apolipoproteína AⅡ

A apolipoproteína é uma fração lipoproteica plasmática que contém uma variedade de lipoproteínas e várias apolipoproteínas específicas. Existem mais de 20 tipos de apolipoproteínas que foram descobertas até agora. Entre eles, há principalmente aPOA1, AII, B-100, B48, Cl, CII, CIII, D, E e similares. Informação básica Classificação especializada: classificação do exame cardiovascular: exame bioquímico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Dicas: Na última refeição antes da coleta de sangue, evite alimentos ricos em gordura e bebidas, jejum de 12 horas, extrair sangue venoso do antebraço. Valor normal 250 ~ 520mg / L. Significado clínico Reduzido em doenças cardíacas coronárias, diabetes, síndrome nefrótica, deficiência hereditária de ApoA-I (doença de Tânger), alfa-lipoproteinemia baixa familiar, doença olho-de-peixe, desnutrição severa, hepatite ativa e função hepática. Baixos resultados podem ser doenças: doença cardíaca coronária, considerações sobre diabetes (1) imunoturbidimetria: 1 Em relação ao anti-soro: O ensaio turbidimétrico tem maiores requisitos de anti-soro do que outros métodos. O método turbidimétrico é de preferência um anticorpo policlonal. O anti-soro deve estar livre de anti-soro. Deve prestar muita atenção para o apoA-II extraído do soro humano para alcançar imunopurity, pureza cromatográfica e pureza de eletroforese, o que não é possível no laboratório geral. O título do anti-soro (título) não deve ser inferior a 16. Atualmente, em alguns reagentes comerciais domésticos, o anti-soro apoA-II tem título extremamente baixo, portanto você deve prestar atenção ao comprar o kit. Se você não tem experiência em identificar a qualidade dos anti-soros antes da compra, você deve pedir à unidade qualificada para identificá-la. 2 O espécime padrão superior (soro) é diluído 200 vezes para operação manual (100 μl de amostra), e se houver um amostrador de precisão, ele pode ser diluído 20 vezes (usando 10 μl). A fim de se adaptar às condições de diferentes laboratórios (como os diferentes tipos de instrumentos automatizados), deve ser dada atenção à proporção de antígeno-anticorpo ao fazer as devidas modificações.Não deve haver excesso de antígeno no sistema de reação, e o limite superior linear não deve ser inferior a 2,5g / L. Em outras palavras, a quantidade de anti-soro deve ser suficiente, caso contrário, os resultados são baixos quando a apoA-I é alta na amostra. No momento, alguns kits de medicamentos domésticos não só têm baixo título anti-soro, mas a dosagem dos espécimes na operação é muito grande (como 3 ~ 5μl), o anticorpo é obviamente insuficiente, e os resultados medidos são inevitavelmente imprecisos. 3 Para obter uma medição precisa, os resultados do cálculo da curva de calibração devem ser feitos na medição de turbidez da apoA-II e B (método do ponto final). Uma certa faixa (baixa dosagem de amostra) concentração (X) é basicamente linear com turbidez (Y), e regressão linear calcula uma certa intercepção no eixo Y (valor A <0,1), então o desvio do resultado do cálculo é calculado pela calibração de ponto único. Maior, os resultados medidos não podem refletir com precisão o nível de alta (alta baixa, baixa alta). Não negligencie a precisão da medição devido à simplicidade do método de ponto único. Independentemente do tipo de instrumento automatizado, você deve primeiro tentar a curva de calibração. Se o teste for repetido sob as condições do instrumento e as condições específicas, a interceptação da linha de regressão não é óbvia, então o método de calibração de ponto único pode ser usado. Quando a quantidade da amostra é de 3 a 5 µl, mesmo que a quantidade de anti-soro seja aumentada, a concentração e a turbidez não são lineares, e só podem ser calculadas após a curva ser linearmente convertida. 4 O principal fator de interferência é a turbidez do próprio soro (como o soro hiperlipídico), e os métodos de pré-tratamento, como a ultracentrifugação ou a hidrólise da lipase, não são práticos. O efeito da turbidez com surfactantes também é limitado, então um tubo branco deve ser feito no ensaio. Além do método de dois pontos usado na análise automatizada, é um erro usar manualmente um único reagente sem subtrair a amostra em branco. Para reduzir o efeito dos efeitos da matriz na resposta de turbidez, o soro de valor fixo deve ser usado como calibrador. Além disso, interferências como partículas de poeira e arranhões de pratos turvos devem ser excluídos. 