bakteriální endotoxinový test

Test bakteriálního endotoxinu má stanovit, zda bakteriální endotoxin v testovaném výrobku splňuje požadavky. Endotoxin je lipopolysacharid buněčné stěny gramnegativních bakterií a jeho toxickou složkou je lipid A. Bakterie zemřela po rozpadu. Testování bakteriálních endotoxinů zahrnuje dvě metody, gelovou metodu a fotometrickou metodu, druhá zahrnuje turbidimetrickou metodu a chromogenní substrátovou metodu. Při testování testu lze pro test použít kteroukoli z metod. Pokud jsou výsledky měření kontroverzní, pokud není stanoveno jinak, převáží se výsledky gelové metody. Základní informace Kategorie specialisty: Kategorie inspekce: Patogenní mikrobiologická zkouška Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Výsledky analýzy: Pod normální: Normální hodnota: Ne Nad normální: Negativní: Gel nezůstává neporušený a je negativní ze stěny zkumavky. Pozitivní: Pozitivní záznamy, které nesklouzly ze zdi, byly pozitivní. Tipy: Test bakteriálního endotoxinu má stanovit, zda bakteriální endotoxin v testovaném výrobku splňuje požadavky. Normální hodnota Typ a podíl flóry v těle jsou normální a lidské tělo je v dynamické rovnováze. Klinický význam Pyrogen je hlavně endotoxin uvolňovaný bakteriemi. Pyrogen vstupuje do krevního oběhu v těle a způsobuje řadu nežádoucích účinků, jako je horečka. Proto je injekční pyrogen nebo bakteriální endotoxinový test důležitým indexem kvality pro zajištění bezpečnosti injekce. Abnormální výsledek Klinicky, když je intravenózně podáno velké množství infuze, se u pacienta objeví příznaky zimnice, vysoká horečka, pocení, mdloby, zvracení během 0,5 až 1 hodiny v důsledku přítomnosti pyrogenů v roztoku léku. Tělesná teplota může při vysoké horečce dosáhnout 40 ° C. Mohou dokonce šokovat. Pozitivním výsledkem může být onemocnění: Bacillus licheniformis enteritis Při stanovení testovací metody bakteriálního endotoxinu je při výpočtu limitu endotoxinů L, MVD a MVC nutné věnovat pozornost důležitým parametrům, jako je maximální dávka pro člověka, specifikace produktu, citlivost činidla ve sputu atd., Protože chyby při výpočtu povedou ke všem následným snahám. Vše selhalo. Běžné problémy jsou: 1. Klinická dávka je stanovena nesprávně. Používá se pouze obvyklá dávka. Nejvyšší možná dávka a způsob podání lidského těla se neberou v úvahu. Ve vzorci pro výpočet limitu L = K / M vzhledem k definici hodnoty K a hodnoty M. Rozmazání způsobuje nepřesnost přiřazení hodnot K a M, což nakonec vede k nesprávnému výpočtu limitů. Například, injekce klinického dospělého se podává 40 až 80 mg na intravenózní infuzi a kojenec (tři nebo více měsíců) se podává intravenózně po 10 až 20 mg pokaždé. Mezní dávka pro dospělého (tělesná hmotnost 60 kg) je 3,75 EU / mg, zatímco hmotnost kojenců je pouze asi 5 kg, vypočtený limit je asi 1,25EU / mg, pokud není brána v úvahu maximální dávka na kilogram tělesné hmotnosti, bakteriální endotoxinový limit Bude to velký rozdíl. 2. Mez bakteriálního endotoxinu u některých deklarovaných odrůd se nevypočítává na základě klinického dávkování, ale vypočítává se na základě dávky stejného typu pyrogenového testu, což má za následek mezní chybu. 3. Bakteriální endotoxinový limit některých odrůd byl zkopírován z cizího lékopisu a rozdíl mezi dávkou klinického použití na domácím trhu a hmotností Číňanů a cizinců nebyl zohledněn a limit byl stanoven nesprávně. 4. Nesprávný výpočet denní dávky (více dávek v jeden den). 5. Když se změní specifikace odrůdy (koncentrace), výpočet MVD není upraven. 