IgE secretora no escarro

O sítio da SIgE é semelhante ao da SIgA, e também é produzido por células plasmáticas na lâmina própria do trato respiratório, distribuído em tecidos mucosos e fluidos exócrinos, locais de invasão de alérgenos e sítio de reações alérgicas. A IgE é um monômero, 8S, 19 × 104 ku, e sua cadeia pesada é mais longa que a cadeia γ. Mais uma região funcional (CH4), que pode se ligar às células (como mastócitos, basófilos) e desencadear a liberação de substâncias bioativas intracelulares sob certas condições, portanto, a IgE é o principal anticorpo que causa alergia do tipo I. . Informação básica Classificação do especialista: Classificação do exame respiratório: exame do escarro Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: jejum Lembrete: Se os componentes do reagente principal estiverem inadequadamente preparados ou armazenados incorretamente, eles são facilmente degradados e inativados. Valor normal 0,1 a 9 mg / l. Significado clínico Aumento: IgE é monômero, 8S, 19 × 104ku, e sua cadeia pesada é maior que a cadeia γ. Mais uma região funcional (CH4), que pode se ligar às células (como mastócitos, basófilos) e desencadear a liberação de substâncias bioativas intracelulares sob certas condições, portanto, a IgE é o principal anticorpo que causa alergia do tipo I. . Em pacientes com asma brônquica e pneumonite por hipersensibilidade, o conteúdo da SIgE no escarro pode ser aumentado. Altos resultados podem ser doenças: asma brônquica, pneumonia alérgica Os principais componentes reagentes no ELISA, tais como antígenos, anticorpos, conjugados enzimáticos, substratos, etc., são facilmente degradados e inativados se não forem adequadamente preparados ou armazenados incorretamente. Existem muitos passos no ELISA, e se a operação não for padronizada, é difícil obter resultados precisos. Portanto, a fim de garantir a eficácia do teste, o controle de qualidade deve ser realizado para cada teste. Os controles positivo e negativo fornecidos nos kits excelentes geralmente podem ser usados ​​como controle de qualidade do teste.De acordo com as instruções, a eficácia do teste pode ser avaliada a partir dos valores de absorbância obtidos. Tomando o teste HBsAg mais comumente usado em testes clínicos como exemplo, o controle negativo no kit deve ser soro humano HBsAg-negativo, e o controle positivo deve indicar o conteúdo HBsAg (por exemplo, 9 ± 2 ng / ml). Três controles negativos e dois controles positivos devem ser feitos simultaneamente para cada lote de testes. O valor de absorvância obtido pelo ensaio de controle negativo deve ser menor que um determinado valor (por exemplo, 0,100), e o valor médio da absorbância do controle positivo menos a absorbância do controle negativo deve ser maior que um determinado valor (por exemplo, 0,200). Estes valores são valores experimentais específicos para o kit sob as condições de ensaio especificadas. Portanto, se os resultados do teste atenderem aos requisitos, isso indica a eficácia dos reagentes utilizados e a exatidão da operação, somente neste caso, o teste do lote é efetivo. Alguns dos controles positivos e negativos contidos no kit não atendem aos requisitos de controle de qualidade, ou às condições de medição do laboratório, como colorímetro, etc., e a diferença na descrição do kit, a qualidade apropriada deve ser usada de acordo com a situação real. Controles e valores de controle de qualidade do laboratório derivado do experimento. O soro de controle de qualidade da mercadoria é caro. A determinação qualitativa de produtos de controle de qualidade ELISA geralmente pode ser preparada por eles mesmos. O teste HBsAg ainda é tomado como exemplo. Controles negativos podem ser obtidos de doadores de sangue que são HBsAg negativos com reagentes de alta qualidade. O controlo positivo pode ser preparado adicionando uma quantidade apropriada de soro positivo para HBsAg ao soro de controlo negativo e comparando o soro misto com um padrão de referência ou um controlo quantitativo para determinar o teor de HBsAg. Então, diluição apropriada é realizada para obter o soro HBsAg-positivo da concentração desejada, e então uma quantidade apropriada de conservantes antibacterianos tais como gentamicina e ácido salicílico são adicionados, e então criopreservados a uma temperatura baixa. Processo de inspeção O ELISA é um método de teste multi-reação, multi-reagente e multi-etapas, que deve ser cuidadosamente e cuidadosamente operado de acordo com os requisitos, caso contrário, resultados precisos não serão obtidos. Os procedimentos de ELISA usados ​​para detectar itens diferentes são ligeiramente diferentes, mas incluem etapas como carregamento, retenção, lavagem e colorimetria.Os pontos de operação de cada etapa são descritos abaixo. 1. Preparação dos reagentes: Diluir ou preparar os reagentes necessários para o teste de acordo com as instruções do kit. Água destilada ou desionizada usada em ELISA, inclusive para lavagem, deve ser fresca e de alta qualidade. O buffer independente deve ser medido com um medidor de pH. A temperatura do reagente de teste retirada do refrigerador deve ser usada após atingir a temperatura ambiente. Nos testes usando HRP como marcador, os recipientes contaminados com metal não estão disponíveis. 