Serumproteinelektrofores (SPE)

Biomolekyler som proteiner har en negativ eller positiv laddning i en buffert och rör sig mot en anod eller en katod i ett elektriskt fält, som kallas elektrofores. På grund av deras olika isoelektriska punkter, olika molekylstorlek, form och laddning-till-massförhållande, har olika proteinmolekyler olika elektroforetiska rörlighet, och olika proteiner kan separeras i ett visst bärande medium. Vanligt använda elektroforestekniker inkluderar cellulosaacetatmembranelektrofores, agarosgelelektrofores, polyakrylamidgelelektrofores och immunoelektrofores. Dessutom har multipelt myelom ofta M-globulinband mellan beta-globulinregionen och gammaglobulinregionen; dubbelalbuminemi visar ett dubbelalbuminband. Grundläggande information Specialistklassificering: klassificering av tillväxt och utveckling: biokemisk undersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: fasta Inklusive föremål: serum β2 mikroglobulin (β2-MG), serum α2-makroglobulin, serum α1-mikroglobulin Tips: fastande 12 timmar, venöst blodprov, prov måste vara färskt blod. Innan testet ska du informera läkaren om de läkemedel du nyligen har tagit och de senaste fysiologiska förändringarna. Normalt värde Cellulosaacetatmembranelektroforesalbumin 0,61 ~ 0,71 (61% ~ 71%), a1 globulin 0,03 ~ 0,04 (3% ~ 4%), a2 globulin 0,06 ~ 0,10 (6% ~ 10%), beta globulin 0,07 till 0,11 (7% till 11%) och gammaglobulin 0,09 till 0,18 (9% till 18%). Klinisk betydelse 1, albuminreduktion finns i kronisk hepatit, skrump, levercancer och så vidare. 2, α1 globulin (glykoprotein) ökade i primär levercancer. Det reduceras i svår hepatit, skrump och leverkoma och är positivt korrelerat med albumin. Bestämningen av α1 globulin vid leversjukdom har referensvärde för att bedöma svårighetsgraden och prognosen för hepatit. I allmänhet indikerar ökningen av α1 globulin att tillståndet är milt och minskningen av α1 globulin indikerar att tillståndet är tyngre. Vid allvarligt leversvikt kan seruminnehållet minskas avsevärt. 3. Det fanns ingen signifikant förändring i det inledande stadiet av α2 globulin viral hepatit och ökade gradvis efter en vecka. Subakut hepatit och akut levernekros och dekompenserad cirrhos reducerades. 4 ökade beta-globulin i fet lever, hyperlipidemi, nefrotiskt syndrom, diabetes med hyperkolesterolemi, obstruktiv gulsot, maligna tumörer. Vid kolestasleversjukdom ökar dess innehåll, parallellt med ökningen av α2 globulin. Minskad i akut och kronisk hepatit minskade skrump, speciellt dekompenserad skrump och nekrotisk skrump. 5 ökade gammaglobulin vid kronisk hepatit, skrump, lever- och gallblåssjukdom. Typisk cirrhos kan ses i fusionen av p- och y-band för att bilda en p-y-bro. Förändringar i gammaglobulin hos patienter med leversjukdom kan återspegla svårighetsgraden av tillståndet. När tillståndet förbättras kan innehållet gradvis sjunka till normalt.Om det fortsätter att sjunka på en hög nivå indikerar det att tillståndet är allvarligt, prognosen är dålig och det finns en tendens att utveckla kronisk hepatit och skrump. Dessutom kan infektion, schistosomiasis, multipelt myelom, bindvävssjukdom etc. också höjas. Minska förekomsten av gammaglobulinbrist, delvis kemoterapipatienter. Dessutom har multipelt myelom ofta M-globulinband mellan beta-globulinregionen och gammaglobulinregionen; dubbelalbuminemi visar ett dubbelalbuminband. Låga resultat kan vara sjukdomar: höga resultat av kolestatisk gulsot kan vara sjukdomar: levercirrhos, primär levercancer, multipelt myelom hos äldre 1, fasta 12 timmar, venöst blodprov, prover måste vara färskt blod. 2. Innan testet ska du informera läkaren om de läkemedel du nyligen har tagit och de senaste fysiologiska förändringarna. 