électrophorèse de l'hémoglobine

Différents points isoélectriques de différentes hémoglobines ont des charges positives et négatives différentes dans un certain tampon de pH, et l'hémoglobine se déplace dans des directions différentes après l'électrophorèse. Informations de base Classification de spécialiste: classification d'examen de croissance et de développement: analyse de sang Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: le jeûne Conseils: Avant l'examen, le régime est léger et l'alcool est interdit. Valeur normale La méthode d'électrophorèse était la suivante: HbA 95%, HbA 21,1% à 3,2% et HbA 32% à 3%. La méthode de Singer a un HbF <4%. Signification clinique 1, le composant principal est l'HbS et aucun HbB ne peut être observé dans l'hémoglobine drépanocytaire. 2, HbS, HbF et HbA2 ont légèrement augmenté, tandis que l'HbA était rare ou a disparu, ce qui, associé à l'investigation, permet de diagnostiquer une anémie HbS-β-marine, plus fréquente en Méditerranée. 3, en plus de l'HbS, contenant 10% à 30% d'HbA et légèrement augmenté d'HbF et d'HbA2, une anémie marine HbS-β-marine peut également être envisagée. 4. HbS représente entre 20% et 30%, HbA entre 65% et 75% et contient des valeurs normales d'HbF et d'HbA2, qui peuvent être diagnostiquées comme une anémie HbS-α-marine. 5, HbA disparaît, HbC représente 28% à 44% de l'hémoglobine totale, peut être diagnostiquée comme une maladie de l'hémoglobine, plus fréquente chez les Noirs, plus de cellules cibles peuvent être vues dans le sang. 6, il y a HbS, HbD apparaît également, il y a des cellules cibles dans le film sanguin, peut être diagnostiqué comme une maladie de l'hémoglobine D, plus fréquente dans le nord de la Chine. 7, les résultats de HbE en électrophorèse peuvent être diagnostiqués comme une maladie de l'hémoglobine E, principalement observée en Asie du Sud-Est, en Inde, etc. La Chine est plus répandue dans le sud du Guangdong. Précautions Colorimétrie directe électrophorèse sur membrane de fibre d'acide cireuse Réactif: Electrophorèse avec micro-hémoglobine de la membrane en acétate de cellulose. Opération: (1) La membrane en acétate de cellulose a été coupée en 1/3 (4 cm x 8 cm) dans du tampon TEB pendant 10 minutes ou plus. (2) Retirez le film d'acétate de cellulose et utilisez un papier filtre pour éliminer l'excès d'eau. 10 µl de sang dissous à 100 g / L ont été absorbés par une pipette Hb et appliqués uniformément sur le bord inférieur du poussoir de verre, puis placés sur le côté mat à une distance de 1,5 à 2,0 cm de l'extrémité cathodique du film. Faites deux copies de chaque spécimen en même temps. (3) Electrophorèse: le tampon est soumis à une électrophorèse avec une trace d'hémoglobine. La tension est de 180V et le temps est de 40min ~ 1h. (Les cellules sont clairement séparées dans chaque zone.) Après l'électrophorèse, les électrodes sont échangées et le tampon peut être utilisé à plusieurs reprises. (4) Elution et quantification HbA, HbA2 et une zone de contrôle correspondant à la taille de HbA2 ont été coupés séparément. Si des zones Hb anormales (HbX) sont également coupées en même temps, elles sont placées dans les tubes correspondants. Ajouter 10 ml de tampon TEB dans le tube HbA, ajouter 2 ml de tampon TEB dans chaque tube, laisser tremper pendant 30 min, agiter constamment. Après avoir été complètement élué. L'éluat a été mélangé avec un spectrophotomètre 721 avec une longueur d'onde de 413 nm. Le blanc est mis à zéro et l'absorbance de chaque tube est mesurée. Processus d'inspection (1) électrophorèse de trace d'hémoglobine: 1 Film d'immersion: Le film d'acétate de cellulose flotte à la surface du tampon TEB et peut être utilisé pendant au moins 20 minutes après son immersion et sa coulée uniforme. Cela empêche la génération de bulles. 2 points: Retirez le film d'acétate de cellulose et utilisez un papier filtre pour éliminer l'excès d'eau. La solution d'hémoglobine a été aspirée dans une micropipette et placée dans une rainure concave d'un applicateur à échantillons multiples, qui a été prélevée à l'aide d'une pipette à échantillons multiples et déposée sur un côté mat du film d'acétate de cellulose. 1,5 à 2 cm de l'extrémité de la cathode, la quantité de taches est d'environ 3 à 5 µl et la solution d'hémoglobine normale en position parallèle est utilisée comme témoin. 3 Électrophorèse: Ajoutez une quantité égale de solution tampon BB dans le réservoir tampon des deux côtés du réservoir de micro-électrophorèse et utilisez un papier filtre à deux couches comme pont de sel sur le support de membrane en acétate de cellulose. Le film était mat au fond et l'électrode négative était terminée par un point et équilibrée pendant 5 minutes. Allumez le pouvoir. La tension est de 180 V, la quantité de courant est d'environ 0,2 mA / cm et le temps d'électrophorèse est de 20 à 30 minutes. Le tampon dans le réservoir peut être utilisé une fois de plus après la commutation des électrodes. 