chylomikrony

Chylomikrony jsou největší lipoproteinové částice v lidské plazmě a CM je většina dietního TG dodávaného z místa absorpce tenkého střeva do systémového oběhu. Rychlost zúčtování CM je rychlá, poločas rozpadu je 10 minut a normální člověk to nemůže detekovat po 12 hodinách nalačno. Když je lipoprotein elektroforézován, je CM původem. Je třeba poznamenat, že vzorek by měl být během elektroforézy sérových lipoproteinů čerstvý a neměl by být skladován zmrazený. Základní informace Odborná klasifikace: Trávicí vyšetření: vyšetření krve Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Výsledky analýzy: Pod normální: Normální hodnota: Ne Nad normální: Negativní: Normální. Pozitivní: Hyperlipoproteinémie typu I, hyperlipoproteinémie typu V. Tipy: Před vyšetřením je strava lehká a alkohol je zakázán. Normální hodnota Negativní. Klinický význam Pozitivní hyperlipoproteinémie typu I, hyperlipoproteinémie typu V. Pozitivními výsledky mohou být onemocnění: hyperlipoproteinémie typu I, hyperlipoproteinémie typu V 1. Imunoturbidimetrická metoda zákalu: (1) Pokud jde o antisérum: Turidimetrický test má na antisérum vyšší požadavky než jiné metody. Turidimetrická metoda je s výhodou polyklonální protilátka. Anti-sérum nesmí obsahovat anti-sérum. Musí věnovat velkou pozornost apoA-I extrahovanému z lidského séra, aby se dosáhlo imunopurity, chromatografické čistoty a elektroforetické čistoty, což není možné v obecné laboratoři. Titr antiséra (titr) by neměl být menší než 16. V současné době má v některých domácích komerčních činidlech antisérum apoA-I velmi nízký titr, takže při zakoupení soupravy je třeba věnovat pozornost. Pokud nemáte zkušenosti s identifikací kvality antiséra před zakoupením, měli byste požádat kvalifikovanou jednotku, aby ji identifikovala. (2) Vzorek v horní metodě (sérum) se ředí 200krát pro ruční provoz (100 μl vzorku), a pokud se jedná o přesný vzorkovač, lze jej naředit 20krát (s použitím 10 μl). Aby bylo možné přizpůsobit se podmínkám různých laboratoří (jako jsou různé typy automatizovaných přístrojů), je třeba při provádění příslušných úprav věnovat pozornost poměru antigen-protilátka.Je třeba poznamenat, že v reakčním systému by neměl být žádný přebytek antigenu a horní lineární limit by neměl být nižší než 2,5 g / l. Jinými slovy, množství antiséra musí být dostatečné, jinak jsou výsledky nízké, když je apoA-I ve vzorku vysoký. V současné době mají některé soupravy pro domácí léčiva nejen nízký titr anti-séra, ale dávkování vzorků při této operaci je příliš velké (například 3 až 5 μl), protilátka je zjevně nedostatečná a naměřené výsledky jsou nevyhnutelně nepřesné. (3) Aby se dosáhlo přesného měření, musí být výsledky výpočtu kalibrační křivky provedeny turbidimetrickým měřením apoA-I a B (metoda koncového bodu). Koncentrace určitého rozsahu (nízká dávka vzorku) (X) je v zásadě lineární s turbiditou (Y) a lineární regrese počítá určitý průnik na ose Y (hodnota A <0,1), takže odchylka výsledku výpočtu se vypočítá jednobodovou kalibrací. Větší, naměřené výsledky nemohou přesně odrážet úroveň vysoké (vysoká nízká, nízká vysoká). Nezanedbávejte přesnost měření kvůli jednoduchosti metody s jedním bodem. Bez ohledu na typ automatizovaného přístroje musíte nejprve vyzkoušet kalibrační křivku. Pokud se zkouška opakuje za podmínek přístroje a za specifických podmínek, není průnik regresní přímky zřejmý, lze použít metodu kalibrace v jednom bodě. Pokud je množství vzorku 3 až 5 μl, i když se množství antiséra zvýší, koncentrace a zákal nejsou lineární a lze je vypočítat až po lineární konverzi křivky. (4) Hlavním interferenčním faktorem je zákal samotného séra (jako je sérum s vysokým obsahem tuku) a metody předúpravy, jako je ultracentrifugace nebo hydrolýza lipázy, nejsou praktické. Účinek zákalu s povrchově aktivními látkami je také omezený, takže v testu musí být vytvořena slepá zkumavka. Kromě dvoubodové metody používané v automatizované analýze je chybou ručně použít jediné činidlo bez odečtení slepého vzorku. Aby se snížil účinek matricových účinků na zákal, musí být jako kalibrátor použito sérum s pevnou hodnotou. Kromě toho musí být vyloučeny