ヘモグロビン電気泳動

さまざまなヘモグロビンの異なる等電点は、特定のpHバッファーで異なる正電荷と負電荷を持ち、電気泳動後にヘモグロビンは異なる方向に移動します。 基本情報 専門家分類：成長および発達検査分類：血液検査 該当する性別：男性と女性が断食を適用するかどうか：断食 ヒント：検査前の食事は軽く、アルコールは禁止されています。 正常値 電気泳動法は、HbA 95％、HbA 21.1％〜3.2％、HbA 32％〜3％でした。 シンガーメソッドのHbFは4％未満です。 臨床的意義 1、主成分はHbSであり、鎌状赤血球ヘモグロビン病ではHbBは見られません。 2、HbS、HbFおよびHbA2はわずかに増加しましたが、HbAはめったにまたは消失しませんが、調査と合わせて、地中海でより一般的なHbS-β-海洋貧血と診断できます。 3、10％-30％HbAを含むHbSに加えて、HbFとHbA2をわずかに増加させ、HbS-β海洋性貧血も考慮することができます。 4. HbSは20％〜30％を占め、HbAは65％〜75％を占め、HbS-α海洋性貧血と診断できる通常のHbFとHbA2を含んでいます。 5、HbAが消え、HbCは総ヘモグロビンの28％から44％を占め、ヘモグロビン病と診断され、黒人ではより一般的で、血液中により多くの標的細胞が見られます。 6、HbSがあり、HbDも表示され、血液膜に標的細胞があり、中国北部でより一般的なヘモグロビンD疾患として診断することができます。 7、HbEは電気泳動をもたらし、主に東南アジア、インドなどで見られるヘモグロビンE疾患と診断でき、中国は広東省南部でより一般的です。 注意事項 ワックス酸繊維膜電気泳動直接比色法 試薬：酢酸セルロース膜のミクロヘモグロビンによる電気泳動。 操作： （1）酢酸セルロース膜をTEBバッファーで10分間以上1/3（4 cm×8 cm）に切断しました。 （2）酢酸セルロースフィルムを取り除き、ろ紙を使用して余分な水分を取り除きます。 10μlの100 g / L溶解血液をHbピペットで吸収し、ガラスプッシャーの下端に均一に塗布し、フィルムのカソード端から1.5〜2.0 cmの距離でマット側に配置しました。 各標本のコピーを同時に2つ作成します。 （3）電気泳動：バッファーを微量のヘモグロビンで電気泳動します。 電圧は180Vで、時間は40分〜1時間です。 （細胞は各ゾーンで明確に分離されています。）電気泳動後、電極が交換され、バッファーを繰り返し使用できます。 （4）溶出と定量HbA、HbA2、およびHbA2のサイズに対応するコントロールゾーンを個別にカットしました。 異常なHbゾーン（HbX）も同時に切断される場合、対応するチューブに配置されます。 10 mlのTEBバッファーをHbAチューブに加え、2 mlのTEBバッファーを各チューブに加え、30分間浸し、絶えず振盪します。 完全に溶出した後。 溶出液を混合し、波長413 nmの721分光光度計を混合しました。 ブランクをゼロにし、各チューブの吸光度を測定します。 検査プロセス （1）微量ヘモグロビンの電気泳動： 1ディップフィルム：酢酸セルロースフィルムはTEBバッファーの表面に浮かび、均等に浸して沈めた後、少なくとも20分間使用できます。 これにより、泡が生成されなくなります。 2ドット：酢酸セルロースフィルムを取り除き、ろ紙を使用して余分な水分を取り除きます。 ヘモグロビン溶液をマイクロピペットで吸引し、マルチサンプルアプリケーターの凹溝に入れ、マルチサンプルピペットでヘモグロビン溶液を採取し、酢酸セルロースフィルムのマット側にスポットしました。 陰極端から1.5〜2 cm、スポッティング量は約3〜5μlで、平行位置の通常のヘモグロビン溶液を対照として使用します。 3電気泳動：マイクロ電気泳動タンクの両側の緩衝タンクに等量のBB緩衝液を加え、酢酸セルロース膜支持体の塩橋として2層のろ紙を使用します。 