Vyšetření chromozomů buněčné kultury plodové vody

V důsledku škodlivých chemikálií, vystavení rentgenovým paprskům, faktorům prostředí, pokročilému těhotenství, blízkým příbuzným atd., Což vede k chorobám způsobeným změnami v počtu, morfologii, struktuře a kombinaci chromozomů během těhotenství. Chromozomové vyšetření buněk plodové vody má velký specifický význam pro prenatální diagnostiku chromozomálních onemocnění. Základní informace Kategorie specialisty: Kontrola matek Kategorie: genetické testování (DNA) Použitelné pohlaví: zda ženy půst: půst Výsledky analýzy: Pod normální: Normální hodnota: Ne Nad normální: Negativní: Celkový počet chromozomů: 46. Autosome: 22 párů (číslo 1-22). Sex chromozomy: XY pro muže a XX pro ženy. Mužský karyotyp: 46, XY. Ženský karyotyp: 46, XX. Pozitivní: Výsledky, které se liší od normálních hodnot, jsou pozitivní, což naznačuje vrozenou malformaci nebo jiné vrozené onemocnění. Tipy: Chromozomové vyšetření by mělo odebírat vzorky plodové vody v 16-20 týdnech těhotenství. Normální hodnota Celkový počet chromozomů je 46. 22 párů autosomů (číslované 1 až 22). Pohlavní chromozom muž je XY a žena XX. Mužský karyotyp 46, XY. Ženský karyotyp 46, XX. Klinický význam Abnormální počet chromozomů, jako je Downův syndrom (trizomie 21), trizomie 18, trizomie, trizomie 38, trizomie 21, vrozený syndrom varlat hypoplazie, syntéza XXY Znak, Turnerův syndrom, X trizomický syndrom a syndrom vícenásobného těla. Abnormální chromozomová struktura, jako je syndrom 4p parciálního monomeru, 5p parciální monomer syndrom, 9p parciální trisomický syndrom, 9q parciální monomerní syndrom, 21q parciální monomerní syndrom, 22q parciální monomerní syndrom, 22q parciální trizomie Syndrom atd. Pozitivními výsledky mohou být onemocnění: vrozená ovariální hypoplasie, dětská dětská mozková obrna, dětský Downův syndrom, dětská dětská mozková obrna, dětský pascal syndrom, Diggolgerův syndrom, dětský meow syndrom, dětský vrozený testikulární vývoj Neúplné úvahy o genetických chorobách 1. Chromozomové vyšetření by mělo odebírat vzorky plodové vody ve 16 až 20 týdnech těhotenství. 2, tato vrozená genetická onemocnění se zvýšila, chybí, translokace, inverze a další kvantitativní a strukturální abnormality, které se často projevují jako syndrom. Většina případů, jako jsou mnohočetné malformace, zpomalení růstu a mentální retardace, vede k potratu plodu, předčasnému porodu nebo mrtvě narozenému. Proces inspekce (1) Vezměte 15 až 30 ml plodové vody po dobu 16 až 20 týdnů těhotenství a odstřeďte při 1000 r / ml po dobu 10 minut. (2) Přebytečný supernatant zlikvidujte, nechte 1 ml plodové vody a vysrážených buněk a jemně se rozptýlí do buněčné suspenze. (3) Přeneste do baňky o objemu 25 ml čtvercové kultury, přidejte 3 ml média o pH 6,5 až 6,8 (obsahujícího penicilin 100 U / ml, streptomycin 100 μg / ml) a 1 ml telecího séra a inkubujte v inkubátoru při 37 ° C. (4) Po 7 až 10 dnech kultivace bylo pozorováno velké množství kolonií podobných fibroblastům nebo epiteloidním buňkám. V tomto okamžiku lze čerstvé médium vyměnit. (5) Když jsou buněčné kolonie expandovány na kousky a existuje mnoho průsvitných buněk s kruhovým dělením, lze přidat kolchicin tak, aby výsledná koncentrace byla 0,1 až 0,3 μg / ml, a poté kultivovány v inkubátoru při 37 ° C po dobu 5 až 6 hodin. (Výše