, skrumpelever, lever- og galdeblæresygdom. Typisk cirrhose kan ses i fusionen af ​​ß- og y-bånd til dannelse af en β-y-bro. Ændringer i gammaglobulin hos patienter med leversygdom kan afspejle alvorligheden af ​​tilstanden. Efterhånden som tilstanden forbedres, kan indholdet gradvist falde til det normale. Hvis det fortsætter med at falde på et højt niveau, indikerer det, at tilstanden er alvorlig, prognosen er dårlig, og der er en tendens til at udvikle kronisk hepatitis og skrumplever. Derudover kan infektion, schistosomiasis, multiple myelomer, bindevævssygdom osv. Også forhøjes. Reducer forekomsten af ​​gammaglobulinmangel, delvis kemoterapipatienter. Derudover har multiple myelomer ofte M globulinbånd mellem beta globulinregionen og gamma globulinregionen; dobbelt albuminæmi viser et dobbelt albuminbånd. Lave resultater kan være sygdomme: høje resultater af kolestatisk gulsot kan være sygdomme: levercirrose, primær leverkræft, multiple myelomer hos ældre 1, fastende 12 timer, venøs blodprøve, prøver skal være frisk blod. 2. Før testen skal du informere lægen om de medikamenter, du har taget for nylig, og om de nylige fysiologiske ændringer. 3. Fysiologisk forhøjelse kan forekomme i følgende tilfælde: (1) Stigningen i α1-globulin kan ses efter 6 måneders drægtighed. (2) Stigningen af ​​α2-globulin kan ses hos spædbørn født 1 til 6 måneder med en moderat stigning i 4 til 6 måneders graviditet og en betydelig stigning i 7 til 9 måneder. (3) β-globulinforøgelse ses hos babyen efter fødslen, 4 til 6 måneders graviditet. (4) Forøgelsen af ​​y-globulin ses efter vaccinationsvaccinationen. Inspektionsproces 1. Sæt pufferen i elektroforesetanken, og juster bufferen i tanke på begge sider for at gøre dem i samme plan. 2. Forberedelse af celluloseacetatfilm: Tag en celluloseacetatfilm (2 cm × 8 cm) og træk en vandret linje med en blyant på 1,5 cm (den ene side af den negative side) af den ru overflade for at få et prikket mærke. Efter nummerering og indikering af de positive og negative elektroder blev filmen nedsænket i barbiturat-barbital-natriumbufferopløsningen, og efter at være blevet tilstrækkelig mættet (sædvanligvis 20 minutter) blev overskydende buffer fjernet ved at klemme det rene filterpapir. 3. Celluloseacetatfilmhåret fastgøres til holderen til elektroforese og rettes. Pipette 3 ~ 5μl ikke-hæmolytisk serum med en mikropipette og tilsæt den langs den vandrette linje ved den vandrette linje. Prøven skal holdes i en bestemt afstand fra kanten af ​​filmen for at undgå deformation af proteinbåndet i elektroforesemønsteret. Efter at serumet trænger ind i filmen, vendes filmen. Når den lyse side vender opad, skal du sætte den fladt på elektroforesetankbeslaget, og forbind de to ender af filmen til pufferen med dobbeltlagsfilterpapir eller fire lag gasbind, og vent et stykke tid. 4, tænd for strømmen, vær opmærksom på de positive og negative elektroder på celluloseacetatfilmen, tilslut ikke forkert. Spænding 90 ~ 150v, strøm 0,4 ~ 0,6 mA / cm (forskellig elektroforese kræves spænding, strøm kan være forskellig, skal være fleksibel), sommerenergi 45 min, vinterens starttid er lidt længere, ca. 60 minutter, elektroforesezoneudvidelse ca. 25 ~ 35mm kan være. 5, farvning: Når kraften er afsluttet, fjernes filmen og nedsænkes direkte i Lichunhong S-farvestofopløsningen eller den aminosorte 10B-farvningsopløsning, farves i 5 til 10 minutter (ved albuminzonen), og skyll derefter det resterende i skylleopløsningen. Farve indtil baggrunden er farveløs. 6, kvantitativ: 1 kolorimetrisk metode: sprøjt den skyllede film, skær det farvede proteinområde i det tilsvarende rør, tilsæt 0,6 ml / l natriumhydroxid 6 ml i albuminrøret (beregne absorbansen ganget med 2), resten Tilsæt 3 ml til hvert rør, ryst det flere gange, og anbring det i en vandtank på 37 ° C i 20 minutter for at få dens farveudvaskning. Amino Black 10B-farvning Absorbansen af ​​hvert rør blev aflæst ved 620 nm under anvendelse af et spektrofotometer, og derefter blev indholdet af hvert rør beregnet (samtidig blindrørkontrol). Når Lichunhong S blev farvet, blev udvaskningen behandlet med 0,1 mol / l natriumhydroxid, og mængden var den samme som ovenfor. Efter 10 minutter tilsættes 0,6 ml 400 ml / l eddikesyre til albuminrøret (gang absorbansen med 2), og tilsæt 0,3 ml til de andre rør for at neutralisere noget af natriumhydroxidet for at gøre farven dybere. Om nødvendigt centrifugeres og tag supernatanten. Absorbansen af ​​hvert rør blev aflæst ved 520 nm ved et spektrofotometer (samtidig blank kontrol), og derefter blev det respektive indhold beregnet. 2 Densitometer-scanningsmetode: A. Gennemsigtig: Aspirér skyllevæsken på filmen (for at forhindre, at den gennemsigtige væske fortyndes for at påvirke det gennemsigtige resultat), nedsænk filmen i den gennemsigtige væske i 2 til 3 minutter, tag den derefter ud og flad den på en rullende måde. Rengør det ridsefrie glasstykke (skab ikke bobler), sæt objektglasset et stykke tid, fjern overskydende gennemsigtig væske, anbring det i en ovn ved en konstant temperatur fra 90 ° C til 100 ° C, bages i 10 til 15 minutter, fjern og afkøl til Ved stuetemperatur er proteinområderne, der er gennemsigtige ved denne metode, adskilte, filmen er flad og kan direkte scannes og permanent konserveres (gennemsigtig med brintnaphthalen eller flydende paraffin. Den skyllede film skal tørres og gennemsigtig, og den gennemsigtige film kan ikke være gennemsigtig) Det varer i lang tid og er tilbøjelig til rynker). B. Scanningskvantificering: Den gennemsigtige film placeres i et fuldautomatisk densitometer eller et andet densitometer mørkt felt til scanningsanalyse. Ikke egnet til mængden Ingen. Bivirkninger og risici Ingen.