Sekretorisk IgE i sputum

Stedet for SIgE svarer til SIgA og produceres også af plasmaceller i lamina propria i luftvejene.Det er fordelt i slimhindevæv og eksokrine væsker Disse steder er stedet for invasion af allergener og stedet for allergiske reaktioner. IgE er en monomer, 8S, 19 × 104 ku, og dens tunge kæde er længere end y-kæden. Et mere funktionelt område (CH4), der kan binde til celler (såsom mastceller, basofiler) og udløse frigivelse af intracellulære bioaktive stoffer under visse betingelser. Derfor er IgE det vigtigste antistof, der forårsager type I-allergi. . Grundlæggende information Specialistklassificering: Luftvejsundersøgelse: sputumundersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Påmindelse: Hvis hovedreagenskomponenterne forberedes forkert eller opbevares forkert, nedbrydes de let og inaktiveres. Normal værdi 0,1 til 9 mg / l. Klinisk betydning Forøgelse: IgE er monomer, 8S, 19 × 104ku, og dens tunge kæde er længere end y-kæde. Et mere funktionelt område (CH4), der kan binde til celler (såsom mastceller, basofiler) og udløse frigivelse af intracellulære bioaktive stoffer under visse betingelser. Derfor er IgE det vigtigste antistof, der forårsager type I-allergi. . Hos patienter med bronkial astma og hypersensitiv pneumonitis kan SIgE-indholdet i sputum øges. Høje resultater kan være sygdomme: bronkial astma, allergisk lungebetændelse De vigtigste reagenskomponenter i ELISA, såsom antigener, antistoffer, enzymkonjugater, substrater osv. Nedbrydes let og inaktiveres, hvis de ikke er korrekt forberedt eller forkert opbevaret. Der er mange trin i ELISA, og hvis operationen ikke er standardiseret, er det vanskeligt at opnå nøjagtige resultater. Derfor skal kvalitetskontrol udføres for hver test for at sikre testens effektivitet. De positive og negative kontroller tilvejebragt i de fremragende sæt kan generelt bruges som kvalitetskontrol af testen I henhold til instruktionerne kan testens effektivitet bedømmes ud fra de opnåede absorbansværdier. Ved at tage den mest almindeligt anvendte HBsAg-test i kliniske test som eksempel, skal den negative kontrol i sættet være HBsAg-negativt humant serum, og den positive kontrol bør indikere HBsAg-indhold (f.eks. 9 ± 2 ng / ml). Der skal foretages tre negative kontroller og to positive kontroller samtidigt for hver batch af test. Absorbansværdien opnået ved den negative kontrolassay skal være mindre end en bestemt værdi (for eksempel 0,100), og middelværdien af ​​den positive kontrolabsorbering minus den negative kontrolabsorbans bør være større end en bestemt værdi (for eksempel 0,200). Disse værdier er specifikke eksperimentelle værdier for kittet under de specificerede assaybetingelser. Hvis testresultaterne opfylder kravene, angiver det derfor både effektiviteten af ​​de anvendte reagenser og operationens korrekthed. Kun i dette tilfælde er batch-testen effektiv. Nogle af de positive og negative kontroller, der er indeholdt i sættet, opfylder ikke kravene til kvalitetskontrol eller laboratoriets målebetingelser, som f.eks. Kolorimeter, osv., Og forskellen i kittbeskrivelsen, den korrekte kvalitet skal bruges i henhold til den faktiske situation. Kontroller og kvalitetskontrolværdier fra laboratoriet afledt fra eksperimentet. Kvalitetskontrolserumet for varen er dyrt. Kvalitativ bestemmelse af ELISA-kvalitetskontrolprodukter kan generelt udarbejdes af dem selv. HBsAg-testen er stadig taget som et eksempel. Negativ kontrol kan udføres fra bloddonorer, som er HBsAg-negative med reagenser af høj kvalitet. Den positive kontrol kan fremstilles ved at tilsætte en passende mængde HBsAg-positivt serum til det negative kontrolserum og sammenligne det blandede serum med en referencestandard eller en kvantitativ kontrol til bestemmelse af HBsAg-indholdet. Derefter udføres passende fortynding til opnåelse af HBsAg-positivt serum med den ønskede koncentration, hvorefter der tilsættes en passende mængde antibakterielle konserveringsmidler, såsom gentamicin og salicylsyre, og derefter kryokonserveres ved en lav temperatur. Inspektionsproces ELISA er en multi-reaktions, multi-reagens, flertrins testmetode, der skal omhyggeligt og omhyggeligt betjenes i henhold til kravene, ellers opnås ikke nøjagtige resultater. ELISA-procedurerne, der bruges til at detektere forskellige genstande, er lidt forskellige, men inkluderer trin, såsom indlæsning, opbevaring, vask og kolorimetri. Funktionspunkterne for hvert trin er beskrevet nedenfor. 1. Reagensforberedelse: Fortynd eller forbered de nødvendige reagenser til testen i henhold til instruktionerne i sættet. Destilleret eller deioniseret vand, der bruges i ELISA, inklusive til vask, skal være frisk og af høj kvalitet. Den selvstændige buffer skal måles med et pH-meter. Temperaturen på testreagenset, der er taget ud af køleskabet, skal bruges, når rummet er nået. I test, der bruger HRP som markør, er containere, der er kontamineret med metal, ikke tilgængelige. 