Test mieszanej hodowli limfocytów

Mieszana hodowla limfocytów (MLC) jest metodą testową do określania stopnia zgodności między receptorem a głównym antygenem zgodności tkankowej dawcy (antygen HLA) i jest powszechnie stosowana do dopasowania tkanek przed przeszczepieniem narządu. Mieszana hodowla limfocytów jest dwukierunkową mieszaną hodowlą limfocytów dawcy i biorcy lub inaktywacją limfocytów dawcy do mieszanej hodowli, a zakres odpowiedzi komórkowej jest ujemnie skorelowany ze stopniem kompatybilności dawca-biorca. Podstawowe informacje Klasyfikacja specjalistyczna: klasyfikacja kontroli wzrostu i rozwoju: badanie immunologiczne Obowiązująca płeć: czy mężczyźni i kobiety stosują post: nie na czczo Wskazówki: osoby z wysokim odrzuceniem nie powinny tego sprawdzać. Wartość normalna Współczynnik konwersji metody liczenia morfologicznego wynosi <10%. Metoda zliczania izotopów porównuje cpm do uzyskania P> 0,05. Znaczenie kliniczne Nieprawidłowe wyniki: W przypadku przeszczepienia nerki współczynnik konwersji żywych dawców powinien wynosić <10%; współczynnik konwersji dawców zwłok powinien wynosić> 10%. Dopasowywanie o niskiej reakcji można zastosować tylko w tej samej partii eksperymentów. Współczynnik konwersji limfocytów wynoszący 10% jest zgodny między tkankami różnych ciał. Test mieszanej hodowli limfocytów służy do wykrywania stanu immunologicznego pacjenta. Gdy liczba limfocytów T jest zmniejszona, współczynnik konwersji jest również obniżany. Można go zastosować jako metodę dopasowania do przeszczepu narządu i szpiku kostnego w celu wyboru odpowiedniego dawcy. Jeśli współczynnik konwersji jest wysoki, służy on do różnicy między odbiorcą a odbiorcą. Wskaźnik konwersji jest niski, a wskaźnik powodzenia po przeszczepie wysoki. Potrzebujesz wykryć ludzi: Osoby z osłabioną odpornością lub zaginione. Środki ostrożności W momencie badania: test ten może być stosowany jako metoda badania przesiewowego dawców do przeszczepu narządów. Ci z niskim współczynnikiem konwersji mają wysoki wskaźnik powodzenia, a ci z wysokim współczynnikiem konwersji mają niski wskaźnik powodzenia. Proces kontroli 1. Przygotowanie limfocytów dawcy: Świeżą krew żylną obwodową dodano do probówki wirówkowej zawierającej roztwór do rozdzielania limfocytów o ciężarze właściwym 1,077 w stosunku 1: 1 i delikatnie nałożono na powierzchnię cieczy. Odwiruj przy 2000 obr / min przez 20 minut w celu wchłonięcia pośredniej warstwy limfocytów halo. Przemyć dwukrotnie Barwienie błękitem trypanowym, zliczanie płytek. Dostosować gęstość komórek do 2 × 109 / L, podzielić na 3 probówki, odwirować oddzielnie i pozostawić osad. Do każdej probówki dodać 250 μl mitomycyny (stężenie końcowe 50 mg / L) I 1,75 ml soli fizjologicznej, łaźnia wodna w 37 ° C przez 40 min i przemyta dwukrotnie solą fizjologiczną. Dostosuj gęstość komórek do 1 × 10 10 / L roztworem RPMI1640 zawierającym 100 ml / L płodowej surowicy bydlęcej. Dodaj przeciwciało, aby zablokować antygen. Oznacz jako D. 2. Przygotowanie limfocytów receptorowych: Świeżą krew żylną obwodową dodano do probówki wirówkowej zawierającej roztwór do rozdzielania limfocytów o ciężarze właściwym 1,077 w stosunku 1: 1 i delikatnie nałożono na powierzchnię cieczy. Odwiruj przy 2000 obr / min przez 20 minut w celu wchłonięcia pośredniej warstwy limfocytów halo. Przemyć dwukrotnie Dostosuj gęstość komórek do 1 × 1010 / L pożywką RPMI1640 zawierającą 120 ml / L płodowej surowicy bydlęcej. 3. Mieszana hodowla limfocytów: Przygotowane R i D dodano do 96-studzienkowej płytki w następujący sposób i hodowano w inkubatorze z 50 ml / L CO2 przez 24 godziny w 37 ° C. Grupa A: R50 μL + D 50 μL; Grupa B: R50 μL + D50 μL + IL 2 oczyszczanie i neutralizacja mAb 15 μL ; Grupa C: R50 μL + ILa2 oczyszczone i zneutralizowane mAb 15 μl; Grupa D: R50 μL. Każda grupa miała 3 podwójne studzienki, a ślepa grupa kontrolna zawierała 100 μl pożywki RPMI1640. Nie nadaje się dla tłumu Nie nadaje się dla ludzi: osób o wysokim odrzuceniu. Działania niepożądane i ryzyko Nie ma żadnych powiązanych komplikacji i zagrożeń.