interference, jako jsou prachové částice a zakalené škrábance misky. (5) Některé komerční soupravy (včetně některých dovážených produktů) mají nepřesné hodnoty kalibračních sér, což jsou důležité zdroje chyb. 2. Raketová elektroforéza: (1) Výběr faktoru ředění antigenu a množství antiséra by měl být jasný, sklon kalibrační křivky je střední a vyrovnávací křivka je vhodná. Metoda současně měří apoA-I a apoB a množství dvou antisér by mělo být upraveno tak, aby výška píku obou byla různá a výška píku apoB nebyla menší než 1 cm. (2) Antiséra z různých typů zdrojů (jako jsou králíci a ovce), testované za stejnou cenu, výsledky se budou lišit. Test apoA-I je s výhodou králičí antisérum. Když se použije králičí sérum, tvar píku je ostrý a pík produkovaný ovčím sérem je tlustý, špička píku je kulatá a tupá a někdy se před píkem objeví obraz duchů. Sklon kalibrační křivky pro kalibrační sérum je také odlišný. Avšak bez ohledu na to, jaké antisérum se používá, kvantitativní výsledky se příliš neliší. (3) Elektroforéza za určitých podmínek se výška píku kalibračního séra různých ředění významně nemění a sklon kalibrační křivky je v zásadě stejný. Pokud výška píku vzorku přesahuje rozsah kalibrační křivky, měl by být faktor ředění vzorku upraven a znovu testován. Inter-board CV je obvykle menší než 5%. (4) Výsledky elektroforézy rakety lze pozorovat barvením nebo přímým vizuálním pozorováním vrcholu rakety. První používá méně vzorků a šetří antisérum, ale pokud jsou vzorky a antisérum náležitě zvýšeny, je výhodnější nebarvit. Použitá agaróza by měla být standardní elektroosmotická nebo hypotonická a přidáním správného množství dextránu nebo polyethylenglykolu do gelu se vyjasní vrchol rakety. (5) Měření píku rakety může vypočítat plochu nebo výšku píku a plocha je výška píku násobená šířkou píku (šířkou v poloviční výšce píku). Přesnost měření je s výhodou až 0,1 mm. Musí být použito mechanické nebo elektronické zesilovací zařízení. Výška píku v rozsahu standardní křivky je s výhodou 1 až 4 cm. (6) Tento zákon se vztahuje na analýzu malého počtu exemplářů. Vhodné také pro stanovení apoAII, CI, CII, CIII, D, E a Lp (a). Proces inspekce 1. Imunoturbidimetrická metoda zákalu: (1) Vzorek by měl být rychle se oddělující sérum, které lze časově oddělit. Může být uloženo v lednici při 2 až 6 ° C, měřeno do 1 týdne a skladováno při -20 ° C po dobu půl roku. (2) Při použití plně automatického analyzátoru by měl být poměr antigenu k protilátce a reakční doba přiměřeně zvolen podle různých návrhových parametrů přístroje. Může být také použit jako rychlostní rozptylová nefelometrie CM, jako je Beckmanův turbidimetr ICS nebo proteinarray systém). (3) Přístroje používané v manuální metodě: přesný fotometr s filtrem 340 nm (nebo splitter), objem vzorku je s výhodou 0,5 ml (pro úsporu antiséra), nejlépe s průtokovým pohárkem, ředění vzorku se nejlépe ředí Opravený vzorkovač. (4) Ošetření vzorků: Vzorek séra a sérum pro kontrolu kvality se ředí 1: 200 ředidlem vzorku, tj. Nejprve se ředí 1:20 (5,0 μl sérum + 95 μl ředidla) a poté se ředí 1:10 ( Přebytek séra 1:20 pro stanovení apoB). Po smíchání se nechá stát 30 minut při 25 až 37 ° C a zakalí se při vlnové délce 340 nm. Výsledek se odečte na standardní křivce podle hodnoty A U-UB. Tato metoda má CV <5%. (5) Kalibrační křivka: Pro každou šarži manuálního a poloautomatického provozu je vyžadována kalibrační křivka a kalibrační sérum může být naředěno do čtyř koncentrací 1: 100, 1: 200, 1: 300 a 1: 400, které jsou stejné jako vzorek. Operace, vypočítejte koncentraci CM každé standardní zkumavky podle pevné hodnoty a zakreslete koncentraci (X) s odpovídající hodnotou A (Y) (vypočtenou pomocí lineární regrese), která je v podstatě přímá, ale má určitý průnik na ose Y. Takže nemůžete použít jednobodový standard. Pokud je operace přesná, měl by být korelační koeficient mezi koncentrací a hodnotou A vyšší než 0,985. Pokud jsou k dispozici tři kalibrační séra při vysokých, středních a nízkých koncentracích, lze je provozovat stejným způsobem jako vzorek a lze je použít pro tříbodovou kalibraci. Lze použít také pro pětibodovou kalibraci (tj. Stejné míchání séra, střední