フィルムは底が艶消しであり、負極はスポットで終端し、5分間平衡化しました。 電源を入れます。 電圧は180V、電流量は約0.2mA / cm、電気泳動時間は20〜30分です。 電極を切り替えた後、タンク内のバッファーをもう一度使用できます。 ４染色：電気泳動されたフィルムを約１０分間ポンソー赤染色溶液から取り出し、バックグラウンドが白くなり乾燥するまで３％酢酸で数回すすいだ。 5透明：酢酸セルロースフィルムを透明な液体に浸し、きれいなガラス板に接着し、2つの間の気泡をガラス棒で取り除きます。 少量の氷酢酸をクロマトグラフィーシリンダーに注ぎ、ガラス板をクロマトグラフィーシリンダーで逆に覆った（フィルムを内側に向けて）。 揮発性氷酢酸で10〜20分間煙を吸い、透明になったらフィルムを取り除きます。 （2）セルロースアセテート膜電気泳動染色比色法： 1 TEBバッファーに浸した4 cm×6 cmの酢酸セルロース膜を取り外し、濾紙で余分な水を吸い取ります。 マット表面のカソード端から1.5 cmの距離で、約5μlの50 g / L Hb溶液をヘモグロビンピペットで直線的かつ均一に充填しました。ヘモグロビン溶液が膜に浸透した後、膜を電気泳動タンク支持板のろ紙ブリッジ上に反転させました。 2電気泳動：電圧180 V、時間30〜40分、Hbゾーンの完全な分離を条件とします。 電極は電気泳動後に交換され、電気泳動バッファーは複数回使用できます。 3染色：フィルムを染色液に浸し、冬には2時間、夏には25〜30°Cで染色する必要があり、約30分間しか染色できません。 染色が透明ではない場合（時間が短すぎる、ヘモグロビン溶液が高すぎるなど）、または電圧が高すぎる場合、HbAバンドが高すぎ、リボンが簡単に剥がれ、定量の精度に影響することに注意してください。 バックグラウンドが洗浄されるまで、漂白液で数回洗浄します。 4定量化：すすいだ膜を取り出し、各ゾーンを切断し、HbA2のサイズに対応するコントロールゾーンを各対応する試験管に入れました。 10 mlの浸出液をHbAチューブに加え、残りのチューブを2 mlに浸し、20分間浸し、時々振とうした。 リボンを完全に溶出させます（高温では溶出時間が長すぎないようにしてください。そうしないと、溶離液の青が減少し、徐々に紫色に変わります）。 溶出液を混合し、波長620 nmで721分光光度計を使用し、ブランクでゼロ化することにより、各チューブの吸光度を測定しました。 5計算：同じ直接比色法。 ワックス酸繊維膜電気泳動直接比色法 試薬：酢酸セルロース膜のミクロヘモグロビンによる電気泳動。 操作： （1）酢酸セルロース膜をTEBバッファーで10分間以上1/3（4 cm×8 cm）に切断しました。 （2）酢酸セルロースフィルムを取り除き、ろ紙を使用して余分な水分を取り除きます。 10μlの100 g / L溶解血液をHbピペットで吸収し、ガラスプッシャーの下端に均一に塗布し、フィルムのカソード端から1.5〜2.0 cmの距離でマット側に配置しました。 各標本のコピーを同時に2つ作成します。 （3）電気泳動：バッファーおよびミクロヘモグロビンの電気泳動。 電圧は180Vで、時間は40分〜1時間です。 （細胞は各ゾーンで明確に分離されています。）電気泳動後、電極が交換され、バッファーを繰り返し使用できます。 （4）溶出と定量HbA、HbA2、およびHbA2のサイズに対応するコントロールゾーンを個別にカットしました。 異常なHbゾーン（HbX）も同時に切断される場合、対応するチューブに配置されます。 10 mlのTEBバッファーをHbAチューブに加え、2 mlのTEBバッファーを各チューブに加え、30分間浸し、絶えず振盪します。 完全に溶出した後。 溶出液を混合し、波長413 nmの721分光光度計を混合しました。 ブランクをゼロにし、各チューブの吸光度を測定します。 群衆に適していない タブーはありません。 副作用とリスク 感染の危険性：汚れた針を使用すると、感染の危険性があります。