apolipoprotein AⅡ

Apolipoprotein je plazmatická lipoproteinová frakce obsahující různé lipoproteiny a několik různých specifických apolipoproteinů. Dosud bylo objeveno více než 20 druhů apolipoproteinů. Mezi nimi jsou hlavně aPOA1, AII, B-100, B48, CI, CII, CIII, D, E a podobně. Základní informace Odborná klasifikace: klasifikace kardiovaskulárních vyšetření: biochemické vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Tipy: Při posledním jídle před odběrem krve se vyhýbejte jídlu a pití s ​​vysokým obsahem tuků, půstu 12 hodin, extrakci žilní krve předloktí. Normální hodnota 250 ~ 520 mg / l. Klinický význam Snížená koronární srdeční choroba, cukrovka, nefrotický syndrom, dědičný deficit ApoA-I (Tangierova choroba), familiární nízká alfa-lipoproteinémie, rybí oko, těžká podvýživa, aktivní hepatitida a funkce jater. Nízkými výsledky mohou být onemocnění: ischemická choroba srdeční, diabetes (1) Imunoturbidimetrie: 1 Pokud jde o antisérum: Turidimetrický test má vyšší požadavky na antisérum než jiné metody. Turidimetrická metoda je s výhodou polyklonální protilátka. Anti-sérum nesmí obsahovat anti-sérum. Musí věnovat velkou pozornost apoA-II extrahovanému z lidského séra, aby se dosáhlo imunopurity, chromatografické čistoty a elektroforetické čistoty, což není možné v obecné laboratoři. Titr antiséra (titr) by neměl být menší než 16. V současné době má v některých domácích komerčních činidlech antisérum apoA-II extrémně nízký titr, takže při nákupu soupravy musíte věnovat pozornost. Pokud nemáte zkušenosti s identifikací kvality antiséra před zakoupením, měli byste požádat kvalifikovanou jednotku, aby ji identifikovala. 2 Horní standardní vzorek (sérum) se ředí 200krát pro ruční provoz (100 μl vzorku), a pokud existuje přesný vzorkovač, může být naředěn 20krát (pomocí 10 μl). Aby bylo možné přizpůsobit se podmínkám různých laboratoří (jako jsou různé typy automatizovaných přístrojů), je třeba při provádění příslušných úprav věnovat pozornost poměru antigen-protilátka.Je třeba poznamenat, že v reakčním systému by neměl být žádný přebytek antigenu a horní lineární limit by neměl být nižší než 2,5 g / l. Jinými slovy, množství antiséra musí být dostatečné, jinak jsou výsledky nízké, když je apoA-I ve vzorku vysoký. V současné době mají některé soupravy pro domácí léčiva nejen nízký titr anti-séra, ale dávkování vzorků při této operaci je příliš velké (například 3 až 5 μl), protilátka je zjevně nedostatečná a naměřené výsledky jsou nevyhnutelně nepřesné. 3 Aby se dosáhlo přesného měření, musí být výsledky výpočtu kalibrační křivky provedeny měřením zákalu apoA-II a B (metoda koncového bodu). Koncentrace určitého rozsahu (nízká dávka vzorku) (X) je v zásadě lineární s turbiditou (Y) a lineární regrese počítá určitý průnik na ose Y (hodnota A <0,1), takže odchylka výsledku výpočtu se vypočítá jednobodovou kalibrací. Větší, naměřené výsledky nemohou přesně odrážet úroveň vysoké (vysoká nízká, nízká vysoká). Nezanedbávejte přesnost měření kvůli jednoduchosti metody s jedním bodem. Bez ohledu na typ automatizovaného přístroje musíte nejprve vyzkoušet kalibrační křivku. Pokud se zkouška opakuje za podmínek přístroje a za specifických podmínek, není průnik regresní přímky zřejmý, lze použít metodu kalibrace v jednom bodě. Pokud je množství vzorku 3 až 5 μl, i když se množství antiséra zvýší, koncentrace a zákal nejsou lineární a lze je vypočítat až po lineární konverzi křivky. 4 Hlavním rušivým faktorem je zákal samotného séra (jako je sérum s vysokým obsahem tuku) a metody předúpravy, jako je ultracentrifugace nebo hydrolýza lipázy, nejsou praktické. Účinek zákalu s povrchově aktivními látkami je také omezený, takže v testu musí být vytvořena slepá zkumavka. Kromě dvoubodové metody používané v automatizované analýze je chybou ručně použít jediné činidlo bez odečtení slepého vzorku. Aby se snížil účinek matricových účinků na zákal, musí být jako kalibrátor použito sérum s pevnou hodnotou. Kromě toho musí být vyloučeny interference, jako jsou prachové částice a zakalené škrábance misky. 