Método da peroxidase de anti-rábano-peroxidase

As características do complexo PAP estão relacionadas ao método de preparação do reagente. O HRP é usado pela primeira vez para imunizar animais para produzir anticorpos anti-HRP altamente específicos e com alto título, e então o HRP é usado para ligá-los, porque o complexo anti-HRP HRP preparado in vitro é diferente de outras reações antígeno-anticorpo . Quando o antígeno é um pouco excessivo, todos os anticorpos anti-HRP participam da formação de complexos solúveis de PAP, deixando apenas um pouco de HRP livre. No entanto, a maioria das reações antígeno-anticorpo requer um excesso absoluto de antígeno para formar um complexo solúvel. A forma do complexo PAP é bastante estável e não é afetada pela quantidade de antígeno. Independentemente da adição inicial de antígenos e anticorpos, a proporção HRP / anti-HRP do complexo PAP resultante é principalmente 3; 2. É aplicada sedimentação centrífuga. Os métodos de difusão em fase líquida e observação em microscópio eletrônico mostraram que o complexo PAP possui uma estrutura em anel pentagonal, três cantos são HRP e os outros dois cantos são anticorpos anti-HRP com uma massa molecular de 400-430 kDa, e essa estrutura é muito estável.