Serumlipoprotein og serumlipoproteinelektroforese

Lipoproteinelektroforese bruges hovedsageligt til klassificering af hyperlipoproteinæmi, og det er også nyttigt at forstå blodlipidstatus for koronar hjertesygdom og bedre guide klinisk diagnose og behandling. Grundlæggende information Specialistklassificering: kardiovaskulær undersøgelse: biokemisk undersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Analyseresultater: Under det normale: Fundet i lav-lipoproteinæmi og så videre. Normal værdi: Lipoprotein med meget lav densitet: 0,06-0,3 g / l Lipoprotein med lav densitet: 0-7 g / L Lipoprotein med høj densitet (han): 0,41-0,63 g / l Zheng med høj densitet .42-0.68 g / l Over normal: Fundet ved primær hyperlipidæmi og så videre. Negativ: positiv: Tip: Før undersøgelsen er kosten let, og alkohol er forbudt. Kontroller om der er tom mave om morgenen. Normal værdi Celluloseacetatmembranelektroforese Mælketistelpartikler 0g / L (0 mg / dl); Lipoprotein med meget lav densitet 0,06 ~ 0,3 g / L (6 ~ 30 mg / dl); Lipoprotein med lav densitet <7g / L (<700 mg / dl); Lipoprotein med høj densitet: Han 0,52 ± 0,11 g / L (43 ± 18 mg / dl); Hun 0,55 ± 0,13 g / l (47 ± 2 mg / dl). Klinisk betydning 1, øget: ses ved primær hyperlipidæmi. 2, lavere: ses ved lav-lipoproteinæmi. Høje resultater kan være sygdomme: hyperlipidæmi, hyperlipoproteinæmi type II, koronar hjertesygdomme overvejelser 1. Prøve: Lipoprotein kan isoleres fra frisk, frossent serum. Plasma er ikke egnet til lipoproteinelektroforese, fordi et fibrinogenbånd vises. 2. Lipoproteinprofiler med klare adskillelseskomponenter er forudsætninger for nøjagtig fortolkning. Hvis disse betingelser er godt opfyldt, kan lipoproteinelektroforese og referencemetoden (ultracentrifugering) være ret konsistente. Præcisionen for hver komponent er forskellig, og det estimeres af variationskoefficienten, som generelt er mindre end 5%. 3. Lejlighedsvis forsvinder alfa-lipoproteiner, og / eller et smalt alfa-lipoproteinbånd vises. Dette skyldes, at frie fedtsyrer er i. Akkumulering på alfa-lipoproteiner får disse partikler til at have samme ladning. Når tætheden af ​​a-zonen øges, er resultatet højt. Sammenlignet med udfældningsteknikker er kvantitativ lipoproteinelektroforese kostbar. Inspektionsproces Umiddelbart efter venøs blodopsamling blev testoperationen: 1. Sæt pufferen i elektroforesetanken, og juster bufferen i tanke på begge sider for at gøre dem i samme plan. 2. Forberedelse af celluloseacetatfilm: Tag en celluloseacetatfilm (2 cm × 8 cm) og træk en vandret linje med en blyant på 1,5 cm (den ene side af den negative side) af den ru overflade for at få et prikket mærke. Efter nummerering og indikering af de positive og negative elektroder blev filmen nedsænket i barbiturat-barbital-natriumbufferopløsningen, og efter at være blevet tilstrækkelig mættet (sædvanligvis 20 minutter) blev overskydende buffer fjernet ved at klemme det rene filterpapir. 