สารคัดหลั่ง IgE ในเสมหะ

ไซต์ของ SIgE นั้นคล้ายคลึงกับ SIgA และถูกผลิตโดยพลาสมาเซลล์ใน lamina propria ของระบบทางเดินหายใจมันมีการแพร่กระจายในเนื้อเยื่อเยื่อเมือกและของเหลว exocrine ไซต์เหล่านี้เป็นที่ตั้งของการบุกรุกของสารก่อภูมิแพ้และบริเวณที่เกิดปฏิกิริยาภูมิแพ้ IgE เป็นโมโนเมอร์ 8S, 19 × 104 ku และสายโซ่หนักนั้นยาวกว่าγเชน อีกหนึ่งขอบเขตการทำงาน (CH4) ซึ่งสามารถจับกับเซลล์ (เช่นเซลล์เสา, basophils) และกระตุ้นการปล่อยสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพภายในเซลล์ภายใต้เงื่อนไขบางประการดังนั้น IgE จึงเป็นแอนติบอดีหลักที่ก่อให้เกิดโรคภูมิแพ้ประเภทที่ 1 . ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกประเภทผู้เชี่ยวชาญ: การจำแนกการตรวจระบบทางเดินหายใจ: การตรวจเสมหะ บังคับเพศ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: การอดอาหาร คำเตือน: หากส่วนประกอบของน้ำยาหลักถูกเตรียมไว้อย่างไม่ถูกต้องหรือเก็บไว้ไม่ถูกต้องส่วนประกอบเหล่านั้นจะถูกทำให้เสื่อมโทรมและไม่ทำงาน ค่าปกติ 0.1 ถึง 9 mg / L ความสำคัญทางคลินิก เพิ่มขึ้น: IgE คือโมโนเมอร์, 8S, 19 × 104ku, และโซ่หนักนั้นยาวกว่าγเชน อีกหนึ่งขอบเขตการทำงาน (CH4) ซึ่งสามารถจับกับเซลล์ (เช่นเซลล์เสา, basophils) และกระตุ้นการปล่อยสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพภายในเซลล์ภายใต้เงื่อนไขบางประการดังนั้น IgE จึงเป็นแอนติบอดีหลักที่ก่อให้เกิดโรคภูมิแพ้ประเภทที่ 1 . ในผู้ป่วยที่เป็นโรคหอบหืดและปอดอักเสบจากภูมิไวเกินเนื้อหาของ SIgE ในเสมหะสามารถเพิ่มขึ้นได้ ผลลัพธ์ที่สูงอาจเป็นโรค: โรคหอบหืด, โรคปอดบวมที่แพ้ ส่วนประกอบรีเอเจนต์หลักใน ELISA เช่นแอนติเจนแอนติบอดี้แอนติจูดคอนจูเกตพื้นผิว ฯลฯ ถูกย่อยสลายได้ง่ายและไม่ใช้งานหากไม่ได้เตรียมหรือเก็บไว้อย่างไม่เหมาะสม มีหลายขั้นตอนใน ELISA และหากการดำเนินการไม่ได้มาตรฐานก็เป็นการยากที่จะได้รับผลลัพธ์ที่แม่นยำ ดังนั้นเพื่อให้มั่นใจถึงประสิทธิภาพของการทดสอบจะต้องมีการควบคุมคุณภาพสำหรับการทดสอบแต่ละครั้ง โดยทั่วไปแล้วการควบคุมเชิงบวกและเชิงลบที่มีให้ในชุดทดสอบที่ยอดเยี่ยมนั้นสามารถใช้เป็นการควบคุมคุณภาพของการทดสอบตามคำแนะนำประสิทธิภาพของการทดสอบสามารถตัดสินจากค่าการดูดกลืนแสงที่ได้รับ การทดสอบ HBsAg ที่ใช้กันมากที่สุดในการทดสอบทางคลินิกเป็นตัวอย่างการควบคุมเชิงลบในชุดควรเป็นซีรั่มของมนุษย์ HBsAg ลบและการควบคุมในเชิงบวกควรระบุเนื้อหา HBsAg (เช่น 9 ± 2 ng / ml) ควรมีการควบคุมเชิงลบสามตัวและการควบคุมเชิงบวกสองตัวพร้อมกันสำหรับการทดสอบแต่ละชุด ค่าการดูดกลืนแสงที่ได้จากการทดสอบการควบคุมเชิงลบควรน้อยกว่าค่าที่แน่นอน (ตัวอย่างเช่น 0.100) และค่าเฉลี่ยของการดูดซับการควบคุมเชิงบวกลบการดูดกลืนการควบคุมเชิงลบควรมากกว่าค่าที่แน่นอน (ตัวอย่างเช่น 0.200) ค่าเหล่านี้เป็นค่าการทดลองเฉพาะสำหรับชุดภายใต้เงื่อนไขการทดสอบที่ระบุ ดังนั้นหากผลการทดสอบตรงตามข้อกำหนดแสดงว่าทั้งประสิทธิภาพของรีเอเจนต์ที่ใช้และความถูกต้องของการดำเนินการเฉพาะในกรณีนี้การทดสอบแบทช์จะมีประสิทธิภาพ การควบคุมเชิงบวกและเชิงลบบางอย่างที่อยู่ในชุดไม่เป็นไปตามข้อกำหนดสำหรับการควบคุมคุณภาพหรือเงื่อนไขการวัดของห้องปฏิบัติการเช่นคัลเลอริมิเตอร์ ฯลฯ และความแตกต่างในคำอธิบายชุดคุณภาพที่เหมาะสมควรใช้ตามสถานการณ์จริง การควบคุมและค่าควบคุมคุณภาพจากห้องปฏิบัติการที่ได้จากการทดสอบ ซีรัมควบคุมคุณภาพของสินค้านั้นมีราคาแพง การกำหนดคุณภาพของผลิตภัณฑ์ควบคุมคุณภาพของ ELISA นั้นสามารถเตรียมได้ด้วยตัวเอง การทดสอบ HBsAg ยังคงเป็นตัวอย่าง การควบคุมเชิงลบสามารถนำมาจากผู้บริจาคโลหิตที่เป็น HBsAg เชิงลบด้วยน้ำยาทดสอบคุณภาพ การควบคุมเชิงบวกสามารถเตรียมได้โดยการเพิ่มซีรัม HBsAg-positive ในปริมาณที่เหมาะสมลงในซีรัมควบคุมเชิงลบและเปรียบเทียบซีรัมผสมกับมาตรฐานอ้างอิงหรือการควบคุมเชิงปริมาณเพื่อกำหนดเนื้อหา HBsAg จากนั้นทำการเจือจางที่เหมาะสมเพื่อให้ได้ซีรัม HBsAg-positive ของความเข้มข้นที่ต้องการและจากนั้นจะมีสารกันบูดในปริมาณที่เหมาะสมเช่น gentamicin และกรดซาลิไซลิกจากนั้นแช่แข็งที่อุณหภูมิต่ำ กระบวนการตรวจสอบ ELISA เป็นวิธีการทดสอบแบบหลายปฏิกิริยาแบบหลายปฏิกิริยาแบบหลายขั้นตอนซึ่งต้องดำเนินการอย่างระมัดระวังและรอบคอบตามข้อกำหนดมิฉะนั้นจะไม่ได้ผลลัพธ์ที่แม่นยำ ขั้นตอนของ ELISA ที่ใช้ในการตรวจจับรายการต่าง ๆ นั้นแตกต่างกันเล็กน้อย แต่มีขั้นตอนต่าง ๆ เช่นการโหลดการถือการซักและการวัดสีจุดการทำงานของแต่ละขั้นตอนมีการอธิบายไว้ด้านล่าง 1. การเตรียมน้ำยาทดสอบ: เจือจางหรือเตรียมน้ำยาที่จำเป็นสำหรับการทดสอบตามคำแนะนำของชุดทดสอบ น้ำกลั่นหรือน้ำปราศจากไอออนที่ใช้ใน ELISA รวมถึงการล้างควรมีความสดและมีคุณภาพสูง ควรวัดบัฟเฟอร์ที่มีในตัวเองด้วยเครื่องวัดค่า pH