Exame cromossômico de cultura de células do líquido amniótico

Devido a produtos químicos nocivos, exposição a raios-X, fatores ambientais, gravidez avançada, parentes próximos, etc., levando a doenças causadas pela variação no número, morfologia, estrutura e combinação de cromossomos durante a gravidez. O exame cromossômico das células do líquido amniótico tem grande significado específico para o diagnóstico pré-natal de doenças cromossômicas. Informação básica Especialista Categoria: Maternal Examination Check Categoria: Testes Genéticos (DNA) Sexo aplicável: se as mulheres estão em jejum: jejum Resultados da análise: Abaixo do normal: Valor normal: Não Acima do normal: Negativo: Número total de cromossomos: 46. Autossomo: 22 pares (número 1-22). Cromossomos sexuais: XY para homens e XX para mulheres. Cariótipo masculino: 46, XY. Cariótipo feminino: 46, XX. Positivo: Resultados diferentes dos valores normais são positivos, sugerindo uma malformação congênita ou outra doença congênita. Dicas: O exame cromossômico deve coletar amostras de líquido amniótico em 16 a 20 semanas de gestação. Valor normal O número total de cromossomos é 46. 22 pares de autossomos (numerados de 1 a 22). O macho do cromossomo sexual é XY e a fêmea é XX. Cariótipo masculino 46, XY. Cariótipo feminino 46, XX. Significado clínico Número anormal de cromossomos, como síndrome de Down (trissomia do cromossomo 21), trissomia do cromossomo 18, trissomia do cromossomo trissômico 38, trissomia do cromossomo 21, síndrome da hipoplasia testicular congênita, síntese de XXY Sinal, síndrome de Turner, síndrome da trissomia do cromossomo X e síndrome do corpo múltiplo do X. Estrutura cromossômica anormal, como síndrome de monômero parcial 4p, síndrome de monômero parcial 5p, síndrome de trissomia parcial 9p, síndrome de monômero parcial 9q, síndrome de monômero parcial 21q, síndrome de monômero parcial 22q, trissomia parcial 22q Síndrome, etc. Os resultados positivos podem ser doenças: hipoplasia ovariana congênita, paralisia cerebral pediátrica, síndrome de Down pediátrica, paralisia cerebral pediátrica, síndrome pascal pediátrica, síndrome de Diggolger, síndrome de miau pediátrica, desenvolvimento testicular congênito pediátrico Considerações sobre doenças genéticas incompletas 1. O exame cromossômico deve coletar amostras de líquido amniótico em 16 a 20 semanas de gestação. 2, essas doenças genéticas congênitas têm aumentado, falta, translocação, inversão e outras anormalidades quantitativas e estruturais, muitas vezes manifestadas como uma síndrome. A maioria dos casos, como malformações múltiplas, retardo de crescimento e retardo mental, leva ao abortamento fetal, ao nascimento prematuro ou à natimortalidade. Processo de inspeção (1) Tome 15 a 30 ml de líquido amniótico por 16 a 20 semanas de gestação e centrifugue a 1000 r / ml por 10 min. (2) Descartar o sobrenadante em excesso, deixar 1 ml de líquido amniótico e células precipitadas, e dispersar suavemente em uma suspensão de células. (3) Transferir para um balão de cultura de 25 ml, juntar 3 ml de um meio com pH entre 6,5 e 6,8 (contendo penicilina 100 U / ml, estreptomicina 100 μg / ml) e 1 ml de soro de vitelo e incubar a 37 ° C. (4) Um grande número de colônias de células semelhantes a fibroblastos ou epitelióides foi observado após 7-10 dias de cultura. O meio fresco pode ser trocado neste momento. (5) Quando as colônias celulares são expandidas em pedaços e há muitas células divisórias circulares translúcidas, colchicina pode ser adicionada para fazer a concentração final 0.1-0.3 μg / ml, e então cultivada em uma incubadora a 37 ° C por 5-6 h. (Os procedimentos