3. Celluloseacetatfilmhåret fastgøres til holderen til elektroforese og rettes. Pipette 3 ~ 5μl ikke-hæmolytisk serum med en mikropipette og tilsæt den langs den vandrette linje ved den vandrette linje. Prøven skal holdes i en bestemt afstand fra kanten af ​​filmen for at undgå deformation af proteinbåndet i elektroforesemønsteret. Efter at serumet trænger ind i filmen, vendes filmen. Når den lyse side vender opad, skal du sætte den fladt på elektroforesetankbeslaget, og forbind de to ender af filmen til pufferen med dobbeltlagsfilterpapir eller fire lag gasbind, og vent et stykke tid. 4, tænd for strømmen, vær opmærksom på de positive og negative elektroder på celluloseacetatfilmen, tilslut ikke forkert. Spænding 90 ~ 150V, strøm 0,4 ~ 0,6 mA / cm (forskellig elektroforese kræves spænding, strøm kan være forskellig, skal være fleksibel), sommerenergi 45 min, vinterens starttid er lidt længere, ca. 60 minutter, elektroforesezoneudvidelse ca. 25 ~ 35mm kan være. 5, farvning: Når kraften er afsluttet, fjernes filmen og nedsænkes direkte i Lichunhong S-farvestofopløsningen eller den aminosorte 10B-farvningsopløsning, farves i 5 til 10 minutter (ved albuminzonen), og skyll derefter det resterende i skylleopløsningen. Farve indtil baggrunden er farveløs. 6, kvantitativ: 1 kolorimetrisk metode: sprøjt den skyllede film, skær det farvede proteinområde i det tilsvarende rør, tilsæt 0,6 ml / l natriumhydroxid 6 ml i albuminrøret (beregne absorbansen ganget med 2), resten Tilsæt 3 ml til hvert rør, ryst det flere gange, og anbring det i en vandtank på 37 ° C i 20 minutter for at få dens farveudvaskning. Amino Black 10B-farvning Absorbansen af ​​hvert rør blev aflæst ved 620 nm under anvendelse af et spektrofotometer, og derefter blev indholdet af hvert rør beregnet (samtidig blindrørkontrol). Når Lichunhong S blev farvet, blev udvaskningen behandlet med 0,1 mol / l natriumhydroxid, og mængden var den samme som ovenfor. Efter 10 minutter tilsættes 0,6 ml 400 ml / l eddikesyre til albuminrøret (gang absorbansen med 2), og tilsæt 0,3 ml til de andre rør for at neutralisere noget af natriumhydroxidet for at gøre farven dybere. Om nødvendigt centrifugeres og tag supernatanten. Absorbansen af ​​hvert rør blev aflæst ved 520 nm ved et spektrofotometer (samtidig blank kontrol), og derefter blev det respektive indhold beregnet. 2 Densitometer-scanningsmetode: A. Gennemsigtig: Aspirér skyllevæsken på filmen (for at forhindre, at den gennemsigtige væske fortyndes for at påvirke det gennemsigtige resultat), nedsænk filmen i den gennemsigtige væske i 2 til 3 minutter, tag den derefter ud og flad den på en rullende måde. Rengør og ridsefrie glasglas (opret ikke bobler), opret objektglassene et stykke tid, fjern overskydende gennemsigtig væske, anbring i en ovn ved en konstant temperatur på 90-100 ° C, bages i 10-15 minutter, fjern og afkøl til stuetemperatur. Proteinområderne, der er gennemsigtige ved denne metode, er forskellige, filmen er flad og kan direkte scannes og permanent konserveres (gennemsigtig med hydrogennaphthalen eller flydende paraffin. Den skyllede film skal tørres og gennemsigtig, og den gennemsigtige film kan ikke opbevares. Lang og let at rynke). 2 Scanningskvantificering: Den gennemsigtige film placeres i et fuldautomatisk densitometer eller et andet densitometer mørkt felt til scanningsanalyse. Ikke egnet til mængden Upassende mennesker: Generelt er der ingen mennesker, der ikke er egnede. Bivirkninger og risici 1, lokal subkutan blødning: efter blodopsamlingen skal presses i tilstrækkelig tid, især dem med blødningstendens, for ikke at forårsage subkutan oser og blå mærker på grund af ingen blodkoagulation. 2, infektion: opmærksom på aseptisk operation under venøs blodopsamling, for ikke at forårsage lokal infektion.