bakteriel endotoksin test

Bakteriel endotoksinetest er at bestemme, om bakterieendotoksinet i testartiklen opfylder kravene. Endotoksin er et lipopolysaccharid i cellevæggen af ​​gramnegative bakterier, og dets toksiske bestanddel er lipid A. Bakterien døde efter opløsning. Bakteriel endotoksinetest involverer to metoder, en gelmetode og en fotometrisk metode, hvor sidstnævnte inkluderer en turbidimetrisk metode og en kromogen substratmetode. Ved test af testen kan en af ​​metoderne bruges til testen. Når måleresultaterne er kontroversielle, medmindre andet er angivet, skal resultaterne af gelmetoden være fremherskende. Grundlæggende information Specialkategori: Inspektionskategori: Patogen mikrobiologisk undersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Analyseresultater: Under det normale: Normal værdi: ingen Over normal: Negativ: Gelen forbliver ikke intakt og er negativ fra rørets væg. positiv: Positive poster, der ikke gled ud af væggen, var positive. Tip: Bakteriel endotoksinetest er at bestemme, om bakterieendotoksinet i testartiklen opfylder kravene. Normal værdi Type og andel af floraen i kroppen er normal, og den menneskelige krop er i en dynamisk balance. Klinisk betydning Pyrogenet er hovedsageligt et endotoksin frigivet af bakterier.Pyrogenet kommer ind i blodcirkulationssystemet i kroppen og forårsager en række bivirkninger såsom feber. Derfor er injektionen af ​​pyrogen eller bakteriel endotoksinetest et vigtigt kvalitetsindeks for at sikre injektionssikkerheden. Unormalt resultat Klinisk, når en stor mængde infusion gives intravenøst, har patienten symptomer på kuldegysninger, høj feber, sveden, besvimelse, opkast inden for 0,5 til 1 time på grund af tilstedeværelsen af ​​pyrogener i lægemiddelopløsningen Kropstemperaturen kan nå 40 ° C under høj feber. De kan endda chokere. Positivt resultat kan være sygdom: Bacillus licheniformis enteritis overvejelser Ved etablering af bakteriel endotoksin-testmetode, når man beregner endotoksingrænse L, MVD og MVC, er det nødvendigt at være opmærksom på vigtige parametre som maksimal human dosis, produktspecifikationer, følsomhed af sputumreagens osv., Fordi beregningsfejl vil føre til alle efterfølgende bestræbelser. Alt mislykkedes. Almindelige problemer er: 1. Den kliniske dosis bestemmes forkert. Kun den konventionelle dosis anvendes. Den maksimale mulige dosis og indgivelsesvej for det menneskelige legeme overvejes ikke. I grænseberegningsformlen L = K / M på grund af definitionen af ​​K-værdi og M-værdi. Sløring gør tildelingen af ​​K- og M-værdier unøjagtige, hvilket i sidste ende fører til forkert beregning af grænserne. For eksempel administreres en injektion af en klinisk voksen 40 til 80 mg pr. Intravenøs infusion, og et spædbarn (tre måneder eller mere) administreres intravenøst ​​med 10 til 20 mg hver gang. Grænsen for den voksne (kropsvægt 60 kg) dosis er 3,75EU / mg, mens babyvægten kun er ca. 5 kg, den beregnede grænse er ca. 1,25EU / mg, hvis den maksimale dosis pr. Kg legemsvægt ikke tages i betragtning, grænser bakterien endotoksin Der vil være en stor forskel. 2. Bakterieendotoksingrænsen for nogle deklarerede sorter beregnes ikke baseret på den kliniske dosis, men beregnes ud fra dosis af den samme type pyrogentest, hvilket resulterer i en grænsefejl. 3. Bakterieendotoksingrænsen for nogle sorter blev kopieret fra den udenlandske farmakopé, og forskellen mellem den kliniske anvendelsesdosis på hjemmemarkedet og vægten af ​​kineserne og udlændinge blev ikke overvejet, og grænsen blev bestemt forkert. 4. Falsk beregning af den daglige doseringsdosis (multiple doseringer på en dag). 