น้ำยาทดสอบที่นำออกมาจากตู้เย็นควรใช้หลังจากถึงอุณหภูมิห้อง ในการทดสอบโดยใช้ HRP เป็นตัวระบุภาชนะบรรจุที่ปนเปื้อนด้วยโลหะ 2. กำลังโหลด: เตรียมแผ่น ELISA ที่ดีตามต้องการ ควรเก็บตัวอย่างซีรัม (ของเหลวที่น่าสนใจ) สดใหม่หรือเก็บไว้ในตู้เย็นอย่างเหมาะสมไม่ควรใช้ตัวอย่างที่มี hemolyzed สูงหรือขุ่น ตัวอย่างที่มีโซเดียมอะไซด์เป็นสารกันบูดไม่สามารถใช้ได้กับ ELISA แบบขั้นตอนเดียวสำหรับการติดฉลาก HRP เมื่อเพิ่มตัวอย่างให้เพิ่มชิ้นงานที่ด้านล่างของหลุมหลีกเลี่ยงการเพิ่มเข้าไปในส่วนบนของผนังหลุมและระวังอย่าสาดมันและไม่ควรมีฟองอากาศปรากฏ ความแม่นยำของปริมาณตัวอย่างที่เพิ่มเข้ามาในการกำหนดเชิงปริมาณควรเป็นไปตามข้อกำหนดเชิงปริมาณ ในการวัดเชิงคุณภาพความแม่นยำของจำนวนตัวอย่างไม่ได้ถูกเน้นตัวอย่างเช่นมันถูกกำหนดเป็นแบบเลื่อน ณ จุดนี้คุณควรใช้ตัวปล่อยเส้นผ่าศูนย์กลางที่เท่ากันและรักษาตำแหน่งการโหลดที่ถูกต้องเพื่อให้ปริมาตรของการหยดแต่ละครั้งนั้นเท่ากัน การทำงานและข้อกำหนดของการเติมเอนไซม์คอนจูเกตและการเติมสารตั้งต้นนั้นเหมือนกับการเติมตัวอย่าง 3. ฉนวน: โดยทั่วไปจะมีสองปฏิกิริยาแอนติเจนและแอนติบอดีใน ELISA นั่นคือหลังจากการเพิ่มของตัวอย่างและหลังจากการเพิ่มของการรวมกัน ในเวลานี้อุณหภูมิและเวลาของปฏิกิริยาจะต้องแม่นยำตามที่ต้องการ ภาชนะที่หุ้มฉนวนควรเป็นอ่างน้ำและควรวางแผ่นด้านล่างของแผ่น ELISA ในน้ำเพื่อให้อุณหภูมิสมดุลได้อย่างรวดเร็ว แต่ละแผ่น ELISA ไม่ควรซ้อนกัน ควรหลีกเลี่ยงการระเหยกระดาน แผ่นสามารถวางแบนในกล่องเปียกที่มีผ้าโปร่งเปียกที่ด้านล่าง กล่องเปียกควรอุ่นให้ร้อนก่อนถึงอุณหภูมิที่กำหนดตัวอย่างเช่นฉนวนของตู้อบมีความสำคัญมากกว่า 4 ซักผ้า: ซักผ้าในกระบวนการ ELISA ไม่ได้เป็นขั้นตอนการเกิดปฏิกิริยา แต่ตัดสินใจที่จะปิดกุญแจสู่ความสำเร็จ จุดประสงค์ของการซักคือการล้างสารในสารละลายที่ทำปฏิกิริยากับแอนติเจนหรือแอนติบอดีของแข็งและสารที่รบกวนซึ่งไม่ได้ถูกดูดซับโดยเฉพาะไปยังโซลิดสเตตของของแข็งในระหว่างการทำปฏิกิริยา การดูดซับของโปรตีนจากพลาสติกเช่นโพลิสไตรีนเป็นสากลดังนั้นการดูดซับที่ไม่เฉพาะเจาะจงควรหลีกเลี่ยงให้มากที่สุดเท่าที่จะเป็นไปได้ในระหว่างการทดสอบของ ELISA และควรกำจัดสารที่ไม่รบกวนการดูดซับออกไประหว่างการซัก การเติม Tween เข้ากับของเหลวในการซักสามารถปรับปรุงผลการซักได้ หากการซักไม่ทั่วถึงโดยเฉพาะอย่างยิ่งในครั้งสุดท้ายหากมีการดูดซับของเอนไซม์ที่ไม่เฉพาะเจาะจงผันค่าว่างจะเพิ่มขึ้น