a nízká koncentrace séra střední koncentrace) Koncentrace séra byly smíchány ve stejných množstvích, aby se staly dalšími dvěma kalibračními séry). Lineární rozsah této metody: 0,4 ~ 2,5 g / l. 2. Raketová elektroforéza: (1) licí destička: 10 g / l agarózy 10 ml na misku, roztavte ve vroucí vodní lázni, dobře promíchejte, přidejte 50 µl antiséra CM a apoB antiséra 8μl za studena do 50 ~ 55 ° C (množství závisí na titru antiséra) ), rychle promíchejte a nalijte na skleněnou desku přednastavenou na vodní platformě, ochlaďte a poté umístěte při 4 ° C, po 20 minutách, děrovací otvory, otvor je na katodovém konci destičky, průměr otvoru je 3 mm, vzdálenost otvorů je nejméně 5 mm a kapacita otvoru je 5 μl. Vložte destičku do elektroforetické nádrže a přemostěte filtračním papírem. (2) Ředění antigenu: Kalibrační sérum bylo naředěno na 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 a 1: 400 (pro kalibrační křivku) pomocí 0,15 mol / l roztoku NaCl a vzorek séra byl 1: Zředí se na 200 ° C a nechá chladničku při teplotě 4 ° C nejdéle 3 dny. (3) Plnění: 5 μl (přesné) zředěného séra a vzorků bylo odebráno ve stavu nízkého proudu (10 mA / destička) a přidáno do jamky vzorku agarózového gelu. Každá deska musí dělat řadu standardů. (4) Zapnutí: stálý průtok 24 mA / destička, terminální napětí 6 ~ 8V / cm, chlazení tekoucí vodou k udržení agarózy 15 ° C, elektroforéza 3 ~ 4h. (5) Deproteinizace a suchý film: Agarózová deska po elektroforéze byla ponořena do 0,15 mol / l NaCl po dobu 30 minut a film byl umístěn na polyesterový film a sušen lehkým tlakem pod vícevrstvým filtračním papírem. Vlhkost v lepidle se potom přirozeně suší filtračním papírem, filmem a polyesterovým filmem nebo se suší horkým vzduchovým dmychadlem.Po sušení se film přirozeně oddělí od filtračního papíru a polyesterového filmu. (6) Barvení: Agarózový film byl ponořen do barvicího roztoku po dobu 20 až 30 minut. (7) Odbarvení: Namočený film namočte odbarvovacím roztokem, dokud nebude vrchol rakety čistý a pozadí nebude v zásadě bezbarvé. Může být sevřen ve dvou kusech celofánu ve vodě a po sušení může být skladován po dlouhou dobu. To může také být namočeno v tekoucí vodě odstranit pozadí. Poznámka: 1 Ředicí poměr antigenu a množství antiséra by měl být zvolen tak, aby pík rakety byl čistý, sklon kalibrační křivky byl mírný a linie byla vhodná. Metoda současně měří apoA-I a apoB a množství dvou antisér by mělo být upraveno tak, aby výška píku obou byla různá a výška píku apoB nebyla menší než 1 cm. 2 Různé druhy antisér (jako jsou králíci a ovce) se testují za stejnou cenu a výsledky se budou lišit. Test apoA-I je s výhodou králičí antisérum. Když se použije králičí sérum, tvar píku je ostrý a pík produkovaný ovčím sérem je tlustý, špička píku je kulatá a tupá a někdy se před píkem objeví obraz duchů. Sklon kalibrační křivky pro kalibrační sérum je také odlišný. Avšak bez ohledu na to, jaké antisérum se používá, kvantitativní výsledky se příliš neliší. 3 Elektroforéza za určitých podmínek se výška píku kalibračního séra různých ředění významně nezmění a sklon kalibrační křivky je v zásadě stejný. Pokud výška píku vzorku přesahuje rozsah kalibrační křivky, měl by být faktor ředění vzorku upraven a znovu testován. Inter-board CV je obvykle menší než 5%. Výsledky raketové elektroforézy lze pozorovat barvením nebo přímým vizuálním pozorováním vrcholu rakety. První používá méně vzorků a šetří antisérum, ale pokud jsou vzorky a antisérum náležitě zvýšeny, je výhodnější nebarvit. Použitá agaróza by měla být standardní elektroosmotická nebo hypotonická a přidáním správného množství dextránu nebo polyethylenglykolu do gelu se vyjasní vrchol rakety. 5 Měření píku rakety může vypočítat plochu nebo výšku píku a plocha je výška píku násobená šířkou píku (šířkou v poloviční výšce píku). Přesnost měření je s výhodou až 0,1 mm. Musí být použito mechanické nebo elektronické zesilovací zařízení. Výška píku v rozsahu standardní křivky je s výhodou 1 až 4 cm. 6 Tato metoda je použitelná pro analýzu malého množství vzorků. Vhodné také pro stanovení apoAII, CI, CII, CIII, D, E a Lp (a). Nevhodné pro dav Ne. Nežádoucí účinky a rizika Ne.