Assay för bildande av erytrocytkrans på råtta

B-lymfocyter är involverade i antikroppssyntes och är effektorceller med humoral immunrespons. Ytan på B-celler bär membranyta-immunglobulin (SmIg), Fc-receptorer och komplementreceptorer. Det binder starkt till Fc-delen av antigen-antikroppskomplexet. Röda blodkroppar från kyckling eller får selekteras och sensibiliseras till EA-komplex med motsvarande antirytrocytantikroppar. Fc-receptorn från B-celler kan bilda en krans med EA, som kallas EA-krans. Om EA-komplexet tillsätts för att komplettera och binds till komplementreceptorn för B-celler, bildas en EAC-rosett. Det finns murina RBC-receptorer på ytan av B-celler, som kan binda till RBC-mus för att bilda muserytrocyt-rosetter (M-RFC), som huvudsakligen binder till B-celler med IgM-receptorer, och M-RFC är mestadels naiva B-celler. Detta test används främst för att detektera antalet B-lymfocyter och för att bestämma graden av humoral immunitet. Grundläggande information Specialklassificering: undersökningsklassificering: blodundersökning Tillämpligt kön: om män och kvinnor tillämpar fasta: fasta Analysresultat: Under normala: Procentandelen ME-rosetter reducerades dock eller var frånvarande utan agammaglobulinemi och allvarlig kombinerad immunbrist. Normalt värde: Procentandel av ME i perifert blod för kvinnor: 5% -10% Över normal: Andelen ME-kransar i perifert blod hos patienter med kronisk lymfocytisk leukemi är så hög som 60% till 80%. negativt: positivt: Tips: Slappna av när du kontrollerar. Normalt värde Resultat 200 lymfocyter räknades under mikroskopet. Lymfocyterna som adsorberade 3 eller fler röda blodkroppar från mus var B-lymfocyter, och procenttalet av muscells kransar (ME kransar) beräknades. Procentandelen ME-rosett i normalt humant perifert blod är 5% till 10%. Klinisk betydelse Procentandelen av ME-kransar i perifert blod hos patienter med kronisk lymfocytisk leukemi är så hög som 60% till 80%, men det finns ingen gammaglobulinemi, allvarlig kombinerad immunbrist osv., Och andelen ME-kransar är reducerad eller frånvarande. Låga resultat kan vara sjukdomar: X-kopplad ingen-gammaglobulinemi hos barn, hög förekomst av sekundär immunbrist hos barn kan vara sjukdom: försiktighetsåtgärder för kronisk lymfocytisk leukemi (1) Inkubationstid: Andelen ME ökade gradvis med inkubationstiden. Efter inkubation under 1 h var ME-procenten 7,4 ± 3,1%, och inkubationen ökades till 18,3 ± 3,8% efter 18 h. Efter 72 timmars inkubation ökades antalet kransar. Den sjönk gradvis till 3,4 ± 7,1%. (2) Kulturlösning: Det är mest lämpligt att använda Tc199-kulturlösning, och resultaten och repeterbarheten är bra. Tvättning och resuspenderande lymfocyter och röda blodkroppar med Hepes-buffrat RPMl1640-medium resulterade i celler som tenderade att aggregera och bilda stora celler, vilket resulterade i opålitliga resultat. (3) När det optimala förhållandet mellan röda blodkroppar och lymfocyter är cirka 35: 1, är förhållandet> 60: 1, eller förhållandet är <25: 1, kan antalet ME-kransar minskas. (4) Bevarande av MRBC-kulturlösning: I Alsever-lösning producerar MRBC lagrat vid 4 ° C under en vecka fortfarande ett stabilt antal kransar, medan MRBC lagras i PBS, saltlösning eller Tc199-odlingsmedium, med lagringstiden förlängd, antalet kransar Efter 72 timmars lagring kan bara små eller kransformande celler ses. Inspektionsprocess (1) Ta 1 ml av ovanstående musröda blodkroppssuspension, tillsätt 3 ml fysiologisk saltlösning, blanda väl, 1500 r / min, centrifugera under 10 min, tvätta totalt 3 gånger och förbered till slut 1% musrödblodcellsuspension med fysiologisk saltlösning (cirka 1,4 × 108 celler / ml). (2) 1,5 ml heparin togs för antikoagulering, lymfocyter separerades genom lymfocytstratifiering och cellkoncentrationen justerades till 2 x 10 7 / ml med 20% kalvserum Hank-lösning. (3) Ta 0,1 ml lymfocyt-suspension, tillsätt en lika stor mängd av 1% musröda blodkroppssuspension, blanda och placera i ett vattenbad på 37 ° C under 10 minuter, 500 r / min, centrifugera i 10 minuter, sätt 4 ° C kylskåp under 2 till 3 timmar. (4) Pipettera 0,05 ml supernatant, tillsätt 1 droppe 2 g / L blå lösning, rotera försiktigt för att blanda, ta 1 droppe av blandningen på bilden, täck täckglaset, efter att cellerna sjunker, Kontrollera med ett mikroskop med hög effekt. Inte lämplig för publiken Det finns ingen olämplig folkmassa. Biverkningar och risker Det är en säker kontroll och är ofarlig för kroppen.