Ensaio de transformação de linfócitos PHA

O teste de transformação de linfócitos PHA é uma alteração morfológica e bioquímica na qual os linfócitos T e os mitógenos são co-cultivados in vitro, e alguns linfócitos pequenos são transformados em células-mãe imaturas e submetidos à mitose. Método Informação básica Classificação do especialista: Classificação do exame de oncologia: exame imunológico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: não jejuar Dicas: Preste atenção a uma dieta saudável e mantenha um bom humor. Valor normal Contagem de linfócitos 200, identificação de linfoblastos (mais de 2 a 4 vezes mais que linfócitos normais, membrana nuclear clara, placa nuclear solta, núcleo fino, nucléolos evidentes, citoplasma abundante, basofílico), transicional Os linfócitos (menos alterações no volume, apenas as alterações nucleares óbvias acima mencionadas), os pequenos linfócitos (ligeiramente maiores que os glóbulos vermelhos, a cromatina nuclear densa, os nucléolos), a taxa de conversão foi contada. A taxa de conversão dermatológica normal é superior a 58%. Significado clínico A diminuição na taxa de transformação de linfócitos PHA é uma resposta a uma diminuição na função imune celular. Neste exame, a dermatologia é usada principalmente para classificação de doenças (como hanseníase), julgamento de doenças (como tumores malignos da pele), observação da eficácia de medicamentos e alguns estudos de imunodeficiência e doenças alérgicas da pele. Resultado anormal Vários sintomas causados ​​pela diminuição da função imunológica. A pessoa que necessita de exame é suspeita de sofrer de sintomas de lepra ou malignidade da pele. Precauções 1. A composição do meio tem uma grande influência na taxa de conversão, preste atenção ao seu período efetivo. 2. O soro de bezerro deve ser inativado antes do uso. 3. Ao cultivar, certifique-se de que há gás suficiente Geralmente, a quantidade total de líquido no frasco de cultura de 10ml não deve exceder 2ml. 4. A dose excessiva de PHA é tóxica para as células, muito pequena para estimular a transformação de linfócitos.A dose da reação de conversão de PHA deve ser determinada antes do teste. 5. Operação estrita asséptica deve ser realizada no experimento para evitar a poluição. Tabu antes do teste: preste atenção a uma dieta saudável e mantenha um bom humor. Exigências para inspeção: cooperar ativamente com o doutor. Processo de inspeção Método de operação: 1. Tome anticoagulante asséptico de heparina 0,1 ml, adicione 1,8 ml de meio de cultura celular, adicione 1000μg / ml PHA0.1m1, controle o tubo sem PHA, cultive as células a 37 ° C, 5% de CO2 para 3d, agite 1 por dia Vezes. 2. No final da cultura, a maior parte do sobrenadante foi descartada e foram adicionados e misturados 8,5 g / L de NH4Cl4ml, e colocados num banho de ua a 37 durante 10 min. Centrifugar a 3.2500r / min por 10min, descartar o sobrenadante, adicionar 5ml de fixador ao pellet e deixar repousar à temperatura ambiente por 5min. Centrifugar a 4.2500 r / min por 10 min, descartar o sobrenadante, deixar 0,2 ml de células sedimentadas para a formação de comprimidos e secar com jato de água rapidamente. 5. A solução de tingimento de Giemsa é corada durante 10-20 min, lavada com água e seca. 6. Espelho de Óleo Conta o número de células transformadas em 200 linfócitos e calcula a taxa de conversão. O resultado é julgado: 1. Critérios morfológicos dos linfoblastos: o tamanho do núcleo, a relação entre o núcleo e o citoplasma, a coloração do citoplasma e a estrutura do núcleo e a presença ou ausência de nucléolos. (1) Pequenos linfócitos maduros: o tamanho dos pequenos linfócitos não cultivados é de 6-8 μm, a coloração nuclear é densa, não há nucléolos, a proporção de núcleo para citoplasma é grande e o citoplasma é corado para basofílico leve. (2) Linfócitos transicionais: maiores que os linfócitos pequenos, cerca de 10 a 20 μm, a coloração nuclear é densa, mas os nucléolos aparecem, que é o ponto-chave para a identificação de pequenos linfócitos maduros. (3) linfoblastos: o volume da célula aumenta, cerca de 20 ~ 30μm, a forma não é pura, muitas vezes pequena protrusão, aumento nuclear, coloração nuclear solto, há 1 ou 2 nucléolos, citoplasma de alargamento, muitas vezes citoplasma Bolha vazia. (4) Outras células: Por exemplo, após a cultura de neutrófilos por 72 horas, a maior parte da deterioração ou morte é fragmentação. 2. Cálculo da taxa de transformação de linfócitos A cabeça, o corpo e a cauda foram examinados na classificação acima, e 200 linfócitos foram contados para calcular a percentagem. Os linfócitos transformados incluem linfoblastos e linfócitos transicionais e os linfócitos não transformados referem-se a pequenos linfócitos maduros. Em circunstâncias normais, a taxa de transformação de linfócitos induzida por PHA é de 60 a 80% e, se for de 50 a 60%, é baixa e, quando é de 50% ou menos, diminui. De acordo com os resultados, o julgamento correto é obtido. Não é adequado para a multidão Multidão imprópria: temporariamente desconhecida. Reações adversas e riscos Não há complicações e perigos relacionados.