การทดสอบการเพาะเลี้ยงเซลล์เม็ดเลือดขาวผสม

Mixed lymphocyte culture (MLC) เป็นวิธีการทดสอบเพื่อกำหนดระดับความเข้ากันได้ระหว่างตัวรับและแอนติเจน histocompatibility ที่สำคัญของผู้บริจาค (HLA antigen) และมักใช้สำหรับการจับคู่เนื้อเยื่อก่อนการปลูกถ่ายอวัยวะ การเพาะเลี้ยงต่อมน้ำเหลืองแบบผสมเป็นวิธีการผสมระหว่างผู้บริจาคและผู้รับต่อมน้ำเหลืองแบบสองทางหรือการหยุดการทำงานของเซลล์เม็ดเลือดขาวผู้บริจาคไปสู่วัฒนธรรมผสมและการตอบสนองของเซลล์มีความสัมพันธ์เชิงลบกับระดับความเข้ากันได้ของผู้บริจาค ข้อมูลพื้นฐาน การจำแนกผู้เชี่ยวชาญ: การจำแนกประเภทการเจริญเติบโตและการพัฒนา: การตรวจภูมิคุ้มกัน เพศที่ใช้บังคับ: ไม่ว่าจะเป็นผู้ชายและผู้หญิงใช้การอดอาหาร: ไม่อดอาหาร เคล็ดลับ: ผู้ที่มีการปฏิเสธสูงไม่ควรทำการตรวจสอบนี้ ค่าปกติ อัตราการแปลงวิธีการนับทางสัณฐานวิทยาคือ <10% วิธีการนับไอโซโทปเปรียบเทียบ cpm เพื่อรับ P> 0.05 ความสำคัญทางคลินิก ผลลัพธ์ที่ผิดปกติ: ในการปลูกถ่ายไตอัตราการแปลงของผู้บริจาคที่มีชีวิตควรอยู่ที่ <10% และอัตราการแปลงของผู้บริจาคซากศพควรเป็น> 10% การจับคู่ที่มีปฏิกิริยาต่ำสามารถใช้ได้ในชุดการทดลองเดียวกันเท่านั้น อัตราการเปลี่ยนแปลงของเซลล์เม็ดเลือดขาว 10% เข้ากันได้ระหว่างเนื้อเยื่อของร่างกายที่แตกต่างกัน การทดสอบวัฒนธรรมผสมลิมโฟไซต์นั้นใช้เพื่อตรวจสอบสถานะภูมิคุ้มกันของผู้ป่วย เมื่อจำนวนเซลล์เม็ดเลือดขาว T ลดลงอัตราการแปลงก็จะลดลงเช่นกัน มันสามารถใช้เป็นวิธีการจับคู่สำหรับการปลูกถ่ายอวัยวะและไขกระดูกเพื่อเลือกผู้บริจาคที่เหมาะสม หากอัตราการแปลงสูงจะใช้สำหรับความแตกต่างระหว่างผู้รับและผู้รับ อัตราการแปลงต่ำและอัตราความสำเร็จหลังจากการปลูกถ่ายสูง ต้องการตรวจจับคน: คนที่มีภูมิคุ้มกันบกพร่องหรือหายไป ข้อควรระวัง ในช่วงเวลาของการทดสอบ: การทดสอบนี้สามารถใช้เป็นวิธีการคัดกรองผู้บริจาคเพื่อการปลูกถ่ายอวัยวะผู้ที่มีอัตราการแปลงต่ำมีอัตราความสำเร็จสูงและผู้ที่มีอัตราการแปลงสูงมีอัตราความสำเร็จต่ำ กระบวนการตรวจสอบ 1. การเตรียมเซลล์เม็ดเลือดขาวของผู้บริจาค: เลือดดำรอบสดถูกเพิ่มเข้าไปในหลอดหมุนเหวี่ยงที่มีสารละลายแยกลิมโฟไซต์ที่มีความถ่วงจำเพาะ 1.077 ในอัตราส่วน 1: 1 และค่อย ๆ นำไปใช้กับพื้นผิวของเหลว Centrifuge ที่ 2000 r / นาทีเป็นเวลา 20 นาทีเพื่อดูดซับเซลล์เม็ดเลือดขาว ล้างสองครั้งลองย้อมสีฟ้าลองนับจำนวนแผ่นปรับความหนาแน่นของเซลล์เป็น 2 × 109 / L แบ่งเป็น 3 หลอดปั่นแยกต่างหากและปล่อยให้ตกตะกอนเพิ่ม mitomycin 250 ไมโครลิตรต่อหลอด (ความเข้มข้นสุดท้าย 50 มก. / ลิตร) และน้ำเกลือทางสรีรวิทยา 1.75 มล., อ่างน้ำที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 นาทีและล้างด้วยน้ำเกลือทางสรีรวิทยาสองครั้งปรับความหนาแน่นของเซลล์เป็น 1 × 10 10 / L ด้วยสารละลาย RPMI1640 ที่ประกอบด้วย 100 มล. / L ของวัวทารกในครรภ์ 2. การเตรียมเซลล์เม็ดเลือดขาวตัวรับ: เลือดดำรอบสดถูกเพิ่มเข้าไปในหลอดหมุนเหวี่ยงที่มีสารละลายแยกลิมโฟไซต์ที่มีความถ่วงจำเพาะ 1.077 ในอัตราส่วน 1: 1 และค่อย ๆ นำไปใช้กับพื้นผิวของเหลว Centrifuge ที่ 2000 r / นาทีเป็นเวลา 20 นาทีเพื่อดูดซับเซลล์เม็ดเลือดขาว ล้างสองครั้งปรับความหนาแน่นของเซลล์เป็น 1 × 1010 / L ด้วยสาร RPMI1640 ที่มีซีรั่มวัวในทารกในครรภ์ 120 มล. / ลิตร 3. วัฒนธรรมเม็ดเลือดขาวผสม: เตรียม R และ D ที่ถูกเพิ่มลงในจาน 96 หลุมดังนี้และเลี้ยงในตู้อบ CO2 50 mL / L เป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่ 37 ° C กลุ่ม A: R50 μL + D 50 μLกลุ่ม B: R50 μL + D50 μL + IL 2 การทำให้บริสุทธิ์และการทำให้เป็นกลางของ mAb 15 μL ; กลุ่ม C: R50μL + IL? 2 mAb บริสุทธิ์และเป็นกลาง 15 mL; กลุ่ม D: R50μLแต่ละกลุ่มมี 3 หลุมที่ซ้ำกันและกลุ่มควบคุมว่างคือ100μLของสื่อกลาง RPMI1640 ไม่เหมาะกับฝูงชน ไม่เหมาะสำหรับคน: ผู้ที่มีการปฏิเสธสูง ปฏิกิริยาและความเสี่ยงที่ไม่พึงประสงค์ ไม่มีภาวะแทรกซ้อนและอันตรายที่เกี่ยวข้อง