Ensaio de cultura de linfócitos mistos

A cultura mista de linfócitos (MLC) é um método de teste para determinar o grau de compatibilidade entre um receptor e um antígeno principal de histocompatibilidade do doador (antígeno HLA), e é comumente usado para correspondência de tecidos antes do transplante de órgãos. A cultura mista de linfócitos é uma cultura mista de dois fatores, de linfócitos doadores e receptores, ou inativação de linfócitos doadores para uma cultura mista, e a extensão da resposta celular é negativamente correlacionada com o grau de compatibilidade do doador-receptor. Informação básica Classificação especializada: classificação de verificação de crescimento e desenvolvimento: exame imunológico Sexo aplicável: se homens e mulheres aplicam jejum: não jejuar Dicas: Pessoas com alta rejeição não devem fazer essa verificação. Valor normal A taxa de conversão do método de contagem morfológica é <10%. O método de contagem de isótopos compara cpm para obter P> 0,05. Significado clínico Resultados anormais: No transplante renal, a taxa de conversão de dadores vivos deve ser <10%, devendo a taxa de conversão de dadores de cadáveres ser> 10%. A correspondência de baixa reação só pode ser usada no mesmo lote de experimentos. Uma taxa de conversão de linfócitos de 10% é compatível entre tecidos de diferentes corpos. O teste de cultura mista de linfócitos é usado para detectar o estado imunológico do paciente. Quando o número de linfócitos T é reduzido, a taxa de conversão também é reduzida. Ele pode ser usado como um método de correspondência para transplante de órgãos e medula óssea para selecionar um doador adequado. Se a taxa de conversão for alta, ela será usada para a diferença entre o destinatário e o destinatário. A taxa de conversão é baixa e a taxa de sucesso após o transplante é alta. Precisa detectar pessoas: Pessoas com imunidade prejudicada ou ausente. Precauções No momento do exame: Este teste pode ser usado como um método para triagem de doadores para transplante de órgãos, aqueles com baixa taxa de conversão têm alta taxa de sucesso e aqueles com alta taxa de conversão têm baixa taxa de sucesso. Processo de inspeção 1. Preparação de linfócitos doadores: Adicionou-se sangue venoso periférico fresco a um tubo de centrífuga contendo uma solução de separação de linfócitos com uma gravidade específica de 1,077 numa proporção de 1: 1 e aplicou-se suavemente à superfície do líquido Centrifugar a 2000 r / min durante 20 min para absorver a camada halo-linfócito intermédia. Lavar duas vezes, coloração com azul tripano, contagem da placa de contagem, ajustar a densidade celular para 2 × 109 / L, dividir em 3 tubos, centrifugar separadamente e deixar um precipitado Adicionar 250 μL de mitomicina a cada tubo (concentração final 50 mg / L) E 1,75 mL de solução salina fisiológica, banho-maria a 37 ° C por 40 min e lavado duas vezes com soro fisiológico. Ajustar a densidade celular para 1 x 10 10 / L com solução RPMI1640 contendo 100 mL / L de soro bovino fetal. Adicionar o anticorpo para bloquear o antígeno. 2. Preparação de linfócitos receptores: Adicionou-se sangue venoso periférico fresco a um tubo de centrífuga contendo uma solução de separação de linfócitos com uma gravidade específica de 1,077 numa proporção de 1: 1 e aplicou-se suavemente à superfície do líquido Centrifugar a 2000 r / min durante 20 min para absorver a camada halo-linfócito intermédia. Lave duas vezes Ajuste a densidade celular para 1 × 1010 / L com meio RPMI1640 contendo 120 mL / L de soro bovino fetal. 3. Cultura mista de linfócitos: O preparado R e D foram adicionados à placa de 96 poços como segue, e cultivados em uma incubadora de 50 mL / L CO2 por 24 horas a 37 ° C. Grupo A: R50 μL + D 50 μL; Grupo B: R50 μL + D50 μL + IL 2 purificação e neutralização do mAb 15 μL Grupo C: R50L + IL2 purificado e neutralizado mAb 15μL Grupo D: R50μL Cada grupo possuía 3 poços duplicados e o grupo de controlo em branco era 100μL de meio RPMI1640. Não é adequado para a multidão Não é adequado para pessoas: pessoas com alta rejeição. Reações adversas e riscos Não há complicações e perigos relacionados.

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