Test toxicity na lymfocytech

Když jsou specifické efektorové T lymfocyty kontaktovány in vitro s cílovými buňkami, mohou vykazovat vlastnost ničit a lyžovat cílové buňky, nazývané toxicita lymfocytů. Cílovou buňkou může být nádorová buňka nebo jiná tkáňová buňka. Způsob, jakým lymfocyty ničí cílové buňky, může zničit cílové buňky přímým usmrcením nebo produkcí lymfokinů. Toto je test toxicity na lymfocyty. Některé lymfocyty, jako je CTL, NK, LAK atd., Mají přímý usmrcovací účinek na cílové buňky a v závislosti na povaze efektorových buněk, které mají být detekovány, mohou být vybrány odpovídající cílové buňky, jako jsou nádorové buňky, dárcovské buňky po transplantaci atd. Tento experiment může být použit ve výzkumu imunity nádoru, odmítnutí transplantátu, virové infekce a podobně. Metody zahrnují: způsob uvolňování chrómu, způsob uvolňování laktátu dehydrogenázy a test na apoptotické buňky. Základní informace Specializovaná klasifikace: Klasifikace onkologických vyšetření: imunitní vyšetření Použitelné pohlaví: zda muži a ženy používají půst: půst Výsledky analýzy: Pod normální: Normální hodnota: Ne Nad normální: Negativní: Normální. Pozitivní: Momentálně nejsou k dispozici žádná relevantní data. Tipy: Udržujte normální myšlení. Normální hodnota Metoda morfologického vyšetření byla porovnána mezi testovanou skupinou a kontrolní skupinou, P <0,05. Metoda 125I nebo 51Cr P> 0,05. Klinický význam Abnormální výsledky: Tento test může být použit jako indikátor pro měření buněčné imunity u nádorových pacientů in vitro, může také určit prognózu nádorových pacientů měřením schopnosti imunitních buněk ničit nádorové buňky a může také identifikovat funkční subpopulace lymfocytů. Populace, která má být vyšetřena: Křížový test toxicity na lymfocytech se také nazývá test cytotoxicity závislý na komplementu (CDC). Je třeba zkontrolovat, zda u příjemce transplantátu orgánu existuje dárce nebo HLA protilátka dárce proti příjemci, a před transplantací orgánu musí provést test CDC. Opatření (1) Při měření schopnosti předmětných lymfocytů napadat nádorové buňky byly do experimentální skupiny přidány nádorové buňky a lymfocyty subjektu a do kontrolní skupiny byly přidány nádorové cílové buňky a kultivační médium. Pokud jsou do buněčné imunity zapojeny další vzorky, jako jsou nádorové antigeny nebo imunogeny, terapeutická léčiva atd., Měla by být přidána třetí skupina. V této testované skupině se nejprve nechá lymfocyty nechat reagovat se vzorkem, který se má testovat, a poté se promyjí a poté pozorují. Cytotoxický účinek senzibilizovaných lymfocytů na cílové buňky nádoru. První dvě skupiny se v tuto chvíli staly kontrolní skupinou. (2) Míra přežití cílových buněk a lymfocytů by měla být v optimálním stavu, obvykle> 90%. (3) Telecí sérum přidané do kultivačního roztoku musí být nejprve testováno na toxicitu. (4) Počet inokulovaných cílových buněk a lymfocytů by měl být přesný. (5) Experimentální skupina a kontrolní skupina by měly být uspořádány na stejné desce, aby se chyba snížila. (6) pH kultivačního roztoku je nejvýhodněji 6,8 až 7,2. Proces inspekce (1) Inokulace cílových buněk: Vyberte nádorové buňky, které mohou adherentně růst, promyjte je Hankovým roztokem, štěpte 2,5 g / l trypsinu po dobu 2 až 3 minut, nalijte roztok trypsinu (buňky jsou stále připojeny ke stěně láhve) a použijte Hanku. Buňky byly lehce promyty 3krát a byl nalit Hankov roztok. Adherentní buňky byly promyty roztokem RPMI1640 obsahujícím 10% až 20% telecího séra a buněčná peleta byla odstraněna filtrací přes 100-mesh filtr, aby se připravila jediná suspenze nádorových buněk 1 x 106 / ml, a buněčná suspenze byla pipetována kapátkem. Kapka se umístí na 40-jamkovou kultivační destičku, 1 kapka na jamku (asi 100-150 buněk) a umístí se do inkubátoru s 5% CO2 při 37 ° C na 20 hodin. Kultivační destička byla vyjmuta a kultivační roztok byl odstraněn. Po Wrightově barvení byl spočten průměrný počet adherentních nádorových buněk na 10 jamek. Pokud byl rozdíl mezi oběma skupinami> 1/3, byla chyba příliš velká, aby mohla být použita, a chyba nebyla velká. Kultivační destička může být formálně testována. (2) Separace lymfocytů: Vezměte heparinovou antikoagulaci 3 ml subjektu, oddělte lymfocyty roztokem vyluhování sacharózy a diazepamu, poté je třikrát promyjte roztokem Hank a poté je smíchejte s roztokem RPMI1640 (2 ~ 3). ) × 105 / ml buněčné suspenze. (3) Test cytotoxicity: lymfocyty a cílové buňky se smíchají v poměru 200: 1 a do každé jamky se přidá (2 ~ 3) x 104 lymfocytů (v 0,1 ml objemu) a do každé jamky se přidá asi 20% telecího séra. 0,1 ml roztoku RPMI 1640 bylo umístěno do inkubátoru s 5% CO2 na 37 ° C na dobu 40 hodin. Kultivační destička byla vyjmuta a kultivační roztok byl odstraněn Po Wrightově zabarvení byl počet mikroskopických buněk, které zůstaly na dně destičky, spočítán. Nevhodné pro dav Nejsou žádná tabu. Nežádoucí účinky a rizika Nejsou žádné související komplikace a rizika.