Blandad lymfocytkulturanalys

Blandad lymfocytkultur (MLC) är en testmetod för att bestämma graden av kompatibilitet mellan en receptor och en givares huvudsakliga histokompatibilitetsantigen (HLA-antigen) och används vanligen för vävnadsmatchning före organtransplantation. Blandad lymfocytodling är en tvåvägs blandad kultur av givar- och mottagarlymfocyter, eller inaktivering av givarlymfocyter till en blandad kultur, och graden av cellulärt svar korreleras negativt med graden av givarmottagares kompatibilitet. Grundläggande information Specialistklassificering: klassificering av tillväxt och utvecklingskontroll: immunologisk undersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: inte fasta Tips: Personer med högt avslag bör inte göra den här kontrollen. Normalt värde Den morfologiska räkningsmetodens omvandlingsfrekvens är <10%. Isotopräkningsmetoden jämför cpm för att erhålla P> 0,05. Klinisk betydelse Onormala resultat: Vid njurtransplantation bör omvandlingsgraden för levande givare vara <10%; konverteringskursen för cadaveriska givare bör vara> 10%. Matchning med låg reaktion kan endast användas i samma experimentperiod. En lymfocytomvandlingsgrad på 10% är kompatibel mellan vävnader i olika kroppar. Testet med blandad lymfocytkultur används för att detektera patientens immunstatus. När antalet T-lymfocyter minskas, sänks också konverteringsgraden. Det kan användas som en matchande metod för organ- och benmärgstransplantation för att välja en lämplig givare. Om konverteringsfrekvensen är hög, används den för skillnaden mellan mottagare och mottagare. Konverteringsfrekvensen är låg och framgångsgraden efter transplantationen är hög. Behöver upptäcka människor: Personer med nedsatt immunitet eller saknas. försiktighetsåtgärder Vid undersökningstillfället: Detta test kan användas som en metod för screening av givare för organtransplantation. De med låg konverteringsgrad har hög framgångsgrad och de med hög konverteringsgrad har låg framgångsgrad. Inspektionsprocess 1. Beredning av donatorlymfocyter: Färskt perifert venöst blod sattes till ett centrifugrör innehållande en lymfocyt-separationslösning med en specifik vikt på 1,077 i ett förhållande av 1: 1 och applicerades försiktigt på vätskeytan. Tvätta två gånger. Trypan-blåfärgning, räkna plattan. Justera celldensiteten till 2 × 109 / L, dela upp i 3 rör, centrifugera separat och lämna en fällning. Tillsätt 250 μL mitomycin till varje rör (slutkoncentration 50 mg / L) Och 1,75 ml fysiologisk saltlösning, vattenbad vid 37 ° C i 40 minuter och tvättades två gånger med fysiologisk saltlösning. Justera celldensiteten till 1 × 10 10 / L med RPMI1640-lösning innehållande 100 ml fetalt bovint serum. Tillsätt antikroppen för att blockera antigenet. Markera som D. 2. Beredning av receptorlymfocyter: Färskt perifert venöst blod sattes till ett centrifugrör innehållande en lymfocyt-separationslösning med en specifik vikt på 1,077 i ett förhållande av 1: 1 och applicerades försiktigt på vätskeytan. Tvätta två gånger. Justera celldensiteten till 1 × 1010 / L med RPMI1640-medium innehållande 120 ml / L fetalt bovint serum. 3. Blandad lymfocytkultur: Den beredda R och D sattes till plattan med 96 brunnar enligt följande och odlades i en 50 ml / L CO2 inkubator under 24 timmar vid 37 ° C. Grupp A: R50 ul + D 50 mikroliter; grupp B: R50 pl + D50 mikroliter + IL2-rening och neutralisering av mAb 15 mikroliter ; Grupp C: R50 uL + ILa 2 renad och neutraliserad mAb 15 mL; grupp D: R50 mL. Varje grupp hade 3 duplicerade brunnar, och den tomma kontrollgruppen var 100 ul RPMI1640 medium. Inte lämplig för publiken Inte lämpligt för människor: personer med högt avslag. Biverkningar och risker Det finns inga relaterade komplikationer och faror.