5. Når sortspecifikationen (koncentration) ændres, justeres ikke beregningen MVD. 6. Den maksimale dosis, der skal anvendes til etablering af metoden, har overskredet den dosis, der blev anvendt i klinikken. Inspektionsproces Først titerbestemmelsen Bakterielle endotoksinstandarder kalibreres som benchmarks for at bestemme den ækvivalente styrke af basisvægten. Titeren pr. 1 mg arbejdsstandard skal være mindst 2 EU, højst 50 EU og eksperimentelle data med ensartethed og stabilitet. Titeren bestemmes som følger: Mindst 4 prøver af hver batch af arbejdsstandard anvendes, og den samme batch sputumreagens og den samme standard anvendes. Hver arbejdsstandard fortyndes med endotoxin-testvand * i henhold til vægten og standardproduktet.En serie af 2-folds fortyndinger af endotoxinopløsning fremstilles og omsættes med hydrazinreagens Når logaritmen af ​​reaktionsendepunktet for de fire arbejdsstandarder Når standardafvigelsen (S) for middelværdien er mindre end 0,365, beregnes det geometriske middelværdi (i ng / mg) af reaktionsendepunkterne for de fire arbejdsstandarder og reaktionsendepunktet (i EU / mg) for standarden. For det andet testforberedelse 1. De redskaber, der bruges i denne metode, behandles for at fjerne eventuelt eksogent endotoksin, der kan være til stede. Tørristning ved 250 ° C i 30 minutter eller 180 ° C i 2 timer kan også anvendes. Andre egnede metoder kan også anvendes. Testoperationen skal forhindre mikrobiel kontaminering. 2. Kontroller følsomhedsmærkets værdi for batchnummeret 鲎 reagens før testen, som skal opfylde kravene. Tilsæt mængden af ​​hydrazinreagensopløsningsmidlet. Efter opløsning er det en guanidinreagensopløsning og er klar til brug. 3. Fortynding af testprøven: Når følsomhedsmærkeværdien af ​​batchnummeret 鲎 reagens er mindre end den interne giftgrænse for testprøven, beregnes den med følgende formel, og brug endotoksinetestvandet * til at fortynde reagenset til inspektion. Fortyndingsfaktor af testprøven = X / λ X: Endotoksinbegrænset endotoksingrænse (EU / ml) λ: følsomhedsværdien af ​​testmidlet for testmidlet (EU / ml) For det tredje, tjek 4 × 75 mm reagensglas (eller 0,1 ml / sæt oprindelig ampul med sputumreagens) indeholdende 0,1 ml sputumreagensopløsning, hvoraf 2 tilsættes 0,1 ml til reagensglasset og 1 til arbejdsstandarden 2 λ endotoxin 0,1 ml blev anvendt som et positivt kontrolrør, og 0,1 ml af en sputumreagensopløsning blev tilsat som et negativt kontrolrør. Efter forsigtigt blanding af reagensglassene blev røret lukket og anbragt lodret i et vandbad på 37 ± 1 ° C i 60 ± 2 minutter. Vær forsigtig, når du holder i røret og tager røret for at undgå negative resultater på grund af vibrationer. (4) Dom af resultater Røret blev forsigtigt fjernet fra vandbadet og inverteret langsomt klokken 1800. Gelen i røret blev ikke deformeret. Den positive blev ikke gled fra rørvæggen. (+) Gelen kunne ikke forblive intakt og var negativ fra rørvæggen. (a). Hvis reagensglas 2 er (1), anses det for at være i overensstemmelse med forskrifterne, og testen af ​​pyrogen-testmetoden (kaninmetode) må ikke udføres. Hvis begge rør er (+), skal de betragtes som ikke at overholde reglerne. For eksempel er 1 rør i 2 rør (+) og 1 rør er (1). I henhold til den beskrevne metode testes 4 rør igen. Et rør i 4 rør er (+), hvilket betyder, at det ikke er i overensstemmelse med reglerne. Medmindre andet er angivet i teksten, testes testartiklerne, der opfylder kravene, ved hjælp af pyrogen-testmetoden (kaninmetoden) og bedømmes i henhold til resultaterne. Grænsen for bakterielt endotoksin i testartiklen skal være i overensstemmelse med bestemmelserne i de respektive artikler. Den positive kontrol var (1), eller den negative kontrol var (+), og testen var ineffektiv. Vedhæftning: Bakteriel endotoksinetest for sterilt vand til injektion, vand til injektion, natriumchloridinjektion, 5% og 10% glukoseinjektion. Ikke egnet til mængden Generelt ingen tabuer. Bivirkninger og risici Generelt ingen skade.