3. Fysiologisk förhöjning kan förekomma i följande fall: (1) Ökningen av α1-globulin kan ses efter 6 månaders graviditet. (2) Ökningen av α2-globulin kan ses hos spädbarn födda 1 till 6 månader, med en måttlig ökning under 4 till 6 månaders graviditet och en signifikant ökning på 7 till 9 månader. (3) β-globulin förhöjning ses hos barnet efter födseln, 4 till 6 månader av graviditeten. (4) Ökningen av y-globulin ses efter vaccinationet mot vaccination. Inspektionsprocess 1. Lägg bufferten i elektroforesetanken och justera bufferten i tankarna på båda sidor så att de blir i samma plan. 2. Beredning av cellulosaacetatfilm: Ta en cellulosaacetatfilm (2 cm × 8 cm) och rita en horisontell linje med en blyertspenna på 1,5 cm (en sida av den negativa sidan) av den grova ytan för att få ett prickat märke. Efter numrering och indikering av de positiva och negativa elektroderna nedsänktes filmen i barbiturat-barbital-natriumbuffertlösningen, och efter att den var tillräckligt mättad (vanligtvis 20 minuter) avlägsnades överskottsbufferten genom att smaka det rena filterpapperet. 3. Cellulosaacetatfilmhåret fästs i elektroforesbehållaren och rätas ut. Pipettera 3 ~ 5μl icke-hemolytiskt serum med en mikropipett och tillsätt den längs den horisontella linjen vid den horisontella linjen. Provet ska hållas på ett visst avstånd från kanten av filmen för att undvika deformation av proteinbandet i elektroforesmönstret. Efter att serum tränger in i filmen vänds filmen. Med den ljusa sidan uppåt, sticker du den platt på elektroforesbehållaren och anslut de två ändarna av filmen till bufferten med dubbelskiktsfilterpapper eller fyra lager gasväv och vänta ett tag. 4, slå på strömmen, uppmärksamma de positiva och negativa elektroderna på cellulosaacetatfilmen, anslut inte fel. Spänning 90 ~ 150v, ström 0,4 ~ 0,6 mA / cm (olika elektrofores krävs spänning, ström kan vara annorlunda, borde vara flexibel), sommarkraft 45 min, vinterens starttid är något längre, ca 60 min, elektroforeszons expansion ca 25 ~ 35mm kan vara. 5, färgning: När strömmen är klar, ta bort filmen och sänk direkt ned i Lichunhong S-färglösningen eller aminosvart 10B-färgningslösningen, färg i 5 till 10 minuter (med albuminsonen) och skölj sedan återstående i sköljlösningen. Färg tills bakgrunden är färglös. 6, kvantitativ: 1 kolorimetrisk metod: tappa den sköljda filmen, skär det färgade proteinområdet i motsvarande rör, tillsätt 0,6 ml / L natriumhydroxid 6 ml i albuminröret (beräkna absorbansen multiplicerad med 2), resten Tillsätt 3 ml i varje rör, skaka det flera gånger och placera det i en vattentank på 37 ° C i 20 minuter för att få färgen urlakning. Amino Black 10B-färgning Absorbansen för varje rör avlästes vid 620 nm med användning av en spektrofotometer, och därefter beräknades innehållet i varje rör (samtidig kontroll av blantröret). När Lichunhong S färgades behandlades lakvattnet med 0,1 mol / L natriumhydroxid, och mängden var densamma som ovan. Efter 10 minuter, tillsätt 0,6 ml 400 ml / L ättiksyra till albuminröret (multiplicera absorbansen med 2) och tillsätt 0,3 ml till de andra rören för att neutralisera en del av natriumhydroxiden för att göra färgen djupare. Om nödvändigt, centrifugera och ta supernatanten. Absorbansen för varje rör avlästes vid 520 nm med en spektrofotometer (samtidig blankkontroll), och därefter beräknades respektive innehåll. 2 Densitometer-skanningsmetod: A. Genomskinlig: Aspirera sköljvätskan på filmen (för att förhindra att den transparenta vätskan späds ut för att påverka det transparenta resultatet), sänk ned filmen i den transparenta vätskan i 2 till 3 minuter, ta sedan ut den och platta den på ett rullande sätt. Rengör det repfria glasstycket (skapa inte bubblor), ställ in bilden ett tag, ta bort överskottet av genomskinlig vätska, placera den i en ugn vid en konstant temperatur från 90 ° C till 100 ° C, grädda i 10 till 15 minuter, ta bort och kyla till Vid rumstemperatur är proteinområdena transparenta med denna metod distinkta, filmen är platt och kan direkt skannas och permanent bevaras (transparent med väte-naftalen eller flytande paraffin. Den sköljda filmen ska torkas och transparent, och den transparenta filmen kan inte vara transparent) Det varar länge och är benägen att rynkor). B. Skanningskvantifiering: Den transparenta filmen placeras i en helautomatisk densitometer eller annan densitometer mörk ruta för skanningsanalys. Inte lämplig för publiken Inga. Biverkningar och risker Inga.