4 Coloration: Le film soumis à une électrophorèse a été retiré dans la solution de coloration rouge de Ponceau pendant environ 10 minutes et rincé plusieurs fois avec de l'acide acétique à 3% jusqu'à ce que le fond soit blanc et séché. 5 Transparent: le film d'acétate de cellulose est trempé dans un liquide transparent, collé sur une plaque de verre propre et les bulles entre les deux sont éliminées à l'aide d'une tige de verre. Une petite quantité d'acide acétique glacial a été versée dans un cylindre de chromatographie et la plaque de verre a été recouverte en sens inverse sur le cylindre de chromatographie (avec le film tourné vers l'intérieur). Fumer avec de l'acide acétique glacial volatil pendant 10 à 20 minutes et retirer le film lorsqu'il est transparent. (2) Méthode colorimétrique de coloration par électrophorèse sur membrane d'acétate de cellulose: 1 Retirez la membrane en acétate de cellulose de 4 cm × 6 cm imbibée de tampon TEB et épongez l'excès d'eau avec du papier filtre. À une distance de 1,5 cm de l'extrémité cathodique de la surface mate, environ 5 µl d'une solution d'Hb à 50 g / L étaient linéairement et uniformément garnis d'une pipette pour hémoglobine.Après pénétration de la solution d'hémoglobine dans la membrane, celle-ci était inversée sur un pont en papier filtre de la plaque de support du réservoir d'électrophorèse. 2 électrophorèse: tension 180V, durée 30 ~ 40min, sous réserve de la séparation complète des zones Hb. L'électrode est échangée après l'électrophorèse et le tampon d'électrophorèse peut être utilisé plusieurs fois. 3 Teinture: Le film est immergé dans la solution de teinture. Il doit être teint pendant 2 heures en hiver et à une température comprise entre 25 et 30 ° C en été. Il ne peut être teint que pendant environ 30 minutes. Notez que si la coloration n'est pas transparente (par exemple, le temps est trop court ou la solution d'hémoglobine est trop concentrée), ou si la tension est trop élevée, la bande HbA est trop concentrée et le ruban se décolle facilement, ce qui affecte la précision de la quantification. Lavez plusieurs fois avec une solution de blanchiment jusqu'à ce que le fond soit rincé. 4 Quantification: La membrane rincée a été retirée et chaque zone a été coupée et une zone de contrôle correspondant à la taille de HbA2 a été placée dans chaque tube à essai correspondant. 10 ml du lixiviat ont été ajoutés au tube HbA et les tubes restants ont été immergés dans 2 ml, trempés pendant 20 minutes et agités de temps en temps. Faites éluer le ruban complètement (notez qu'à des températures plus élevées, le temps d'élution ne doit pas être trop long, sinon le bleu d'éluant diminuera et virera progressivement au violet). L'éluat a été mélangé et l'absorbance de chaque tube a été mesurée en utilisant un spectrophotomètre 721 à une longueur d'onde de 620 nm et une remise à zéro avec un blanc. 5 calcul: même colorimétrie directe. Colorimétrie directe électrophorèse sur membrane de fibre d'acide cireuse Réactif: Electrophorèse avec micro-hémoglobine de la membrane en acétate de cellulose. Opération: (1) La membrane en acétate de cellulose a été coupée en 1/3 (4 cm x 8 cm) dans du tampon TEB pendant 10 minutes ou plus. (2) Retirez le film d'acétate de cellulose et utilisez un papier filtre pour éliminer l'excès d'eau. 10 µl de sang dissous à 100 g / L ont été absorbés par une pipette Hb et appliqués uniformément sur le bord inférieur du poussoir de verre, puis placés sur le côté mat à une distance de 1,5 à 2,0 cm de l'extrémité cathodique du film. Faites deux copies de chaque spécimen en même temps. (3) Electrophorèse: électrophorèse de tampon et de micro hémoglobine. La tension est de 180V et le temps est de 40min ~ 1h. (Les cellules sont clairement séparées dans chaque zone.) Après l'électrophorèse, les électrodes sont échangées et le tampon peut être utilisé à plusieurs reprises. (4) Elution et quantification HbA, HbA2 et une zone de contrôle correspondant à la taille de HbA2 ont été coupés séparément. Si des zones Hb anormales (HbX) sont également coupées en même temps, elles sont placées dans les tubes correspondants. Ajouter 10 ml de tampon TEB dans le tube HbA, ajouter 2 ml de tampon TEB dans chaque tube, laisser tremper pendant 30 min, agiter constamment. Après avoir été complètement élué. L'éluat a été mélangé avec un spectrophotomètre 721 avec une longueur d'onde de 413 nm. Le blanc est mis à zéro et l'absorbance de chaque tube est mesurée. Ne convient pas à la foule Pas de tabous. Effets indésirables et risques Risque d'infection: Si vous utilisez une aiguille malpropre, vous courez un risque d'infection.