PHAリンパ球形質転換アッセイ

PHAリンパ球形質転換試験は、形態学的および生化学的変化であり、Tリンパ球とマイトジェンがin vitroで共培養され、一部の小さなリンパ球が未成熟な母細胞に形質転換され、有糸分裂が行われます。方法。 基本情報 専門家分類：腫瘍学検査分類：免疫検査 該当する性別：男性と女性が断食を適用するかどうか：断食をしない ヒント：健康的な食事に注意を払い、気分を良くしてください。 正常値 リンパ球のカウント200、リンパ芽球の識別（正常なリンパ球の2倍から4倍以上、核膜のクリア、核プラークの緩み、小核、明らかな核小体、豊富な細胞質、好塩基球）、移行期リンパ球（体積の変化が少なく、上記の明らかな核の変化のみ）、小さなリンパ球（赤血球よりわずかに大きく、核クロマチンが密で、核小体がない）、変換率を数えた。 通常の皮膚科学的変換率は58％を超えています。 臨床的意義 PHAリンパ球の形質転換率の低下は、細胞性免疫機能の低下に対する反応です。 この検査、皮膚科学は、主に病気の分類（ハンセン病など）、病気の判定（皮膚悪性腫瘍など）、薬効の観察、および免疫不全やアレルギー性皮膚疾患のいくつかの研究に使用されます。 異常な結果 免疫機能の低下によって引き起こされるさまざまな症状。 検査が必要な人は、ハンセン病または皮膚悪性腫瘍の症状に苦しんでいる疑いがあります。 注意事項 1.媒体の組成は、変換率に大きな影響を及ぼします。その有効期間に注意してください。 2.使用前に子牛血清を不活化する必要があります。 3.培養するときは、十分なガスがあることを確認してください一般に、10ml培養ボトルの液体の総量は2mlを超えてはなりません。 4.過剰なPHAの投与量は細胞に対して毒性があり、リンパ球の形質転換を刺激するには小さすぎます。 5.汚染を防ぐため、実験では厳密な無菌操作を実施する必要があります。 テスト前のタブー：健康的な食事に注意を払い、気分を良くします。 検査の要件：医師と積極的に協力してください。 検査プロセス 操作方法： 1.無菌ヘパリン抗凝固剤0.1mlを取り、1.8mlの細胞培養培地を加え、1000μg/ m1 PHA0.1m1を加え、PHAを含まないコントロールチューブ、細胞を37°C、5％CO2で3日間培養し、1日に1回振る回。 2.培養の最後に、上清のほとんどを廃棄し、8.5 g / L NH4Cl 4 mlを加えて混合し、37°C​​の水浴に10分間入れました。 3.2500r / minで10分間遠心し、上清を捨て、ペレットに固定液5mlを加え、室温で5分間放置します。 4.2500 r / minで10分間遠心分離し、上清を廃棄し、錠剤化のためにペレット化した細胞0.2 mlを残し、すぐに乾燥させます。 5.ギムザ染色液を10〜20分間染色し、水で洗浄し、乾燥させます。 6.オイルミラーは、200個のリンパ球で形質転換された細胞の数をカウントし、変換率を計算します。 結果が判定されます： 1.リンパ芽球の形態的基準：核のサイズ、核と細胞質の比率、細胞質の染色、核の構造、核小体の有無。 （1）成熟小リンパ球：未培養小リンパ球のサイズは6-8μm、核染色は濃厚、核小体なし、核と細胞質の比率が大きく、細胞質は軽度の好塩基球に染色されます。 （2）移行リンパ球：小さいリンパ球よりも大きく、約10〜20μm、核の染色は濃いですが、核小体が現れます。これは成熟した小さいリンパ球の同定の重要なポイントです。 （3）リンパ芽球：細胞体積が増加し、約20〜30μm、形状がきちんとしていない、しばしば小さな突起、核の拡大、核の染色がゆるい、核小体が1つまたは2つあり、細胞質が拡大し、しばしば細胞質空のバブル。 （4）その他の細胞：たとえば、72時間好中球を培養した後、崩壊または死のほとんどは断片化です。 2.リンパ球の形質転換率の計算上記の分類で頭、体、尾を調べ、200のリンパ球を数えてパーセンテージを計算しました。 形質転換されたリンパ球にはリンパ芽球および移行リンパ球が含まれ、形質転換されていないリンパ球は成熟した小リンパ球を指します。 通常の状況下では、PHA誘発リンパ球の形質転換率は60〜80％であり、50〜60％であれば低く、50％以下であれば減少します。 結果に応じて、正しい判断が得られます。 群衆に適していない 不適切な群衆：一時的に不明。 副作用とリスク 関連する合併症や危険性はありません。