B เครื่องหมายพื้นผิวลิมโฟไซต์

การทดสอบฟังก์ชั่นภูมิคุ้มกันของร่างกายเป็นประเภทของการทดสอบที่ห้องปฏิบัติการประเมินการทำงานของระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายส่วนบุคคล การตรวจจับการทำงานของระบบภูมิคุ้มกันของร่างกายนั้นขึ้นอยู่กับกระบวนการพื้นฐานของการสร้างภูมิคุ้มกันของร่างกายรวมถึงการตรวจจับ B lymphocyte การตรวจจับ Ig และการตรวจจับการทำงานของการผลิตแอนติบอดี ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกผู้เชี่ยวชาญ: การจำแนกประเภทการเจริญเติบโตและการพัฒนา: การตรวจภูมิคุ้มกัน เพศที่ใช้บังคับ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: ไม่อดอาหาร เคล็ดลับ: หากไม่สามารถสังเกตชิ้นงานได้ในวันนั้นเซลล์จะถูกระงับในสารละลายเก็บรักษาแอนติบอดีเรืองแสงเก็บไว้ที่ 4 ° C และนับในวันถัดไป ค่าปกติ ค่าเฉลี่ยของ IgM เท่ากับ 11.2 ± 6.0% ส่วนค่าเฉลี่ยของ IgG คือ 7.5 ± 3.3% ความสำคัญทางคลินิก จำนวนเซลล์ B ที่ลดลงนั้นสัมพันธ์กับการขาดภูมิคุ้มกันของร่างกายและการเพิ่มจำนวนเซลล์ B นั้นสัมพันธ์กับการแพร่กระจายของมะเร็งในเซลล์ B ข้อควรระวัง (1) การปรากฏตัวของ agglomerated IgG ในน้ำยาแอนติบอดีฟลูออเรสเซนต์และ agglomerated IgG สามารถผูกติดอยู่กับตัวรับเอฟซีบนผิวของเซลล์ B ดังนั้นจึงควรหลีกเลี่ยงการรวมตัวกันของ IgG 1 แอนติบอดี้เรืองแสงที่มีอัตราส่วนโมลาร์ F / P มากเกินไปไม่สามารถใช้และโดยทั่วไปแล้ว 1 ถึง 3 เป็นที่ต้องการ 2 แอนติบอดี้ฟลูออเรสเซนต์ที่มีโปรตีนความเข้มข้นต่ำจะไม่เสถียรที่อุณหภูมิต่ำและไม่ควรต่ำกว่า 2 mg / ml 3 แอนติบอดี้ฟลูออเรสเซนต์ที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำไม่ควรละลายด้วยความเย็นซ้ำ ๆ และปั่นแยกเป็นเวลา 30 นาทีที่ 150,000 รอบ / นาทีก่อนการใช้งานเพื่อกำจัดมวลรวม (2) เมื่อเซลล์เม็ดเลือดขาวมีชีวิตใช้สำหรับการย้อมอิมมูโนฟลูออเรสเซ็นซ์ NaN3 จะถูกเพิ่มเข้าไปในรีเอเจนต์ทั้งหมด (แอนติบอดีที่มีป้ายกำกับสารละลายแฮงค์และอื่น ๆ ) เพื่อ จำกัด การไหลของเยื่อหุ้มเซลล์ มิเช่นนั้นจะเกิดการเรืองแสงคล้ายหมวกและ phagocytosis และจำนวนเซลล์ฟลูออเรสเซนต์ที่แท้จริงจะลดลง (3) เมื่อทำการย้อมด้วยแอนติบอดีฟลูออเรสเซ็นต์แอนติบอดีแอนติเจน - แอนติบอดี (ประเภท IgG) ที่มีอยู่ในตัวอย่างจะจับกับตัวรับเอฟซีบนพื้นผิวของเซลล์ B และเป็นฟลูออเรสเซนต์ที่เป็นบวก ด้วยเหตุนี้จึงได้รับการแนะนำให้ย้อมด้วยแอนติบอดี anti-F (ab) 2 fluorescently ที่ระบุว่าจะไม่รวมตัวรับ Fc จากการย้อมสี ในปีที่ผ่านมาเนื่องจากการถือกำเนิดของโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อโมเลกุลจำเพาะของเซลล์ B (CD19, CD20, ฯลฯ ) จึงมีแนวโน้มที่จะใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีที่ติดฉลากฟลูออไรเซซินกับ CD19 หรือ CD20 โมโนโคลนอลแอนติบอดี (แอนติบอดีปฐมภูมิ) ของ CD19 และ CD20 นั้นทำปฏิกิริยาครั้งแรกกับเซลล์เม็ดเลือดขาวจากนั้นรวมกับกระต่ายที่มีฟลูออเซซินที่มีป้ายกำกับหรือฟลูออไรด์แอนติบอดี IgG (แอนติบอดีตัวที่สอง) นับด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง เซลล์เม็ดเลือดขาว B กระบวนการตรวจสอบ (1) ใช้สารต้านการแข็งตัวของเลือดเฮปาริน 2ml เติมของเหลวแฮงค์ในปริมาณที่เท่ากันและผสมให้เข้ากันทำซ้ำชั้นบนสารละลายที่แบ่งเป็นชั้น 2000r / นาทีปั่นเหวี่ยง 20 นาที ชั้น Lymphocyte ถูกนำออกไปสารละลาย Hank ถูกเพิ่มล้าง 3 ครั้ง 1200 r / นาทีปั่นแยกเป็นเวลา 10 นาทีปรับความเข้มข้นของ lymphocyte เป็น 1 × 107 / มิลลิลิตรและจ่าย 0.1 มิลลิลิตรเป็นสองหลอด (2) ล้างสารแขวนลอยของเซลล์เม็ดเลือดขาวอีกครั้งด้วยสารละลายของแฮงค์ทิ้งส่วนที่เหลือและใช้กระดาษกรองเพื่อลบของเหลวที่เหลือออกจากผนังด้านในของหลอดและเพิ่ม IgG แอนตี้ - มนุษย์แอนติบอดีและแอนติบอดีเรืองแสง IgM ประมาณ 2 หยด (ประมาณ 0.08 มล.) หลังจากเขย่าเบา ๆ ให้วางตู้อบ 37 ° C เป็นเวลา 30 นาที (3) นำออกจากตู้ฟักและล้างสองครั้งด้วยสารละลายแฮงค์ปั่นเหวี่ยงที่ 1000r / นาทีเป็นเวลา 10 นาทีดูดซับทุกส่วนอย่างระมัดระวังเพิ่ม 1 กลีเซอรีนบัฟเฟอร์พีบีเอส 50 มล. ลงไปที่ด้านล่างของหลอดผสมและ 1 หยดเพื่อเพิ่ม บนฝาปิดให้ครอบคลุมแผ่นปิดครอบและสังเกตภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ไม่เหมาะกับฝูงชน ไม่มีข้อห้าม ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ ไม่มีภาวะแทรกซ้อนหรืออันตราย