Lipoproteína sérica e eletroforese de lipoproteína sérica

A eletroforese de lipoproteínas é usada principalmente para a classificação de hiperlipoproteinemia, e também é útil para entender o estado lipídico sanguíneo da doença coronariana e orientar melhor o diagnóstico clínico e o tratamento. Informação básica Classificação especializada: classificação do exame cardiovascular: exame bioquímico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Resultados da análise: Abaixo do normal: Encontrado em baixa lipoproteinemia e assim por diante. Valor normal: Lipoproteína de muito baixa densidade: 0.06-0.3g / L Lipoproteína de baixa densidade: 0-7g / L Lipoproteína de alta densidade (masculino): 0.41-0.63g / L Alta densidade Zheng? .42-0.68g / L Acima do normal: Encontrado na hiperlipidemia primária e assim por diante. Negativo: Positivo: Dicas: Antes do exame, a dieta é leve e o álcool é proibido. Verifique se há estômago vazio pela manhã. Valor normal Eletroforese de membrana de acetato de celulose Partículas de cardo de leite 0g / L (0mg / dl); Lipoproteína de densidade muito baixa 0,06 ~ 0,3g / L (6 ~ 30mg / dl); Lipoproteína de baixa densidade <7g / L (<700mg / dl); Lipoproteína de alta densidade: Macho 0,52 ± 0,11g / L (43 ± 18mg / dl); Fêmea 0,55 ± 0,13g / L (47 ± 2mg / dl). Significado clínico 1, aumentada: observada na hiperlipidemia primária. 2, menor: visto em baixa lipoproteinemia. Os resultados altos podem ser doenças: hyperlipidemia, hyperlipoproteinemia tipo II, considerações de doença cardíaca coronária 1. Amostra: A lipoproteína pode ser isolada a partir de soro fresco e não congelado. O plasma não é adequado para eletroforese de lipoproteínas porque uma banda de fibrinogênio aparecerá. 2. Perfis de lipoproteínas com componentes de separação claros são pré-requisitos para uma interpretação precisa. Se essas condições forem bem atendidas, a eletroforese de lipoproteínas e o método de referência (ultracentrifugação) podem ser bastante consistentes. A precisão de cada componente é diferente e é estimada pelo coeficiente de variação, que geralmente é inferior a 5%. 3. Ocasionalmente, as alfa-lipoproteínas desaparecerão e / ou uma banda estreita de alfa-lipoproteína aparecerá. Isso ocorre porque os ácidos graxos livres estão em. O acúmulo de alfa-lipoproteínas faz com que essas partículas tenham carga igual. À medida que a densidade da zona α aumenta, o resultado é alto. Em comparação com as técnicas de precipitação, a electroforese quantitativa de lipoproteínas é dispendiosa. Processo de inspeção Imediatamente após a coleta de sangue venoso, a operação de teste: 1. Adicione o tampão ao tanque de eletroforese e ajuste o tampão nos tanques de ambos os lados para torná-los no mesmo plano. 2. Preparação do filme de acetato de celulose: Pegue um filme de acetato de celulose (2 cm × 8 cm) e desenhe uma linha horizontal com um lápis a 1,5 cm (um lado do lado negativo) da superfície áspera para fazer uma marca pontilhada. Após a numeração e indicação dos eletrodos positivo e negativo, o filme foi imerso na solução tampão de sódio barbiturato-barbital e, após ser suficientemente saturado (usualmente 20 min), o tampão em excesso foi removido por meio de sanduíche do papel filtro limpo. 3. O cabelo de película de acetato de celulose é preso ao suporte do tanque de eletroforese e endireitado. Pipetar 3 ~ 5μl de soro não hemolítico com uma micropipeta e adicionar ao longo da linha horizontal na linha horizontal.A amostra deve ser mantida a uma certa distância da borda do filme para evitar deformação da banda de proteína no padrão de eletroforese.Depois do soro penetra no filme, o filme é invertida. Com o lado da luz voltado para cima, cole-o no suporte do tanque de eletroforese e conecte as duas extremidades do filme ao buffer com papel de filtro de camada dupla ou quatro camadas de gaze e espere um pouco. 4, ligue a energia, preste atenção para os eletrodos positivos e negativos no filme de acetato de celulose, não se conectar errado. Tensão de 90 ~ 150V, corrente de 0,4 ~ 0,6mA / cm (eletroforese diferente necessária tensão, corrente pode ser diferente, deve ser flexível), poder de verão 45min, inverno power-on tempo é um pouco mais longo, cerca de 60min, expansão da zona de eletroforese cerca de 25 ~ 35mm pode ser. 5, tingimento: Após a energia estar completa, remover o filme e imergir diretamente na solução de corante Lichunhong S ou na solução de corante 10B preto, corar por 5 a 10 minutos (pela zona de albumina), depois enxaguar o restante na solução de enxágüe. Tinja até que o fundo esteja incolor. 6, quantitativo: 1 método colorimétrico: blot o filme lavado, corte a área de proteína tingida no tubo correspondente, adicione 0,6 ml / L de hidróxido de sódio 6 ml no tubo de albumina (calcule a absorbância multiplicada por 2), o resto Adicione 3 ml a cada tubo, agite-o várias vezes e coloque-o num depósito de água a 37 ° C durante 20 minutos para fazer a sua cor lixiviar. Coloração Amino Black 10B A absorbância de cada tubo foi lida a 620 nm usando um espectrofotômetro e, em seguida, o conteúdo de cada tubo foi calculado (controle de tubo em branco simultâneo). Quando o Lichunhong S foi tingido, o lixiviado foi tratado com hidróxido de sódio 0,1 mol / L e a quantidade foi a mesma que acima. Após 10 minutos, adicione 0,6ml de 400ml / L de ácido acético ao tubo de albumina (multiplique a absorbância por 2) e adicione 0,3ml aos outros tubos para neutralizar um pouco do hidróxido de sódio para tornar a cor mais profunda.Se necessário, centrifugue e tome o sobrenadante. A absorbância de cada tubo foi lida a 520 nm por um espectrofotômetro (controle em branco simultâneo), e então os respectivos conteúdos foram calculados. 2 Método de escaneamento do densitômetro: A. Transparente: Aspirar o líquido de lavagem no filme (para evitar que o líquido transparente seja diluído para afetar o resultado transparente), mergulhar o filme no líquido transparente por 2 a 3 minutos, retirá-lo e alisá-lo de maneira contínua. Lâminas de vidro limpas e sem riscos (não crie bolhas), monte as lâminas por um tempo, remova o excesso de líquido transparente, coloque em um forno a uma temperatura constante de 90-100 ° C, asse por 10-15 min, remova e deixe esfriar à temperatura ambiente. As áreas de proteínas transparentes por este método são distintas, o filme é plano e pode ser diretamente escaneado e permanentemente preservado (transparente com hidrogênio naftaleno ou parafina líquida. A película lavada deve ser seca e transparente, e a película transparente não pode ser armazenada. Longo e fácil de enrugar). 2 Quantificação de varredura: O filme transparente é colocado em um densitômetro totalmente automático ou outra caixa escura de densitômetro para análise de varredura. Não é adequado para a multidão Pessoas inadequadas: Geralmente não há pessoas que não sejam adequadas. Reações adversas e riscos 1, hemorragia subcutânea local: após a coleta de sangue deve ser pressionado por um tempo suficiente, especialmente aqueles com tendência a sangramento, de modo a não causar exsudação subcutânea e contusões, devido à falta de coagulação do sangue. 2, infecção: atenção à operação asséptica durante a coleta de sangue venoso, de modo a não causar infecção local.