Électrophorèse des lipoprotéines sériques et des lipoprotéines sériques

L'électrophorèse des lipoprotéines est principalement utilisée pour la classification de l'hyperlipoprotéinémie. Il est également utile de comprendre le statut lipidique sanguin de la maladie coronarienne et de mieux orienter le diagnostic clinique et le traitement. Informations de base Classification de spécialiste: classification de l'examen cardiovasculaire: examen biochimique Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: le jeûne Résultats d'analyse: En dessous de la normale: Trouvé dans faible lipoprotéinémie et ainsi de suite. Valeur normale: Lipoprotéine de très basse densité: 0,06-0,3g / L Lipoprotéines de basse densité: 0-7g / L Lipoprotéine de haute densité (mâle): 0.41-0.63g / L Zheng à haute densité? .42-0.68g / L Au-dessus de la normale: Trouvé dans l'hyperlipidémie primaire et ainsi de suite. Négatif: Positif: Conseils: Avant l'examen, le régime est léger et l'alcool est interdit. Vérifiez l'estomac vide le matin. Valeur normale Electrophorèse sur membrane d'acétate de cellulose Particules de chardon-Marie 0g / L (0 mg / dl); Lipoprotéines de très basse densité 0,06 ~ 0,3 g / L (6 ~ 30 mg / dl); Lipoprotéines de basse densité <7 g / L (<700 mg / dl); Lipoprotéines de haute densité: Mâle 0,52 ± 0,11 g / L (43 ± 18 mg / dl); Femme 0,55 ± 0,13 g / L (47 ± 2 mg / dl). Signification clinique 1, augmenté: vu dans l'hyperlipidémie primaire. 2, inférieur: observé dans les lipoprotéinémies basses. Des résultats élevés peuvent être des maladies: hyperlipidémie, hyperlipoprotéinémie de type II, maladies coronariennes 1. Échantillon: Les lipoprotéines peuvent être isolées à partir de sérum frais non congelé. Le plasma ne convient pas à l'électrophorèse des lipoprotéines, car une bande de fibrinogène apparaîtra. 2. Les profils de lipoprotéines avec des composants de séparation clairs sont des conditions préalables à une interprétation précise. Si ces conditions sont bien remplies, l'électrophorèse des lipoprotéines et la méthode de référence (ultracentrifugation) peuvent être relativement cohérentes. La précision de chaque composant est différente et elle est estimée par le coefficient de variation, qui est généralement inférieur à 5%. 3. Parfois, les alpha-lipoprotéines disparaissent et / ou une bande étroite d’alpha-lipoprotéines apparaît. C'est parce que les acides gras libres sont dans. L'accumulation sur les alpha-lipoprotéines donne une charge égale à ces particules. Lorsque la densité de la zone a augmente, le résultat est élevé. Par rapport aux techniques de précipitation, l’électrophorèse quantitative des lipoprotéines est coûteuse. Processus d'inspection Immédiatement après la collecte de sang veineux, l'opération de test: 1. Ajoutez le tampon dans le réservoir d'électrophorèse et ajustez le tampon dans les réservoirs des deux côtés pour les placer dans le même plan. 2. Préparation du film d'acétate de cellulose: Prenez un film d'acétate de cellulose (2 cm × 8 cm) et tracez un trait horizontal avec un crayon à 1,5 cm (un côté du côté négatif) de la surface rugueuse pour faire une marque en pointillé. Après numérotation et indication des électrodes positive et négative, le film a été immergé dans la solution tampon barbiturate-barbital sodique et, après avoir été suffisamment saturé (habituellement 20 min), le tampon en excès a été éliminé en prenant en sandwich le papier filtre propre. 3. Les cheveux en film d'acétate de cellulose sont fixés au support de la cuve d'électrophorèse et redressés. Pipeter 3 ~ 5μl de sérum non hémolytique avec une micropipette et l'ajouter le long de la ligne horizontale le long de la ligne horizontale.L'échantillon doit être maintenu à une certaine distance du bord du film pour éviter toute déformation de la bande protéique dans le schéma d'électrophorèse.Lors du sérum pénètre dans le film, le film est inversé. Avec le côté de la lumière orienté vers le haut, collez-le à plat sur le support du réservoir d'électrophorèse et connectez les deux extrémités du film au tampon avec du papier filtre double couche ou quatre couches de gaze et attendez un instant. 