apolipoprotein AⅡ

Apolipoprotein er en plasmalipoproteinfraktion indeholdende en række lipoproteiner og adskillige forskellige specifikke apolipoproteiner. Der er mere end 20 slags apolipoproteiner, der er blevet opdaget indtil videre. Blandt dem er der hovedsageligt aPOA1, AII, B-100, B48, Cl, CII, CIII, D, E og lignende. Grundlæggende information Specialistklassificering: kardiovaskulær undersøgelse: biokemisk undersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Tip: I det sidste måltid, før blodet trækkes, skal du undgå mad med fedt med højt fedtindhold og drikke 12 timer, ekstraher venearblod underarmen. Normal værdi 250 ~ 520 mg / l. Klinisk betydning Reduceret i koronar hjertesygdom, diabetes, nefrotisk syndrom, arvelig ApoA-I-mangel (Tangier-sygdom), familiær lavalfa-lipoproteinæmi, fiskejuge, alvorlig underernæring, aktiv hepatitis og leverfunktion. Lave resultater kan være sygdomme: koronar hjertesygdom, diabetesovervejelser (1) Immunoturbidimetri: 1 Vedrørende antiserum: Det turbidimetriske assay har højere krav til antiserum end andre metoder. Den turbidimetriske metode er fortrinsvis et polyklonalt antistof. Anti-serum skal være fri for anti-serum. Skal være meget opmærksom på apoA-II ekstraheret fra humant serum for at opnå immunrenhed, kromatografisk renhed og elektroforese-renhed, hvilket ikke er muligt i det generelle laboratorium. Antiserumtiter (titer) bør ikke være mindre end 16. På nuværende tidspunkt har apoA-II antiserum i nogle indenlandske kommercielle reagenser ekstremt lav titer, så du skal være opmærksom, når du køber sættet. Hvis du ikke har erfaring med at identificere antisera-kvalitet inden køb, skal du bede den kvalificerede enhed om at identificere den. 2 Den øverste standardprøve (serum) fortyndes 200 gange til manuel drift (100 μl prøve), og hvis der er en præcisionsprøveudtager, kan den fortyndes 20 gange (ved hjælp af 10 μl). For at tilpasse sig betingelserne i forskellige laboratorier (såsom forskellige typer automatiserede instrumenter), skal andelen antigen-antistof være opmærksom på, når der foretages passende modifikationer. Det skal bemærkes, at der ikke bør være noget antigenoverskud i reaktionssystemet, og den lineære øvre grænse bør ikke være lavere end 2,5 g / L. Med andre ord skal mængden af ​​antiserum være tilstrækkelig, ellers er resultaterne lave, når apoA-I er høj i prøven. På nuværende tidspunkt har nogle indenlandske lægemiddelsæt ikke kun en lav anti-serumtiter, men doseringen af ​​prøverne i operationen er for stor (såsom 3 ~ 5 μl), antistoffet er åbenbart utilstrækkeligt, og de målte resultater er uundgåeligt unøjagtige. 3 For at opnå nøjagtig måling skal kalibreringskurveberegningsresultaterne udføres i apoA-II og B turbiditetsmåling (slutpunktmetode). En bestemt koncentration (lav prøvedosis) -koncentration (X) er dybest set lineær med uklarhed (Y), og lineær regression beregner en bestemt afskæring på Y-aksen (A-værdi <0,1), så afvigelsen fra beregningsresultatet beregnes ved hjælp af enkeltpunktskalibrering. Større kan de målte resultater ikke nøjagtigt afspejle niveauet for højt (højt lavt, lavt højt). Forsøm ikke målingens nøjagtighed på grund af enkelhedens metode. Uanset typen af ​​det automatiserede instrument, skal du først prøve kalibreringskurven. Hvis testen gentages under instrumentets betingelser og de specifikke betingelser, er afskærmningen af ​​regressionslinjen ikke indlysende, kan kalibreringsmetoden med et enkelt punkt anvendes. Når mængden af ​​prøven er 3 til 5 μl, selvom mængden af ​​antiserum forøges, er koncentrationen og uklarheden ikke lineær og kan kun beregnes, når kurven er lineært konverteret. 