β-N-acetilglucosaminidase

A β-N-acetilglucosaminidase (NAG) hidrolisa a β-N-acetilglucosaminida e também hidrolisa a β-N-acetilgalactosamina. A enzima está amplamente presente em vários tecidos, órgãos, fluidos corporais e células sanguíneas e é uma hidrolase ácida nos lisossomos. Os métodos de medição são colorimetria e fluorometria. Informação básica Classificação especializada: classificação do exame urinário: exame bioquímico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Resultados da análise: Abaixo do normal: Raro Valor normal: Β-N-acetilglucosaminidase sérica: 15,14-27,94 U / L Acima do normal: Doença tubular renal metais pesados ​​(mercúrio, chumbo, cádmio, etc.) e dano renal induzido por drogas, isquemia, hipóxia, perda de sangue, choque, etc. podem causar um aumento na atividade do NAG. Negativo: Positivo: Dicas: De acordo com o estado nutricional de todo o corpo, leite, ovos, frutas, leite de soja, etc. são dados na refeição. Valor normal 1, p-nitrofenol método colorimétrico: soro NAG21,54 ± 6,4U / L, NAG urina é normalmente distribuído, a mediana é 9,13U / g creatinina, o limite superior do percentil 95 é 16.10U / g Creatinina 2. Método de Fluorescência: Soro adulto: 9,94 ± 2,87 U / L Urina adulta: 6,39 ± 3,19 U / LCre. Significado clínico A determinação da atividade do NAG sangüíneo e urinário é sensível às alterações das lesões do parênquima renal, especialmente lesão aguda e doença ativa, e é usada principalmente para monitoramento precoce da lesão renal e observação da doença. 1, doença tubular renal metais pesados ​​(mercúrio, chumbo, cádmio, etc.) e dano renal induzido por drogas, isquemia, hipóxia, perda de sangue, choque, etc. podem causar um aumento na atividade NAG. 2, síndrome nefrótica NAG urinário muitas vezes aumentou significativamente, o período de remissão diminuiu, recuperação rápida quando a recorrência, pode ser usado como uma indicação para observação clínica. A fase aguda da glomerulonefrite varia muito, mas a alteração é menor que a da lesão tubular renal. 3, a localização do diagnóstico da infecção do trato urinário de pielonefrite aguda e crônica aumento urinário NAG, pode ser distinguida da cistite simples. Pode ser usado para o diagnóstico de infecções precoces do trato urinário superior. 4, rejeição de transplante renal monitoramento de rejeição de transplante renal NAG precoce pode ser aumentada, mais sensível do que proteína de urina, creatinina sérica, clearance de creatinina. 5, o diagnóstico precoce de nefropatia diabética, nefropatia diabética, NAG urina elevada, o diagnóstico precoce desta doença é melhor do que a albumina urinária e β2-microglobulina. Resultados elevados podem ser doenças: síndrome nefrótica, infecções do trato urinário (1) método colorimétrico de p-nitrofenol: 1 O substrato p-nitrofenol deve ser purificado e pré-formado a 50 ° C por 24 h. A concentração foi ajustada para 0,04 mmol / L com NaOH 10 mmol / L e a curva de absorção foi varrida com um espectrofotómetro de largura de banda estreita, Àmax = 401 nm, de acordo com o padrão IFCC, A max = 0,7316 a 0,7388 e Emax = 18380 ± 90 (25ºC). 2 A solubilidade do substrato é pequena.Na preparação, ele deve ser ajustado para uma pasta com uma quantidade adequada de tampão de pH 4,6 e, em seguida, adicionar gradualmente o buffer à quantidade necessária. 3 Quando os resultados das medições estiverem na faixa ultra-linear, a amostra deve ser diluída com soro fisiológico e retestado.O resultado é multiplicado pelo fator de diluição. 4 A concentração de enzima na urina é muito afetada pelo volume de urina, e o volume urinário de 24 horas deve ser mantido. Se a taxa de excreção da enzima é calculada pela razão de NAG / g de creatinina, isto é, não é afetada pela concentração ou diluição da urina, e não há necessidade de deixar as 24 horas de urina. (2) método de fluorescência: 1 O método de fluorescência para medir o NAG possui um kit doméstico, que possui alta sensibilidade e não é afetado pela urina. 2 Também pode ser usado com a Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory para produzir 930 fotômetros de fluorescência, filtro de excitação 360 e filtro de emissão (400 + 450) composto, com resultados satisfatórios. 