uvedené postupy jsou prováděny za aseptických podmínek). Standardy sklizně: 1 s fibroblasty jako hlavním typem, růst buněk, 2 s 10x okulárky a 20x objektivní pozorování, rostoucí buněčné klony pokrývají 1 nebo více úplných zorných polí, 3 viz více než 10 průsvitných Kulaté buňky a více než 10 dvojitých kulatých jasných dělicích buněk. (6) Pokud buňky nerostou energicky, růstový cyklus není jednotný nebo buňky stárnou a není dosaženo standardu sklizně, subkultura může pokračovat v původní lahvi. Metoda: Za sterilních podmínek byl nejprve kultivační roztok nalit a bylo přidáno několik kapek 2,5 g / l sterilního roztoku trypsinu a směs byla protřepána a nalita. Dále bylo přidáno 5 až 10 kapek trypsinu a jemně třepáno při 37 ° C po dobu asi 5 minut, aby adherované buňky vypadly. Přidaly se 4 ml čerstvého média obsahujícího telecí sérum a kultura se nechala stát při 37 ° C po dobu 4 až 5 hodin. Pečlivě vyměňte kultivační médium a pokračujte v kultivaci, může být sklizeno 3 až 5 dní po průchodu. (7) Přeneste kultivační roztok do odměrné centrifugační zkumavky, přidejte do baňky 1 ml roztoku ED-TA-trypsinu, umístěte jej do inkubátoru při 37 ° C po dobu 5 minut a poté opláchněte adherentní buňky loketní pipetou (lze použít také 2,5 g /). L trávení trypsinového roztoku). Buňky oddělené od stěny láhve byly nality do centrifugační zkumavky, smíchány s původní kultivační kapalnou fází a kultivační baňka byla promyta malým množstvím teplého fyziologického roztoku a promyté buňky byly také nality do centrifugační zkumavky a centrifugovány při 1000 r / min po dobu 10 minut. (8) Supernatant se odsaje, přidá se 3 až 5 ml 0,075 mol / l KCl hypotonického roztoku předem zahřátého na 37 ° C a nastaví se na 37 ° C po dobu 10 až 15 minut. (9) Předběžná fixace, fixace a příprava jsou stejné jako metoda přípravy vzorků chromozomů z periferní krve. Nevhodné pro dav 1. Během těhotenství se objevily známky potratu. 2. Když tělesná teplota překročí 37,5 ° C. 3. Včasná exfoliace placenty, břišní infekce a hnisavé. Nežádoucí účinky a rizika (1) Poranění matky: vpíchněte jehlu bodnoucí krevní cévy způsobené hematomem břišní stěny, suberosálním hematomem dělohy. Amniotická tekutina občas vstupuje do mateřského krevního oběhu z propíchnuté díry a způsobuje embolii amniotické tekutiny. Před propíchnutím nebyl močový měchýř vyprázdněn a močový měchýř byl zraněn. (2) Poranění plodu, placenty a pupeční šňůry: vpichovací jehla může poškodit plod a může způsobit krvácení a placenta a pupeční šňůra může také způsobit krvácení nebo hematom. Při krvácení do plodové vody by proto měl být identifikován zdroj krvácení. Pokud máte podezření, že jste z plodu, měli byste i nadále poslouchat fetální srdce. (3) Únik plodové vody: pooperační plodová voda uniká z dírky, způsobuje příliš málo plodové vody, ovlivňuje vývoj plodu a dokonce způsobuje potrat nebo předčasný porod. (4) potrat nebo předčasný porod: incidence potratu nebo předčasného porodu je 0,1% - 0,2%, často se vyskytuje během jednoho týdne po chirurgickém zákroku, dokonce i po propíchnutí vede k předčasnému prasknutí membrán k předčasnému porodu. (5) nitroděložní infekce: po operaci může být mateřská horečka. Intrauterinní infekce může způsobit abnormální vývoj plodu nebo dokonce smrt plodu. Amniocentéza by proto měla být přísně aseptická.