acima são todos realizados sob condições assépticas). Padrões de colheita: 1 com fibroblastos como o principal tipo, o crescimento das células, 2 com 10x oculares e 20x observação objetiva, os clones de células em crescimento cobrem 1 ou mais campos completos de visão, 3 ver mais de 10 translúcidos Células redondas e mais de 10 células divisórias brilhantes redondas duplas. (6) Se as células não estão crescendo vigorosamente, o ciclo de crescimento não é uniforme ou as células estão envelhecendo, e o padrão de colheita não é alcançado, a subcultura pode ser continuada no frasco original. Método: Sob condições estéreis, a solução de cultura foi primeiro vertida e adicionaram-se algumas gotas de solução de tripsina estéril 2,5 g / L, e a mistura foi agitada e vertida. Além disso, 5 a 10 gotas de tripsina foram adicionadas e agitadas suavemente a 37 ° C durante cerca de 5 minutos para provocar a queda das células aderentes. Foram adicionados 4 ml de meio fresco contendo soro de vitelo e a cultura foi deixada em repouso a 37 durante 4 a 5 horas. Mude cuidadosamente o meio de cultura e continue a cultura, que pode ser colhida 3 a 5 dias após a passagem. (7) Transferir a solução de cultura para um tubo centrífugo graduado, adicionar 1 ml de solução de ED-TA-tripsina ao frasco, colocar em incubadora a 37 ° C por 5 min, e depois enxaguar as células aderentes com uma pipeta de cotovelo (2,5 g / também pode ser usado) L digestão da solução de tripsina). As culas separadas da parede da garrafa foram vertidas num tubo de centrifugao, misturadas com a fase luida da cultura original e o bal de cultura foi lavado com uma pequena quantidade de soluo salina fisiolica morna e as culas lavadas foram tamb vertidas para o tubo de centrifugao e centrifugadas a 1000 rpm durante 10 min. (8) Aspirar o sobrenadante, adicionar 3 a 5 ml de solução hipotônica KCl 0,075 mol / L pré-aquecido a 37 ° C e ajustar a 37 ° C por 10 a 15 min. (9) A pré-fixação, a fixação e a preparação são as mesmas do método de preparação das amostras de cromossomas das células do sangue periférico. Não é adequado para a multidão 1. Houve sinais de aborto durante a gravidez. 2. Quando a temperatura do corpo excede 37,5 ° C. 3. Esfoliação precoce da placenta, infecção abdominal e purulenta. Reações adversas e riscos (1) lesão materna: punção punção agulha vasos sanguíneos ferida causada por hematoma da parede abdominal hematoma subseroso uterino. Ocasionalmente, o líquido amniótico entra na circulação sanguínea materna do orifício da punção e causa embolia do líquido amniótico. A bexiga não foi esvaziada antes da punção e a bexiga foi lesada. (2) Lesão do feto, placenta e cordão umbilical: A agulha de punção pode danificar o feto e causar sangramento, e a placenta e o cordão umbilical também podem causar sangramento ou hematoma. Portanto, a fonte de sangramento deve ser identificada quando se toma líquido amniótico hemorrágico. Se você suspeitar que é de um feto, continue a ouvir o coração fetal. (3) Vazamento de líquido amniótico: líquido amniótico pós-operatório vaza do orifício, causando muito pouco líquido amniótico, afetando o desenvolvimento fetal e até causando aborto espontâneo ou parto prematuro. (4) aborto ou parto prematuro: a incidência de aborto ou parto prematuro é de 0,1% -0,2%, muitas vezes ocorre dentro de uma semana após a cirurgia, mesmo após a punção, ruptura prematura de membranas leva ao parto prematuro. (5) infecção intra-uterina: pode haver febre materna após a cirurgia. Infecção intra-uterina pode causar desenvolvimento fetal anormal, ou até mesmo a morte fetal. Portanto, a amniocentese deve ser estritamente asséptica.