Markery powierzchniowe limfocytów B

Test humoralnej funkcji immunologicznej jest rodzajem testu, w którym laboratorium ocenia indywidualną humoralną funkcję immunologiczną. Wykrywanie humoralnej funkcji odpornościowej opiera się na podstawowych procesach odporności humoralnej, w tym wykrywaniu limfocytów B, wykrywaniu Ig i wykrywaniu funkcji wytwarzania przeciwciał. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: klasyfikacja kontroli wzrostu i rozwoju: badanie immunologiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: nie na czczo Wskazówki: Jeśli próbki nie można obserwować w ciągu dnia, komórki zostaną zawieszone w roztworze do przechowywania przeciwciał fluorescencyjnych, przechowywane w temperaturze 4 ° C i zliczone następnego dnia. Wartość normalna Średnia IgM wynosiła 11,2 ± 6,0%; średnia IgG wynosiła 7,5 ± 3,3%. Znaczenie kliniczne Spadek liczby komórek B jest związany z humoralnym niedoborem odporności, a wzrost liczby komórek B jest związany ze złośliwą proliferacją komórek B. Środki ostrożności (1) Obecność aglomerowanej IgG w odczynniku fluorescencyjnym i aglomerowanej IgG można fałszywie dodatnio związać z receptorem Fc na powierzchni komórki B. Dlatego też, aby uniknąć aglomeracji IgG, należy zwrócić uwagę na: 1 Przeciwciała fluorescencyjne o nadmiernym stosunku molowym F / P nie mogą być stosowane i na ogół preferowane są 1 do 3. 2 Fluorescencyjne przeciwciała zawierające białka o niskim stężeniu są niestabilne w niskiej temperaturze i nie powinny być niższe niż 2 mg / ml. 3 Przeciwciała fluorescencyjne przechowywane w niskiej temperaturze nie powinny być wielokrotnie zamrażane i rozmrażane przed wirowaniem przez 30 minut przy 150 000 r / min przed użyciem w celu usunięcia agregatów. (2) Gdy do barwienia immunofluorescencyjnego stosuje się żywe limfocyty, do wszystkich odczynników (znakowane przeciwciało, roztwór Hanka itp.) Dodaje się NaN3, aby ograniczyć płynność błony komórkowej. W przeciwnym razie nastąpi fluorescencja podobna do czapki i fagocytoza, a faktyczna liczba komórek fluorescencyjnych spadnie. (3) Po wybarwieniu fluorescencyjnym przeciwciałem anty-IgG kompleks immunologiczny antygen-przeciwciało (typu IgG) zawarty w próbce wiąże się z receptorem Fc na powierzchni komórki B i jest fluorescencyjnie dodatni. Z tego powodu sugerowano wybarwienie fluorescencyjnie znakowanym przeciwciałem anty-F ​​(ab) 2, aby wykluczyć zabarwienie receptorów Fc. W ostatnich latach, w związku z pojawieniem się przeciwciał monoklonalnych przeciwko cząsteczkom specyficznym dla powierzchni komórek B (CD19, CD20 itp.), Stosowano znakowane fluoresceiną przeciwciała monoklonalne przeciwko CD19 lub CD20 do bezpośredniej reakcji z limfocytami krwi obwodowej; Przeciwciała monoklonalne (pierwotne przeciwciała) CD19 i CD20 najpierw poddaje się reakcji z limfocytami, a następnie łączy ze znakowanymi fluoresceiną króliczymi lub kozimi anty-mysimi IgG (drugie przeciwciało), zliczane za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej lub cytometrii przepływowej w celu zliczenia krwi obwodowej. Limfocyty B. Proces kontroli (1) Weź 2-heparynowy antykoagulant, dodaj równą ilość płynu Hanka i dobrze wymieszaj. Powtórz warstwę na roztworze warstwowym, 2000r / min, wiruj przez 20 min. Warstwę limfocytów wyjęto, dodano roztwór Hanka, przemyto 3 razy, 1200 r / min, wirowano przez 10 min, stężenie limfocytów doprowadzono do 1 × 107 / ml i 0,1 ml rozprowadzono do dwóch probówek. (2) Ponownie przepłucz zawiesinę limfocytów roztworem Hanka, odrzuć supernatant i użyj bibuły filtracyjnej, aby usunąć pozostały płyn z wewnętrznej ścianki probówki, i dodaj 2 krople króliczego przeciwciała przeciw ludzkiej IgG i przeciw ludzkiego przeciwciała fluorescencyjnego IgM (około 0,08 ml). Po delikatnym wstrząśnięciu umieść inkubator w 37 ° C na 30 minut. (3) Wyjmij z inkubatora i przemyj dwukrotnie roztworem Hanka, wiruj z prędkością 1000 obr / min przez 10 minut, ostrożnie zaabsorbuj cały supernatant, dodaj 1 kroplę 50 ml buforowanej gliceryny PBS na dno probówki, wymieszaj i weź 1 kroplę, aby dodać Na szkiełku przykryj szkiełko nakrywkowe i obserwuj pod mikroskopem fluorescencyjnym. Nie nadaje się dla tłumu Nie ma tabu. Działania niepożądane i ryzyko Bez komplikacji i zagrożeń.