5 Alguns kits comerciais (incluindo alguns produtos importados) com valores de soro de calibração imprecisos são uma fonte importante de erros. (2) método de eletroforese de foguete: 1 A taxa de diluição do antígeno e a quantidade de anti-soro devem ser selecionadas de modo que o pico do foguete seja claro, a inclinação da curva de calibração seja moderada e a linha seja adequada. O método mede simultaneamente apoA-II e apoB, e a quantidade dos dois antissoros deve ser ajustada de modo que as alturas de pico dos dois sejam diferentes, e a altura do pico de apoB não seja inferior a 1 cm. 2 Diferentes tipos de anti-soros (como coelhos e ovelhas) são testados pelo preço equivalente, e os resultados serão diferentes. O ensaio da apo AI é de preferência anti-soro de coelho. Quando o soro de coelho é usado, o formato do pico é acentuado e o pico produzido pelo soro de ovelha é espesso, a ponta do pico é redonda e romba e, às vezes, uma imagem fantasma aparece antes do pico. A inclinação da curva de calibração para o soro de calibração também é diferente. No entanto, não importa qual anti-soro é usado, os resultados quantitativos não são muito diferentes. 3 Eletroforese sob certas condições, a altura do pico do soro de calibração de diferentes diluições não mudará significativamente, e a inclinação da curva de calibração é basicamente a mesma. Se a altura do pico da amostra exceder a faixa da curva de calibração, o fator de diluição da amostra deve ser ajustado e testado novamente. O CV inter-board é tipicamente inferior a 5%. 4 Os resultados da eletroforese de foguete podem ser observados por coloração ou observação visual direta do pico do foguete. O primeiro usa menos espécimes e salva anti-soro, mas se os espécimes e anti-soro forem apropriadamente aumentados, é mais conveniente não manchar. A agarose usada deve ser eletroosmótica ou hipotônica padrão.A adição da quantidade adequada de dextrano ou polietilenoglicol ao gel tornará o pico do foguete mais claro. 5 A medição do pico do foguete pode calcular a área ou a altura do pico, e a área é a altura do pico multiplicada pela largura do pico (a largura na metade da altura do pico). A precisão da medição é de preferência até 0,1 mm. Equipamentos mecânicos ou eletrônicos de amplificação devem ser usados. A altura do pico no intervalo da curva padrão é de preferência de 1 a 4 cm. 6 Este método é aplicável à análise de uma pequena quantidade de amostras. Também adequado para determinação de apoAII, CI, CII, CIII, D, E e Lp (a). Processo de inspeção Eletroforese de foguete: 1 placa de vazamento: 10g / L de agarose 10ml por placa, derreta em banho-maria, misture bem, adicione 50μl anti-soro apoA-II e 50µl antisoro apoB quando frio a 50 ~ 55 ° C (a quantidade depende do título de anti-soro) ), rapidamente misturar e despeje a placa de vidro predefinida na plataforma de água, esfriar e depois colocado a 4 ° C, após 20 min, furos, o buraco está na extremidade do cátodo da placa, o diâmetro do furo é de 3 mm, o espaçamento do furo é de pelo menos 5 mm ea capacidade do furo é de 5 μl. Coloque a placa no tanque de eletroforese e ponte com papel de filtro. 2 antígeno diluído: o soro de calibração foi diluído para 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 e 1: 400 (para curva de calibração) com solução de NaCl 0,15mol / L e a amostra de soro foi diluída 1: 200. Coloque o refrigerador a 4 ° C por no máximo 3 dias. 3 Carga: No estado de baixa corrente (10 mA / placa), dilua o soro fixo e os espécimes para absorver 5 μl (precisos) e adicione bem à amostra de gel de agarose. Cada quadro tem que fazer uma série de padrões. 4 poder: fluxo constante 24mA / placa, tensão terminal 6 ~ 8V / cm, refrigeração com água corrente para manter a agarose 15 ° C, eletroforese 3 ~ 4h. 5 prote�a desproteinizada e pel�ula seca: a placa de agarose ap� electroforese foi imersa em NaCl a 0,15 mol / L durante 30 min e a pel�ula foi colocada na pel�ula de poli�ter e a cola foi absorvida pelo papel de filtro multicamada sob press� suave. Umidade, em seguida, secar o papel de filtro, filme e filme de poliéster juntos, ou secá-lo com um ventilador de ar quente.Depois de secar, o filme irá separar-se naturalmente do papel de filtro e do filme de poliéster. 6 coloração: O filme de agarose foi imerso na solução de coloração por 20 a 30 minutos. Descoloração: Mergulhe o filme tingido com uma solução descolorante até que o pico do foguete esteja claro e o fundo seja basicamente incolor. Ele pode ser fixado em dois pedaços de celofane em água e pode ser armazenado por um longo tempo após a secagem. Também pode ser embebido em água corrente para remover o fundo. Não é adequado para a multidão Geralmente não há multidões. Reações adversas e riscos 1. Infecção: Preste atenção à operação asséptica ao coletar amostras de sangue e pare o sangramento após a coleta de sangue para evitar a contaminação de água e líquido para evitar infecção local. 2, sangramento: após o sangue é dado um tempo de compressão total, especialmente coagulopatia, tendência a sangramento, para evitar o subcutâneo local oozing, hematomas e inchaço.