PHA-lymfocyttransformationsanalys

PHA-lymfocyttransformationstestet är en morfologisk och biokemisk förändring där T-lymfocyter och mitogener samodlas in vitro, och vissa små lymfocyter omvandlas till omogna moderceller och utsätts för mitos. metod. Grundläggande information Specialklassificering: Klassificering av onkologiundersökningar: immunundersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: inte fasta Tips: Var uppmärksam på en hälsosam kost och upprätthålla ett gott humör. Normalt värde Räkna lymfocyter 200, identifiera lymfoblaster (mer än 2 till 4 gånger mer än normala lymfocyter, tydligt kärnmembran, lös kärnplatta, fin kärna, uppenbar nukleoli, riklig cytoplasma, basofil), övergång Lymfocyter (mindre volymförändring, endast de ovan nämnda uppenbara kärnkraftsförändringarna), små lymfocyter (något större än röda blodkroppar, tätt kärnkromatin, inga nukleoli), omräkningshastigheten räknades. Den normala dermatologiska omvandlingsgraden är större än 58%. Klinisk betydelse Minskningen av PHA-lymfocyttransformationstakten är ett svar på en minskning av cellulär immunfunktion. Denna undersökning, dermatologi används mest för sjukdomsklassificering (såsom spetälska), bedömning av sjukdomar (såsom maligna tumörer i huden), observation av läkemedelseffektivitet och några studier av immunbrist och allergiska hudsjukdomar. Onormalt resultat Olika symptom orsakade av nedsatt immunfunktion. Den som har behov av undersökning misstänks ha lidit av symptom på spedalskhet eller malignitet i huden. försiktighetsåtgärder 1. Mediets sammansättning har stort inflytande på konverteringsgraden, var uppmärksam på dess effektiva period. 2. Kalveserum bör inaktiveras före användning. 3. Vid odling, se till att det finns tillräckligt med gas. Generellt sett bör den totala vätskemängden i 10 ml odlingsflaska inte överstiga 2 ml. 4. Överdriven PHA-dos är giftig för celler, för liten för att stimulera lymfocyttransformation. Dosen av PHA-omvandlingsreaktionen bör bestämmas före testet. 5. Strikt aseptisk operation bör genomföras i experimentet för att förhindra förorening. Tabu före testet: var uppmärksam på en hälsosam kost och upprätthålla ett gott humör. Krav för inspektion: Samarbeta aktivt med läkaren. Inspektionsprocess Funktionsmetod: 1. Ta aseptisk heparin-antikoagulant 0.lml, tillsätt 1,8 ml cellodlingsmedium, tillsätt 1000μg / m1 PHA0.1m1, kontrollrör utan PHA, odla cellerna vid 37 ° C, 5% CO2 för 3d, skaka 1 per dag gånger. 2. I slutet av kulturen kasserades det mesta av supernatanten och 8,5 g / L NH4Cl 4 ml tillsattes och blandades och placerades i ett vattenbad på 37 ° C under 10 minuter. Centrifugera vid 3,2500 r / min under 10 minuter, släng supernatanten, tillsätt 5 ml fixativ till pelleten och låt den stå vid rumstemperatur i 5 minuter. Centrifugera vid 4,2500 r / min under 10 minuter, släng supernatanten, lämna 0,2 ml pelleterade celler för tablettering och blåsa snabbt torrt. 5. Giemsa färgningslösning färgas i 10-20 minuter, tvättas med vatten och torkas. 6. Oil Mirror Räknar antalet celler transformerade i 200 lymfocyter och beräknar konverteringsgraden. Resultatet bedöms: 1. Morfologiska kriterier för lymfoblaster: storleken på kärnan, förhållandet mellan kärnan och cytoplasma, färgningen av cytoplasma och strukturen i kärnan och närvaron eller frånvaron av nukleoli. (1) Mogna små lymfocyter: storleken på de odlade små lymfocyterna är 6-8 μm, den nukleära färgningen är tät, ingen nukleoli, förhållandet mellan nukleär och cytoplasma är stort och cytoplasman är färgad till mild basofil. (2) Övergångslymfocyter: större än små lymfocyter, cirka 10 ~ 20μm, kärnfärgning är tät, men nukleoli visas, vilket är nyckelpunkten för identifiering av mogna små lymfocyter. (3) lymfoblaster: cellvolymen ökar, cirka 20 ~ 30 μm, formen är inte snygg, ofta liten utsprång, kärnutvidgning, kärnfärgning lös, det finns 1 eller 2 nukleoli, cytoplasma utvidgas, ofta cytoplasma Tom bubbla. (4) Andra celler: Till exempel efter neutrofilkultur under 72 timmar är det mesta av förfallet eller döden fragmentering. 2. Beräkning av lymfocyttransformationshastighet Huvud, kropp och svans undersöktes i ovanstående klassificering, och 200 lymfocyter räknades för att beräkna procenttalet. Transformerade lymfocyter inkluderar lymfoblaster och övergångslymfocyter, och otransformerade lymfocyter hänför sig till mogna små lymfocyter. Under normala omständigheter är den PHA-inducerade lymfocyttransformationstakten 60 till 80%, och om den är 50 till 60% är den låg, och när den är 50% eller mindre, minskar den. Enligt resultaten erhålls rätt bedömning. Inte lämplig för publiken Olämplig publik: tillfälligt okänd. Biverkningar och risker Det finns inga relaterade komplikationer och faror.