Test transformacji limfocytów PHA

Test transformacji limfocytów PHA jest zmianą morfologiczną i biochemiczną, w której limfocyty T i mitogeny są wspólnie hodowane in vitro, a niektóre małe limfocyty są transformowane do niedojrzałych komórek macierzystych i poddawane mitozie. Metoda Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: Klasyfikacja badań onkologicznych: badanie immunologiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: nie na czczo Wskazówki: Zwróć uwagę na zdrową dietę i utrzymuj dobry nastrój. Wartość normalna Liczenie limfocytów 200, identyfikacja limfoblastów (ponad 2 do 4 razy więcej niż normalne limfocyty, czysta błona jądrowa, luźna płytka jądrowa, drobne jądro, oczywiste jądra, obfite cytoplazmy, bazofilowe), przejściowe Limfocyty (mniejsza zmiana objętości, tylko wyżej wspomniane oczywiste zmiany jądrowe), małe limfocyty (nieco większe niż czerwone krwinki, gęsta chromatyna jądrowa, brak jąder), policzono współczynnik konwersji. Normalny współczynnik konwersji dermatologicznej jest większy niż 58%. Znaczenie kliniczne Zmniejszenie szybkości transformacji limfocytów PHA jest odpowiedzią na zmniejszenie komórkowej funkcji odpornościowej. Badanie to, dermatologia, jest najczęściej stosowane do klasyfikacji chorób (takich jak trąd), oceny choroby (takich jak nowotwory złośliwe skóry), obserwacji skuteczności leków oraz niektórych badań niedoboru odporności i alergicznych chorób skóry. Nieprawidłowy wynik Różne objawy spowodowane obniżoną funkcją odpornościową. Podejrzaną osobę podejrzewa się o cierpienie na objawy trądu lub złośliwości skóry. Środki ostrożności 1. Skład nośnika ma duży wpływ na współczynnik konwersji, zwróć uwagę na jego efektywny okres. 2. Surowicę cielęcą należy dezaktywować przed użyciem. 3. Podczas hodowli upewnij się, że jest wystarczająca ilość gazu. Ogólnie całkowita ilość płynu w 10 ml butelce do hodowli nie powinna przekraczać 2 ml. 4. Nadmierna dawka PHA jest toksyczna dla komórek, zbyt mała, aby stymulować transformację limfocytów Przed dawką należy ustalić dawkę reakcji konwersji PHA. 5. W eksperymencie należy przeprowadzić ścisłą aseptyczną operację, aby zapobiec zanieczyszczeniu. Tabu przed testem: zwróć uwagę na zdrową dietę i utrzymuj dobry nastrój. Wymagania dotyczące kontroli: Aktywnie współpracować z lekarzem. Proces kontroli Metoda operacji: 1. Weź aseptyczny antykoagulant heparynowy 0,1 ml, dodaj 1,8 ml pożywki do hodowli komórkowej, dodaj 1000 μg / ml PHA0,1 ml, probówkę kontrolną bez PHA, hoduj komórki w 37 ° C, 5% CO2 dla 3d, wstrząśnij 1 dziennie Times 2. Pod koniec hodowli większość supernatantu odrzucono, dodano 8,5 g / l NH4Cl 4 ml i mieszano, i umieszczono w łaźni wodnej o temperaturze 37 ° C na 10 minut. Wiruj z prędkością 3,2500 obr / min przez 10 minut, odrzuć supernatant, dodaj 5 ml utrwalacza do osadu i odstaw na 5 minut w temperaturze pokojowej. Wirować z prędkością 4,2500 r / min przez 10 minut, odrzucić supernatant, pozostawić 0,2 ml granulowanych komórek do tabletkowania i szybko wysuszyć. 5. Roztwór barwiący Giemsa wybarwia się przez 10-20 minut, przemywa wodą i suszy. 6. Lustro olejowe Zlicza liczbę komórek transformowanych w 200 limfocytach i oblicza współczynnik konwersji. Wynik ocenia się: 1. Kryteria morfologiczne limfoblastów: wielkość jądra, stosunek jądra do cytoplazmy, barwienie cytoplazmy i struktura jądra oraz obecność lub brak jąder. (1) Dojrzałe małe limfocyty: wielkość niehodowanych małych limfocytów wynosi 6-8 μm, barwienie jądrowe jest gęste, brak jąder, stosunek jądra do cytoplazmy jest duży, a cytoplazma jest zabarwiona na łagodny bazofilowy. (2) Przejściowe limfocyty: większe niż małe limfocyty, około 10 ~ 20 μm, barwienie jądrowe jest gęste, ale pojawiają się jąderka, co jest kluczowym punktem do identyfikacji dojrzałych małych limfocytów. (3) limfoblasty: objętość komórki wzrasta, około 20 ~ 30 μm, kształt nie jest czysty, często mały występ, powiększenie jądra, luźne wybarwienie jądra, są 1 lub 2 jądra, poszerzenie cytoplazmy, często cytoplazma Pusta bańka. (4) Inne komórki: Na przykład po hodowli neutrofili przez 72 godziny większość rozpadu lub śmierci jest fragmentacją. 2. Obliczanie szybkości transformacji limfocytów Głowa, ciało i ogon zostały zbadane w powyższej klasyfikacji, a do obliczenia procentu zliczono 200 limfocytów. Transformowane limfocyty obejmują limfoblasty i przejściowe limfocyty, a nietransformowane limfocyty odnoszą się do dojrzałych małych limfocytów. W normalnych okolicznościach szybkość transformacji limfocytów indukowana przez PHA wynosi od 60 do 80%, a jeśli wynosi od 50 do 60%, jest niska, a gdy wynosi 50% lub mniej, zmniejsza się. Zgodnie z wynikami uzyskano właściwy osąd. Nie nadaje się dla tłumu Niewłaściwy tłum: chwilowo nieznany. Działania niepożądane i ryzyko Nie ma żadnych powiązanych komplikacji i zagrożeń.