Blandet lymfocytkulturassay

Blandet lymfocytkultur (MLC) er en testmetode til bestemmelse af graden af ​​kompatibilitet mellem en receptor og en donors vigtigste histokompatibilitetsantigen (HLA-antigen) og bruges ofte til vævsmatchning før organtransplantation. Blandet lymfocytkultur er en to-vejs blandet kultur af donor- og modtagerlymfocytter eller inaktivering af donorlymfocytter til en blandet kultur, og graden af ​​cellulær respons korreleres negativt med graden af ​​donor-modtagerkompatibilitet. Grundlæggende information Specialistklassificering: klassificering af vækst og udviklingskontrol: immunologisk undersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: ikke faste Tip: Personer med høj afvisning bør ikke kontrollere dette. Normal værdi Den morfologiske tællemetode-konverteringsfrekvens er <10%. Isotopoptællingsmetoden sammenligner cpm for at opnå P> 0,05. Klinisk betydning Unormale resultater: Ved nyretransplantation bør omregningskursen for levende donorer være <10%; konverteringskursen for cadaveriske donorer skal være> 10%. Matching med lav reaktion kan kun bruges i den samme batch af eksperimenter. En lymfocytomdannelseshastighed på 10% er kompatibel mellem væv fra forskellige kroppe. Test af blandet kultur af lymfocytter anvendes til at detektere patientens immunstatus. Når antallet af T-lymfocytter reduceres, sænkes konverteringsfrekvensen også. Det kan bruges som en matchende metode til organ- og knoglemarvstransplantation til at vælge en passende donor. Hvis konverteringsfrekvensen er høj, bruges den til forskellen mellem modtager og modtager. Konverteringsfrekvensen er lav, og succesraten efter transplantationen er høj. Brug for at opdage mennesker: Mennesker med nedsat immunitet eller mangler. Forholdsregler På undersøgelsestidspunktet: Denne test kan bruges som en metode til screening af donorer til organtransplantation.De med lav konverteringsfrekvens har høj succesrate og dem med høj konverteringsfrekvens har lav succesrate. Inspektionsproces 1. Fremstilling af donorlymfocytter: Frisk perifert venøst ​​blod blev tilsat til et centrifugerør indeholdende en lymfocyt-separationsopløsning med en specifik tyngdekraft på 1.077 i et forhold på 1: 1 og påført forsigtigt på den flydende overflade. Vask to gange. Trypan-blåfarvning, tælling af tælling af plader. Juster celletætheden til 2 × 109 / L, opdelt i 3 rør, centrifugeres separat og efterlad et bundfald. Tilsæt 250 μL mitomycin til hvert rør (slutkoncentration 50 mg / L) Og 1,75 ml fysiologisk saltvand, vandbad ved 37 ° C i 40 minutter og vasket to gange med fysiologisk saltvand. Justér celletætheden til 1 × 10 10 / L med RPMI1640-opløsning indeholdende 100 ml føtalt bovint serum. Tilsæt antistoffet for at blokere antigenet. Markér som D. 2. Fremstilling af receptorlymfocytter: Frisk perifert venøst ​​blod blev tilsat til et centrifugerør indeholdende en lymfocyt-separationsopløsning med en specifik tyngdekraft på 1.077 i et forhold på 1: 1 og påført forsigtigt på den flydende overflade. Vask to gange. Juster celletætheden til 1 × 1010 / L med RPMI1640-medium indeholdende 120 ml / l føtalt bovint serum. 3. Blandet lymfocytkultur: Den fremstillede R og D blev tilsat til pladen med 96 brønde som følger og dyrket i en 50 ml / l CO2 inkubator i 24 timer ved 37 ° C. Gruppe A: R50 μL + D 50 μL; gruppe B: R50 μL + D50 μL + IL2 oprensning og neutralisering af mAb 15 μL ; Gruppe C: R50 uL + ILa 2 oprenset og neutraliseret mAb 15 uL; gruppe D: R50 uL. Hver gruppe havde 3 duplikatbrønde, og den blanke kontrolgruppe var 100 ul RPMI1640 medium. Ikke egnet til mængden Ikke egnet til mennesker: mennesker med stor afvisning. Bivirkninger og risici Der er ingen relaterede komplikationer og farer.