Marqueurs de surface des lymphocytes B

Le test de la fonction immunitaire humorale est un type de test dans lequel le laboratoire évalue la fonction immunitaire humorale individuelle. La détection de la fonction immunitaire humorale repose sur les processus fondamentaux de l'immunité humorale, notamment la détection des lymphocytes B, la détection des Ig et la détection des fonctions de production d'anticorps. Informations de base Classification de spécialiste: classification de contrôle de croissance et de développement: examen immunologique Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: pas le jeûne Conseils: Si l'échantillon ne peut pas être observé le jour même, les cellules seront suspendues dans la solution de conservation des anticorps fluorescents, stockées à 4 ° C et comptées le lendemain. Valeur normale L'IgM moyenne était de 11,2 ± 6,0% et l'IgG moyenne de 7,5 ± 3,3%. Signification clinique La diminution du nombre de cellules B est liée au déficit immunitaire humoral et l'augmentation du nombre de cellules B est liée à la prolifération maligne des cellules B. Précautions (1) La présence d'IgG agglomérée dans le réactif d'anticorps fluorescent et d'IgG agglomérée peut être liée de manière fausse positive au récepteur Fc à la surface de la cellule B. Par conséquent, afin d'éviter l'agglomération d'IgG, il est nécessaire de porter une attention particulière aux points suivants: 1 Les anticorps fluorescents avec un rapport molaire F / P excessif ne peuvent pas être utilisés, et on préfère généralement 1 à 3. 2 Les anticorps fluorescents contenant des protéines de faible concentration sont instables à basse température et ne doivent pas être inférieurs à 2 mg / ml. 3 Les anticorps fluorescents stockés à basse température ne doivent pas être congelés-décongelés à plusieurs reprises, et centrifugés pendant 30 min à 150 000 r / min avant utilisation pour éliminer les agrégats. (2) Lorsque des lymphocytes vivants sont utilisés pour la coloration par immunofluorescence, du NaN3 est ajouté à tous les réactifs (anticorps marqué, solution de Hank, etc.) afin de limiter la fluidité de la membrane cellulaire. Sinon, une fluorescence et une phagocytose analogues à un capuchon se produiront et le nombre réel de cellules fluorescentes diminuera. (3) Lorsqu'il est coloré avec un anticorps fluorescent anti-IgG, le complexe immunitaire antigène-anticorps (type IgG) contenu dans l'échantillon se lie au récepteur Fc à la surface du lymphocyte B et présente une fluorescence positive. Pour cette raison, il a été suggéré de colorer avec l'anticorps anti-F (ab) 2 marqué par fluorescence afin d'empêcher les récepteurs Fc d'être colorés. Ces dernières années, en raison de l'apparition d'anticorps monoclonaux dirigés contre des molécules spécifiques de la surface des cellules B (CD19, CD20, etc.), on a eu tendance à utiliser des anticorps monoclonaux marqués à la fluorescéine dirigés contre CD19 ou CD20 pour réagir directement avec les lymphocytes du sang périphérique. Les anticorps monoclonaux (anticorps primaires) de CD19 et de CD20 réagissent d'abord avec des lymphocytes, puis sont combinés à une IgG anti-souris de lapin ou de chèvre marquée à la fluorescéine (second anticorps), comptés par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux pour compter le sang périphérique. Lymphocytes B Processus d'inspection (1) Prendre 2 ml d'anticoagulant pour héparine, ajouter une quantité égale de liquide de Hank et bien mélanger.Répéter la couche sur la solution stratifiée à 2000 tr / min, centrifuger pendant 20 min. La couche de lymphocytes a été retirée, la solution de Hank a été ajoutée, lavée 3 fois, 1 200 tr / min, centrifugée pendant 10 min, la concentration en lymphocytes a été ajustée à 1 x 107 / ml et 0,1 ml a été distribué dans deux tubes. (2) Lavez encore une fois la suspension de lymphocytes avec la solution de Hank, jetez le surnageant et utilisez le papier-filtre pour retirer le liquide restant de la paroi interne du tube, puis ajoutez 2 gouttes d'IgG anti-humain et d'anticorps fluorescent IgM anti-humain de lapin (environ 0,08 ml). Après avoir agité doucement, placez l'incubateur à 37 ° C pendant 30 min. (3) Sortir de l'incubateur et laver deux fois avec la solution de Hank, centrifuger à 1000 tr / min pendant 10 min, absorber soigneusement tout le surnageant, ajouter une goutte de 50 ml de glycérine tamponnée au PBS au fond du tube, mélanger et prendre une goutte pour l'ajouter. Sur la lame, couvrez la lamelle et observez au microscope à fluorescence. Ne convient pas à la foule Il n'y a pas de tabous. Effets indésirables et risques Pas de complications ou de dangers.