2. Carregamento: Prepare uma boa placa de ELISA, conforme necessário. As amostras de soro (fluido de esfola) devem ser recém-colhidas ou devidamente armazenadas no refrigerador.Espécimes altamente hemolisados ​​ou turvos não devem ser usados. Espécimes contendo azida sódica como conservante não estão disponíveis para ELISA de uma etapa para marcação com HRP. Ao adicionar a amostra, adicione a amostra no fundo do orifício, evite adicioná-la à parte superior da parede do orifício e tenha cuidado para não espalhá-la, e nenhuma bolha de ar deverá aparecer. A precisão da quantidade de amostra adicionada na determinação quantitativa deve atender aos requisitos quantitativos. Na medição qualitativa, a precisão da quantidade da amostra às vezes não é enfatizada, por exemplo, é prescrita como uma gota. Neste ponto, você deve usar o mesmo conta-gotas de diâmetro e manter a posição de carregamento correta para que o volume de cada gota seja basicamente o mesmo. O funcionamento e os requisitos para a adição do conjugado enzimático e a adição do substrato são os mesmos que para a adição da amostra. 3. Isolamento: Existem geralmente duas reações antígeno-anticorpo no ELISA, ou seja, após a adição da amostra e após a adição da combinação. Neste momento, a temperatura e o tempo da reação devem ser tão precisos quanto necessário. O recipiente isolado é de preferência um banho de água, e o fundo da placa de ELISA deve ser colocado na água para equilibrar rapidamente a temperatura. Cada placa de ELISA não deve ser empilhada em conjunto. Para evitar a evaporação, a placa deve ser coberta. A placa também pode ser colocada plana em uma caixa úmida com gaze molhada na parte inferior. A caixa molhada deve ser pré-aquecida até a temperatura especificada, por exemplo, o isolamento da incubadora é mais importante. 4, lavar: lavar no processo ELISA não é um passo de reação, mas decidiu fechar a chave para o sucesso. O objectivo da lavagem é lavar as substâncias da solução reaccional que estão ligadas ao antigénio ou anticorpo da fase sólida e às substâncias interferentes que são adsorvidas de forma não específica ao transportador em fase sólida durante a reacção. A adsorção de proteínas por plásticos como o poliestireno é universal, portanto, a adsorção não específica deve ser evitada tanto quanto possível durante o ensaio ELISA, e essa substância interferente não especificamente adsorvida deve ser lavada durante a lavagem. A adição de Tween ao líquido de lavagem pode melhorar o efeito de lavagem. Se a lavagem não for exaustiva, especialmente na última vez, se houver adsorção não específica do conjugado enzimático, o valor em branco será aumentado. Além disso, no método indireto, se a IgG não específica na amostra for adsorvida na fase sólida sem ser lavada, ela também interferirá no anticorpo marcado com enzima. A placa de ELISA �geralmente lavada pelos seguintes m�odos: 1 absor�o da solu�o reaccional; 2 enchimento da placa com a solu�o de lavagem; 3, colocando-a durante 2 minutos, agitando ligeiramente; 4 absorvendo ou vertendo o l�uido no orif�io e batendo no papel absorvente. O número de lavagens é geralmente de 3 a 4 vezes e, às vezes, de 5 a 6 vezes. Uma placa de lavar automática ELISA também pode ser usada, mas o uso real do instrumento deve ser verificado primeiro. Cada pipeta da arruela também deve ser colocada próxima ao fundo do furo correspondente. Para garantir o mesmo efeito de lavagem de cada furo. 5. Desenvolvimento de cor e colorimétrico: A temperatura e o tempo da reação após a adição do substrato na determinação quantitativa ainda devem ser precisos de acordo com os regulamentos. Contudo, a reacção pode geralmente ser realizada à temperatura ambiente num ensaio qualitativo. Se o substrato for OPD, ele deve ser colocado longe da luz. O tempo de reação não precisa ser estritamente controlado, e às vezes a solução de parada pode ser adicionada a tempo de acordo com a coloração do controle positivo e do controle negativo. Para garantir o mesmo tempo de reação para cada poço, o procedimento e a velocidade de adição da solução de parada devem ser os mesmos da adição do substrato. A determinação qualitativa, como uma reação negativa, é leve e, às vezes, os resultados podem ser avaliados visualmente. O ELISA de placa geralmente usa um leitor de rótulo de enzima para ler a absorbância em um comprimento de onda especificado. O leitor de etiquetas automático deve ser testado quanto à compatibilidade com os poços da placa de ELISA utilizada e a repetibilidade dos resultados antes do uso. Quando colorimétrico, primeiro verifique o ponto zero com água destilada, leia os poros do substrato (os poros sem reação e adicione apenas o substrato) e os poços em branco (os poros medidos pela solução salina ou PBS ao invés do espécime para todo o processo) para registrar este tempo. O status do reagente do teste. Depois disso, o furo vazio pode ser usado para calibrar o ponto zero, e a absorbância do orifício de amostra, o orifício padrão e o orifício de controle podem ser lidos. Se o ponto zero ainda for corrigido pela água destilada, a absorbância dos furos acima deve ser subtraída da absorbância dos furos vazios no cálculo. Não é adequado para a multidão Pessoas inadequadas: Geralmente não há pessoas que não sejam adequadas. Reações adversas e riscos Nenhuma reação adversa.