นอกจากนี้ในวิธีการทางอ้อมหาก IgG ที่ไม่เฉพาะเจาะจงในตัวอย่างถูกดูดซับบนโซลิดเฟสโดยไม่ถูกล้างออกก็จะรบกวนการทำงานของแอนติบอดีที่มีเอนไซม์ โดยทั่วไปแล้วล้างจานด้วยวิธีดังต่อไปนี้: 1 ดูดซับสารละลายปฏิกิริยา 2 เติมแผ่นด้วยน้ำยาซักผ้า 3 วางไว้ 2 นาทีสั่นเล็กน้อย 4 ดูดซับหรือเทของเหลวลงในกระดาษและซับลงบนกระดาษดูดซับ จำนวนการซักโดยทั่วไปคือ 3 ถึง 4 ครั้งและบางครั้งถึง 5 ถึง 6 เท่า สามารถใช้เครื่องล้างจานอัตโนมัติ ELISA ได้ แต่ควรตรวจสอบการใช้งานจริงของเครื่องมือก่อน แต่ละปิเปตของเครื่องซักผ้าจะต้องวางไว้ใกล้กับด้านล่างของหลุมที่เกี่ยวข้อง เพื่อให้แน่ใจว่าผลการซักเดียวกันของแต่ละหลุม 5. การพัฒนาสีและสี: อุณหภูมิและเวลาของปฏิกิริยาหลังจากเพิ่มสารตั้งต้นในการกำหนดเชิงปริมาณควรจะยังคงถูกต้องตามกฎระเบียบ อย่างไรก็ตามปฏิกิริยาโดยทั่วไปสามารถทำได้ที่อุณหภูมิห้องในการทดสอบเชิงคุณภาพ หากวัสดุพิมพ์เป็น OPD ควรวางให้ห่างจากแสง ไม่จำเป็นต้องควบคุมเวลาในการตอบสนองอย่างเคร่งครัดและบางครั้งอาจเพิ่มโซลูชันหยุดในเวลาตามสีของการควบคุมเชิงบวกและการควบคุมเชิงลบ เพื่อให้แน่ใจว่าเวลาตอบสนองเท่ากันสำหรับแต่ละหลุมขั้นตอนและความเร็วในการเพิ่มโซลูชันหยุดควรเหมือนกับเมื่อเพิ่มวัสดุพิมพ์ การพิจารณาเชิงคุณภาพเช่นปฏิกิริยาเชิงลบคือแสงและบางครั้งผลลัพธ์สามารถตัดสินด้วยสายตา Plate ELISA โดยทั่วไปจะใช้เครื่องอ่านฉลากเอนไซม์เพื่ออ่านค่าการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นที่ระบุ เครื่องอ่านฉลากอัตโนมัติควรทดสอบความเข้ากันได้กับหลุมของแผ่น ELISA ที่ใช้และความสามารถในการทำซ้ำของผลลัพธ์ก่อนการใช้งาน เมื่อทำสีให้ตรวจสอบจุดศูนย์ด้วยน้ำกลั่นให้อ่านรูขุมขนสารตั้งต้น (รูขุมขนที่ไม่มีปฏิกิริยาใด ๆ และเพิ่มเฉพาะวัสดุพิมพ์) และหลุมเปล่า (รูขุมขนที่วัดโดยน้ำเกลือหรือ PBS แทนตัวอย่างสำหรับกระบวนการทั้งหมด) สถานะรีเอเจนต์ของการทดสอบ หลังจากนั้นสามารถใช้รูว่างเพื่อสอบเทียบศูนย์จุดและการดูดกลืนแสงของรูตัวอย่าง, รูมาตรฐานและรูควบคุมสามารถอ่านได้ หากจุดศูนย์ยังคงได้รับการแก้ไขด้วยน้ำกลั่นการดูดซับของรูด้านบนควรถูกลบออกจากการดูดกลืนแสงของรูว่างในการคำนวณ ไม่เหมาะกับฝูงชน คนที่ไม่เหมาะสม: โดยทั่วไปแล้วจะไม่มีคนที่ไม่เหมาะสม ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ ไม่มีอาการไม่พึงประสงค์