6. Maximální dávka, která se použije při stanovení metody, překročila dávku použitou na klinice. Proces inspekce Nejprve stanovení titru Bakteriální endotoxinové standardy jsou kalibrovány jako referenční hodnoty pro stanovení ekvivalentní účinnosti základní hmotnosti. Titr na 1 mg pracovní normy by neměl být menší než 2 EU, ne vyšší než 50 EU a experimentální údaje s jednotností a stabilitou. Titr se stanoví takto: Použijí se nejméně 4 vzorky z každé šarže pracovního standardu a použije se stejná šarže reagentu sputa a stejného standardu. Každý pracovní standard se zředí testovanou vodou s endotoxinem * podle hmotnosti a standardního produktu. Připraví se série dvojnásobných ředění roztoku endotoxinu a reagují s hydrazinovým činidlem. Když je logaritmus koncového bodu reakce čtyř pracovních standardů Pokud je standardní odchylka (S) střední hodnoty menší než 0,365, vypočítá se geometrický průměr (v ng / mg) koncových bodů reakce čtyř pracovních standardů a koncový bod reakce (v EU / mg) standardu. Za druhé, příprava testu 1. Nádobí použité v této metodě je ošetřeno tak, aby se odstranil veškerý exogenní endotoxin, který může být přítomen. Může se použít také pražení za sucha při 250 ° C po dobu 30 minut nebo 180 ° C po dobu 2 hodin. Mohou být také použity jiné vhodné metody. Zkušební provoz by měl zabránit mikrobiální kontaminaci. 2. Před zkouškou zkontrolujte hodnotu citlivosti čísla šarže 鲎 činidla, které by mělo splňovat požadavky. Přidejte množství rozpouštědla hydrazinového činidla. Po rozpuštění je to guanidinový roztok činidla a je připraven k použití. 3. Ředění zkušebního vzorku: Je-li hodnota značky citlivosti čísla šarže less činidla menší než vnitřní limit jedu zkoušeného vzorku, vypočtěte ji podle následujícího vzorce a zkoušenou vodou endotoxinu * zřeďte činidlo pro kontrolu. Ředicí faktor zkušebního vzorku = X / λ X: Endotoxinem limitovaný limit endotoxinů (EU / ml) λ: hodnota citlivosti zkoušené látky pro zkoušenou látku (EU / ml) Zatřetí, zkontrolujte 4 × 75 mm zkumavka (nebo 0,1 ml / sada původní ampule s reagentem ve sputu) obsahující 0,1 ml roztoku s reagentem ve sputu, z nichž 2 se přidají s 0,1 ml pro zkumavku a 1 pro pracovní standard s 2 end endotoxiny Jako pozitivní kontrolní zkumavka se použije 0,1 ml a jako negativní kontrolní zkumavka se přidá 0,1 ml roztoku sputa. Po jemném promíchání zkumavek byla zkumavka uzavřena a umístěna svisle do vodní lázně o teplotě 37 ± 1 ° C po dobu 60 ± 2 minut. Při přidržování zkumavky a při zkumavce buďte opatrní, abyste předešli negativním výsledkům v důsledku vibrací. (4) Posouzení výsledků Zkumavka byla jemně odstraněna z vodní lázně a pomalu převrácena v 1800. Gel v zkumavce nebyl zdeformován. Pozitivní nebyl sklouznut ze stěny zkumavky. (+) Gel nemohl zůstat neporušený a byl negativní ze stěny zkumavky. (1). Pokud je zkumavka 2 (1), považuje se to za vyhovující předpisům a zkouška pyrogenovou zkouškou (králičí metoda) se neprovádí. Pokud jsou obě zkumavky (+), měly by být považovány za nevyhovující předpisům. Například 1 zkumavka ve 2 zkumavkách je (+) a 1 zkumavka je (1). Podle popsaného způsobu jsou znovu testovány 4 zkumavky. Jedna zkumavka ve 4 zkumavkách je (+), což znamená, že není v souladu s předpisy. Pokud není v textu stanoveno jinak, zkoušené předměty, které splňují požadavky, se zkoušejí pomocí pyrogenní zkušební metody (králičí metoda) a posuzují se podle výsledků. Mez bakteriálního endotoxinu v testovaném výrobku musí být v souladu s ustanoveními příslušných výrobků. Pozitivní kontrola byla (1) nebo negativní kontrola (+) a test byl neúčinný. Příloha: Bakteriální endotoxinový test na sterilní vodu pro injekce, vodu pro injekce, injekci chloridu sodného, ​​5% a 10% glukózy. Nevhodné pro dav Obecně žádná tabu. Nežádoucí účinky a rizika Obecně žádná újma.