Essai de culture mixte de lymphocytes

La culture lymphocytaire mixte (MLC) est une méthode d'essai permettant de déterminer le degré de compatibilité entre un récepteur et l'antigène d'histocompatibilité principal du donneur (antigène HLA). Elle est couramment utilisée pour la mise en correspondance des tissus avant la transplantation d'organe. La culture de lymphocytes mixtes est une culture mixte à deux voies de lymphocytes donneurs et receveurs, ou l'inactivation de lymphocytes de donneurs en une culture mixte. L'ampleur de la réponse cellulaire est négativement corrélée au degré de compatibilité donneur-receveur. Informations de base Classification de spécialiste: classification de contrôle de croissance et de développement: examen immunologique Sexe applicable: si les hommes et les femmes appliquent le jeûne: pas le jeûne Conseils: Les personnes avec un taux de rejet élevé ne devraient pas faire cette vérification. Valeur normale Le taux de conversion de la méthode de comptage morphologique est <10%. La méthode de comptage isotopique compare les cpm pour obtenir P> 0,05. Signification clinique Résultats anormaux: En cas de greffe de rein, le taux de conversion des donneurs vivants devrait être inférieur à 10%, et celui des donneurs décédés, supérieur à 10%. La correspondance faible réaction ne peut être utilisée que dans le même lot d'expériences. Un taux de conversion lymphocytaire de 10% est compatible entre les tissus de différents organismes. Le test de culture mixte de lymphocytes est utilisé pour détecter le statut immunitaire du patient. Lorsque le nombre de lymphocytes T est réduit, le taux de conversion est également réduit. Il peut être utilisé comme méthode d'appariement pour la transplantation d'organes et de moelle osseuse pour sélectionner un donneur approprié. Si le taux de conversion est élevé, il est utilisé pour la différence entre le destinataire et le destinataire. Le taux de conversion est faible et le taux de réussite après la transplantation est élevé. Besoin de détecter des personnes: Personnes atteintes d'immunité avec facultés affaiblies ou disparues. Précautions Au moment de l’examen: Ce test peut être utilisé comme méthode de dépistage des donneurs pour la transplantation d’organes: les patients à faible taux de conversion ont un taux de réussite élevé et ceux à taux de conversion élevé, leur taux de réussite faible. Processus d'inspection 1. Préparation des lymphocytes donneurs: Du sang veineux périphérique frais a été ajouté à un tube à centrifuger contenant une solution de séparation des lymphocytes de poids spécifique de 1,077 dans un rapport de 1: 1, puis appliqué doucement sur la surface du liquide. Laver deux fois. Coloration au bleu trypan, comptage sur plaque. Ajuster la densité cellulaire à 2 × 109 / L, diviser en 3 tubes, centrifuger séparément et laisser un précipité. Ajouter 250 μL de mitomycine dans chaque tube (concentration finale 50 mg / L) 1.75 ml de solution saline physiologique, bain-marie à 37 ° C pendant 40 min, puis lavé deux fois avec une solution saline physiologique. Ajuster la densité cellulaire à 1 × 10 10 / L avec une solution de RPMI1640 contenant 100 ml / L de sérum de veau fœtal.Ajouter l'anticorps pour bloquer l'antigène. 2. Préparation des lymphocytes récepteurs: Du sang veineux périphérique frais a été ajouté à un tube à centrifuger contenant une solution de séparation des lymphocytes de poids spécifique de 1,077 dans un rapport de 1: 1, puis appliqué doucement sur la surface du liquide. Laver deux fois et ajuster la densité cellulaire à 1 × 1010 / L avec un milieu RPMI1640 contenant 120 mL / L de sérum de veau fœtal. 3. Culture de lymphocytes mixtes: Les R et D préparés ont été ajoutés à la plaque à 96 puits de la manière suivante et cultivés dans un incubateur à 50 mL / L de CO2 pendant 24 h à 37 ° C. Groupe A: R50 μL + D 50 μL; Groupe B: R50 μL + D50 μL + IL 2 et purification et neutralisation de mAb 15 μL ; Groupe C: R50μL + ILa2 mAb purifié et neutralisé 15μL; Groupe D: R50μL.Chaque groupe avait 3 puits en double et le groupe témoin à blanc était constitué de 100μL de milieu RPMI1640. Ne convient pas à la foule Ne convient pas aux personnes: personnes ayant un fort rejet. Effets indésirables et risques Il n'y a pas de complications ni de risques associés.