4, allumez l'alimentation, faites attention aux électrodes positives et négatives sur le film d'acétate de cellulose, ne vous connectez pas mal. Tension 90 ~ 150V, courant 0.4 ~ 0.6mA / cm (tension différente requise électrophorèse, le courant peut être différent, doit être flexible), puissance estivale 45min, durée de mise sous tension en hiver est légèrement plus longue, environ 60min, expansion de la zone d'électrophorèse environ 25 ~ 35mm peut être. 5, teinture: Une fois l’alimentation terminée, retirez le film et immergez-vous directement dans la solution de colorant Lichunhong S ou dans la solution de coloration du noir d’amino 10B, colorez-le pendant 5 à 10 minutes (à proximité de la zone albumine), puis rincez le reste de la solution de rinçage. Teindre jusqu'à ce que le fond soit incolore. 6, quantitatif: 1 méthode colorimétrique: éponger le film rincé, couper la zone de la protéine colorée dans le tube correspondant, ajouter 0,6 ml / L d'hydroxyde de sodium 6 ml dans le tube d'albumine (calculer l'absorbance multipliée par 2), le reste Ajoutez 3 ml à chaque tube, agitez-le plusieurs fois et placez-le dans un réservoir d'eau à 37 ° C pendant 20 minutes pour lixiviation de la couleur. Coloration au noir d'amino 10B L'absorption de chaque tube a été lue à 620 nm à l'aide d'un spectrophotomètre, puis le contenu de chaque tube a été calculé (contrôle simultané du tube à blanc). Lorsque le Lichunhong S a été teint, le lixiviat a été traité avec 0,1 mol / L d'hydroxyde de sodium et la quantité était la même que ci-dessus. Après 10 minutes, ajoutez 0,6 ml d'acide acétique à 400 ml / L dans le tube d'albumine (multipliez l'absorbance par 2), puis ajoutez-en 0,3 ml dans les autres tubes pour neutraliser une partie de l'hydroxyde de sodium afin de rendre la couleur plus foncée, puis centrifuger et prélever le surnageant. L'absorbance de chaque tube a été lue à 520 nm par un spectrophotomètre (témoin à blanc simultané), puis les contenus respectifs ont été calculés. 2 Méthode de balayage au densitomètre: A. Transparent: Aspirer le liquide de rinçage sur le film (pour éviter que le liquide transparent ne soit dilué afin d’affecter le résultat transparent), plonger le film dans le liquide transparent pendant 2 à 3 minutes, puis le retirer et l’aplatir de manière lissante. Lames de verre propres et sans éraflures (ne créent pas de bulles), les dresser pendant un moment, retirer le liquide transparent en excès, les placer dans un four à une température constante de 90-100 ° C, cuire au four pendant 10-15 min, retirer et laisser refroidir à la température ambiante. Les zones protéiques transparentes selon cette méthode sont distinctes, le film est plat et peut être scanné directement et conservé en permanence (transparent avec de l'hydrogène naphtalène ou de la paraffine liquide. Le film rincé doit être séché et transparent, et le film transparent ne peut pas être stocké. Long et facile à rider). 2 Quantification par balayage: Le film transparent est placé dans un densitomètre entièrement automatique ou une autre boîte noire de densitomètre pour l'analyse par balayage. Ne convient pas à la foule Personnes inappropriées: Généralement, il n'y a pas de personnes qui ne conviennent pas. Effets indésirables et risques 1, hémorragie sous-cutanée locale: après la collecte de sang doit être pressé pendant un temps suffisant, en particulier ceux qui ont tendance à saigner, afin de ne pas provoquer de suintement sous-cutané et d'ecchymoses en raison de l'absence de coagulation du sang. 2, infection: attention aux opérations aseptiques lors de la collecte de sang veineux, afin de ne pas causer d'infection locale.