5 Některé komerční sady (včetně některých dovážených produktů) s nepřesnými kalibračními sérovými hodnotami jsou důležitým zdrojem chyb. (2) Metoda elektroforézy rakety: 1 Ředicí poměr antigenu a množství antiséra by měl být zvolen tak, aby pík rakety byl čistý, sklon kalibrační křivky byl mírný a linie byla vhodná. Metoda současně měří apoA-II a apoB a množství dvou antisér by mělo být upraveno tak, aby výška píku obou byla různá a výška píku apoB nebyla menší než 1 cm. 2 Různé druhy antisér (jako jsou králíci a ovce) se testují za stejnou cenu a výsledky se budou lišit. Test apoA-I je s výhodou králičí antisérum. Když se použije králičí sérum, tvar píku je ostrý a pík produkovaný ovčím sérem je tlustý, špička píku je kulatá a tupá a někdy se před píkem objeví obraz duchů. Sklon kalibrační křivky pro kalibrační sérum je také odlišný. Avšak bez ohledu na to, jaké antisérum se používá, kvantitativní výsledky se příliš neliší. 3 Elektroforéza za určitých podmínek se výška píku kalibračního séra různých ředění významně nezmění a sklon kalibrační křivky je v zásadě stejný. Pokud výška píku vzorku přesahuje rozsah kalibrační křivky, měl by být faktor ředění vzorku upraven a znovu testován. Inter-board CV je obvykle menší než 5%. Výsledky raketové elektroforézy lze pozorovat barvením nebo přímým vizuálním pozorováním vrcholu rakety. První používá méně vzorků a šetří antisérum, ale pokud jsou vzorky a antisérum náležitě zvýšeny, je výhodnější nebarvit. Použitá agaróza by měla být standardní elektroosmotická nebo hypotonická a přidáním správného množství dextránu nebo polyethylenglykolu do gelu se vyjasní vrchol rakety. 5 Měření píku rakety může vypočítat plochu nebo výšku píku a plocha je výška píku násobená šířkou píku (šířkou v poloviční výšce píku). Přesnost měření je s výhodou až 0,1 mm. Musí být použito mechanické nebo elektronické zesilovací zařízení. Výška píku v rozsahu standardní křivky je s výhodou 1 až 4 cm. 6 Tato metoda je použitelná pro analýzu malého množství vzorků. Vhodné také pro stanovení apoAII, CI, CII, CIII, D, E a Lp (a). Proces inspekce Elektroforéza rakety: 1 odlévací destička: 10 g / l agarózy 10 ml na misku, roztavte ve vroucí vodní lázni, dobře promíchejte, přidejte 50 μl antiséra apoA-II a 50 μl antiséra apoB za studena do 50 ~ 55 ° C (množství závisí na titru antiséra) ), rychle promíchejte a nalijte na skleněnou desku přednastavenou na vodní platformě, ochlaďte a poté umístěte při 4 ° C, po 20 minutách, děrovací otvory, otvor je na katodovém konci destičky, průměr otvoru je 3 mm, vzdálenost otvorů je nejméně 5 mm a kapacita otvoru je 5 μl. Vložte destičku do elektroforetické nádrže a přemostěte filtračním papírem. 2 zředěný antigen: kalibrační sérum bylo naředěno na 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 a 1: 400 (pro kalibrační křivku) pomocí 0,15 mol / l roztoku NaCl a vzorek séra byl zředěn 1: 200. Uchovávejte chladničku při teplotě 4 ° C nejdéle 3 dny. 3 Plnění: Ve stavu nízkého proudu (10 mA / destička) zřeďte fixované sérum a vzorky tak, aby absorbovaly 5 μl (přesné), a přidejte do agarózového gelu vzorek. Každá deska musí dělat řadu standardů. 4 výkon: stálý průtok 24 mA / deska, terminální napětí 6 ~ 8 V / cm, chlazení tekoucí vodou k udržení agarózy 15 ° C, elektroforéza 3 ~ 4 h. 5 deproteinizovaný protein a suchý film: agarózová deska po elektroforéze byla ponořena do 0,15 mol / l NaCl po dobu 30 minut a film byl umístěn na polyesterový film a lepidlo bylo absorbováno vícevrstvým filtračním papírem za mírného tlaku. Vlhkost, poté suchý filtrační papír, film a polyesterový film společně, nebo jej vysušte pomocí horkovzdušného dmychadla.Po sušení se film přirozeně oddělí od filtračního papíru a polyesterového filmu. 6 barvení: Agarózový film byl ponořen do barvicího roztoku na 20 až 30 minut. 7 Odbarvení: Namočený film namočte odbarvovacím roztokem, dokud nebude vrchol rakety čistý a pozadí nebude v zásadě bezbarvé. Může být sevřen ve dvou kusech celofánu ve vodě a po sušení může být skladován po dlouhou dobu. To může také být namočeno v tekoucí vodě odstranit pozadí. Nevhodné pro dav Obecně žádné davy. Nežádoucí účinky a rizika 1. Infekce: Při odběru vzorků krve věnujte pozornost aseptickým operacím a po odběru krve zastavte krvácení, abyste zabránili kontaminaci vodou a kapalinou, abyste zabránili místní infekci. 2, krvácení: poté, co je krvi dána plná doba komprese, zejména koagulopatie, sklon ke krvácení, aby nedošlo k lokálnímu subkutánnímu vytekání, tvorbě modřin a otokům.