3 A concentração de cada componente na solução de reação enzimática é: 1,33 mmol / L de substrato, 20 mmol / L de ácido cítrico e 432 mmol / L de Na2HPO. 4 Os solventes usados ​​nos reagentes devem ser água destilada, o substrato deve estar livre de 4-MU, a BSA deve estar livre da enzima ou aquecida a 50 ° C por 2h. 5 NAG no soro é estável durante várias horas a vários dias a 4 ° C, e estável durante vários meses a -20 ° C. A amostra de urina foi estável a 4 ° C por 1 semana, e plasma anticoagulado com citrato também foi usado. A 6β-N-acetilglucosaminida pode ser catalisada por duas enzimas, uma é β-N-acetilglucosaminidase (EC 3.2.1.30), e a outra é β-N-acetilglucosidase (EC3) .2.1.52) Somente EC3.2.1.30 ou EC3.2.1.52 podem ser definidos para enzimas purificadas. O NAG, que é frequentemente referido na literatura nacional, é estritamente nomeado após o substrato utilizado, em vez da especificidade da enzima para o substrato. Portanto, a literatura estrangeira atual é muitas vezes referida como β-N-acetilglucosaminidase. Processo de inspeção (1) mistura colorimétrica de p-nitrofenol, a 405 nm de comprimento de onda, 1 cm de caminho óptico, água destilada zero, leia a absorbância de cada tubo e verifique a curva padrão com a diferença de (AU-AC). 1 O substrato p-nitrofenol deve ser purificado e pré-formado a 50 ° C por 24 h. A concentração foi ajustada para 0,04 mmol / L com NaOH 10 mmol / L e a curva de absorção foi varrida com um espectrofotómetro de largura de banda estreita, Àmax = 401 nm, de acordo com o padrão IFCC, A max = 0,7316 a 0,7388 e Emax = 18380 ± 90 (25ºC). Coeficiente de absorção molar de acordo com o p-nitrofenol 2 A solubilidade do substrato é pequena.Na preparação, ele deve ser ajustado para uma pasta com uma quantidade adequada de tampão de pH 4,6 e, em seguida, adicionar gradualmente o buffer à quantidade necessária. 3 Quando os resultados das medições estiverem na faixa ultra-linear, a amostra deve ser diluída com soro fisiológico e retestado.O resultado é multiplicado pelo fator de diluição. 4 A concentração de enzima na urina é muito afetada pelo volume de urina, e o volume urinário de 24 horas deve ser mantido. Se a taxa de excreção da enzima é calculada pela razão de NAG / g de creatinina, isto é, não é afetada pela concentração ou diluição da urina, e não há necessidade de deixar as 24 horas de urina. (2) Espectrofotometria de fluorescência: primeiro diluir o soro ou a urina com um tampão sem albumina de soro bovino (BSA), Misturar, o comprimento de onda de excitação é de 364 nm, o comprimento de onda de emissão é de 448 nm, para parar o ajuste de zero líquido, e a intensidade de fluorescência do tubo 6 µmol / L 4-MU é ajustada para 100, e a intensidade de fluorescência do tubo branco e do tubo de medição é medida respectivamente. 1 O método de fluorescência para medir o NAG possui um kit doméstico, que possui alta sensibilidade e não é afetado pela urina. 2 Também pode ser usado com a Shanghai No.3 Analytical Instrument Factory para produzir 930 fotômetros de fluorescência, filtro de excitação 360 e filtro de emissão (400 + 450) composto, com resultados satisfatórios. 3 A concentração de cada componente na solução de reação enzimática é: 1,33 mmol / L de substrato, 20 mmol / L de ácido cítrico e 432 mmol / L de Na2HPO. 4 Os solventes usados ​​nos reagentes devem ser água destilada, o substrato deve estar livre de 4-MU, a BSA deve estar livre da enzima ou aquecida a 50 ° C por 2h. 5 NAG no soro é estável durante várias horas a vários dias a 4 ° C, e estável durante vários meses a -20 ° C. A amostra de urina foi estável a 4 ° C por 1 semana, e plasma anticoagulado com citrato também foi usado. A 6β-N-acetilglucosaminida pode ser catalisada por duas enzimas, uma é β-N-acetilglucosaminidase (EC 3.2.1.30), e a outra é β-N-acetilglucosidase (EC3) .2.1.52) Somente EC3.2.1.30 ou EC3.2.1.52 podem ser definidos para enzimas purificadas. O NAG, que é frequentemente referido na literatura nacional, é estritamente nomeado após o substrato utilizado, em vez da especificidade da enzima para o substrato. Portanto, a literatura estrangeira atual é muitas vezes referida como β-N-acetilglucosaminidase.