2. Indlæsning: Forbered en god ELISA-plade efter behov. Prøver af serum (skindvæske) skal opsamles frisk eller opbevares korrekt i køleskabet. Der bør ikke bruges meget hæmolyserede eller uklare prøver. Prøver, der indeholder natriumazid som konserveringsmiddel, er ikke tilgængelige for et-trins ELISA til HRP-mærkning. Når du tilføjer prøven, skal du tilføje prøven i bunden af ​​hullet, undgå at tilføje den til den øverste del af hulvæggen, og pas på, at du ikke sprøjter den, og der bør ikke vises luftbobler. Nøjagtigheden af ​​den mængde prøve, der er tilføjet i den kvantitative bestemmelse, skal opfylde de kvantitative krav. I den kvalitative måling fremhæves nøjagtigheden af ​​mængden af ​​prøven undertiden ikke, for eksempel foreskrives den som en dråbe. På dette tidspunkt skal du bruge dropper med samme diameter og opretholde den korrekte belastningsposition, så volumen for hver dråbe stort set er den samme. Betjeningen og kravene til tilsætning af enzymkonjugatet og tilsætningen af ​​underlaget er de samme som for tilsætningen af ​​prøven. 3. Isolering: Der er generelt to antigen-antistofreaktioner i ELISA, det vil sige efter tilsætning af prøven og efter tilsætning af kombinationen. På dette tidspunkt bør reaktionens temperatur og tidspunkt være så nøjagtige som krævet. Den isolerede beholder er fortrinsvis et vandbad, og bunden af ​​ELISA-pladen skal placeres i vandet for hurtigt at afbalancere temperaturen. Hver ELISA-plade skal ikke stables sammen. For at undgå fordampning skal brættet være dækket. Pladen kan også placeres fladt i en våd kasse med vådt gasbind i bunden. Den våde kasse skal forvarmes til den specificerede temperatur, for eksempel er inkubatorens isolering vigtigere. 4, vask: vask i ELISA-processen er ikke et reaktionstrin, men besluttede at lukke nøglen til succes. Formålet med vask er at vaske stofferne i reaktionsopløsningen, der er bundet til fastfase-antigenet eller antistoffet, og de interfererende stoffer, der ikke-specifikt adsorberes til fastfasebæreren under reaktionen. Adsorption af proteiner med plast såsom polystyren er universal, så ikke-specifik adsorption bør undgås så meget som muligt under ELISA-assayet, og dette ikke-specifikt adsorberede interfererende stof bør vaskes væk under vask. Tilsætningen af ​​Tween til vaskevæsken kan forbedre vaskeeffekten. Hvis vasken ikke er grundig, især på sidste gang, hvis der ikke er specifik adsorption af enzymkonjugatet, hæves blankværdien. I den indirekte metode, hvis det ikke-specifikke IgG i prøven adsorberes på den faste fase uden at blive vasket, vil det desuden også forstyrre det enzymmærkede antistof. ELISA-pladen vaskes generelt ved hjælp af følgende metoder: 1 absorbere reaktionsopløsningen; 2 fylde pladen med vaskeopløsningen; 3, anbring den i 2 minutter, rystes lidt; 4 absorberer eller hæld væsken i hullet og klapper den på det absorberende papir. Antallet af vask er normalt 3 til 4 gange og nogle gange endda 5 til 6 gange. En ELISA-automatisk skive kan også bruges, men den faktiske brug af instrumentet skal først kontrolleres. Hver pipette på skiven skal også placeres tæt på bunden af ​​det tilsvarende hul. For at sikre den samme vaskeeffekt af hvert hul. 5. Farveudvikling og kolorimetrisk: Temperaturen og tidspunktet for reaktionen efter tilsætning af underlaget i den kvantitative bestemmelse skal stadig være nøjagtig i henhold til reglerne. Imidlertid kan reaktionen generelt udføres ved stuetemperatur i et kvalitativt assay. Hvis underlaget er OPD, skal det placeres væk fra lys. Reaktionstiden behøver ikke at kontrolleres strengt, og undertiden kan stopopløsningen tilsættes i tide i overensstemmelse med farven på den positive kontrol og den negative kontrol. For at sikre den samme reaktionstid for hver brønd, skal proceduren og hastigheden for tilsætning af stopopløsningen være den samme som når man tilsætter underlaget. Kvalitativ bestemmelse, såsom en negativ reaktion, er let, og undertiden kan resultaterne bedømmes visuelt. Plade ELISA bruger generelt en enzymmærket læser til at læse absorbans ved en specificeret bølgelængde. Den automatiske etiketlæser skal testes for kompatibilitet med brøndene på den anvendte ELISA-plade og resultaternes repeterbarhed inden brug. Når du er kolorimetrisk, skal du først kontrollere nulpunktet med destilleret vand, læse underlagsporerne (porerne uden nogen reaktion og kun tilføje underlaget) og de tomme brønde (porerne målt ved saltvand eller PBS i stedet for prøven til hele processen) for at registrere denne gang. Testets reagensstatus. Derefter kan det blanke hul bruges til at kalibrere nulpunktet, og prøvehullets, standardhullets og kontrolhullets absorbans kan læses. Hvis nulpunktet stadig korrigeres med destilleret vand, skal absorbansen af ​​de ovennævnte huller trækkes fra absorbansen af ​​de blanke huller i beregningen. Ikke egnet til mængden Upassende mennesker: Generelt er der ingen mennesker, der ikke er egnede. Bivirkninger og risici Ingen bivirkninger.