4 Den største interferensfaktor er uklarheden i selve serumet (såsom serum med højt fedtindhold), og forbehandlingsmetoder, såsom ultracentrifugering eller lipasehydrolyse, er ikke praktiske. Virkningen af ​​uklarhed med overfladeaktive stoffer er også begrænset, så der skal laves et tomt rør i analysen. Ud over den topunktsmetode, der er anvendt i automatiseret analyse, er det en fejltagelse manuelt at bruge et enkelt reagens uden at trække prøveemnet ud. For at reducere matrixeffekten på turbiditetsreaktionen skal serum med fast værdi anvendes som en kalibrator. Derudover skal forstyrrelser som støvpartikler og uklare retter udelukkes. 5 Nogle kommercielle sæt (inklusive nogle importerede produkter) med unøjagtige kalibreringsseraværdier er en vigtig fejlkilde. (2) Raketelektroforesemetode: 1 Fortyndingsforholdet mellem antigenet og mængden af ​​antiserum bør vælges, så rakettoppen er klar, hældningen af ​​kalibreringskurven er moderat, og linjen er passende. Metoden måler samtidig apoA-II og apoB, og mængden af ​​de to antisera bør justeres, så tohøjden af ​​de to er forskellige, og apoB-spidshøjden ikke er mindre end 1 cm. 2 Forskellige typer antiserums (såsom kaniner og får) testes til den tilsvarende pris, og resultaterne vil være forskellige. ApoA-I-assayet er fortrinsvis kaninantiserum. Når kaninserum bruges, er topformen skarp, og toppen, der produceres af fåreserumet, er tyk, spidsspidsen er rund og stump, og nogle gange vises et spøgelsesbillede før toppen. Hældningen af ​​kalibreringskurven for kalibreringsserumet er også forskellig. Uanset hvilket antiserum der bruges, er de kvantitative resultater imidlertid ikke meget forskellige. 3 Elektroforese under visse betingelser, peakhøjden på kalibreringsserumet i forskellige fortyndinger ændres ikke markant, og hældningen for kalibreringskurven er stort set den samme. Hvis prøveens tophøjde overstiger kalibreringskurveområdet, skal prøvefortyndingsfaktoren justeres og testes igen. Inter-board CV er typisk mindre end 5%. 4 Raketelektroforeseresultater kan observeres ved farvning eller direkte visuel observation af rakettoppen. Førstnævnte bruger mindre prøver og sparer antiserum, men hvis prøverne og antiserum forøges korrekt, er det mere praktisk at ikke plette. Den anvendte agarose skal være standardelektrosmotisk eller hypotonisk. Hvis der tilføjes en passende mængde dextran eller polyethylenglycol til gelen, bliver raket toppen klarere. 5 Målingen af ​​rakettoppen kan beregne arealet eller spidshøjden, og området er spidshøjden ganget med spidsbredden (bredden ved halvhøjden af ​​toppen). Målenøjagtigheden er fortrinsvis op til 0,1 mm. Der skal anvendes mekanisk eller elektronisk forstærkerudstyr. Spidshøjden i området for standardkurven er fortrinsvis 1 til 4 cm. 6 Denne metode er anvendelig til analyse af en lille mængde prøver. Også egnet til bestemmelse af apoAII, Cl, CII, CIII, D, E og Lp (a). Inspektionsproces Raketelektroforese: 1 hældeplade: 10 g / L agarose 10 ml pr. Plade, smelt i kogende vandbad, bland godt, tilsæt 50 μl apoA-II antiserum og 50 μl apoB antiserum, når det er koldt til 50 ~ 55 ° C (mængden afhænger af antiserum titer) ), hurtigt blandes og hældes på glaspladen, der er forudindstillet på vandplatformen, afkøles og placeres derefter ved 4 ° C, efter 20 minutter, stans huller, hullet er ved katodens ende af pladen, huldiameteren er 3 mm, hulrummet er mindst 5 mm, og hulkapaciteten er 5 μl. Placer pladen i elektroforesetanken og broen med filterpapir. 2 fortyndet antigen: kalibreringsserumet blev fortyndet til 1: 100, 1: 150, 1: 200, 1: 300 og 1: 400 (til kalibreringskurve) med 0,15 mol / l NaCl-opløsning, og serumprøven blev fortyndet 1: 200. Sæt køleskabet ved 4 ° C i højst 3 dage. 3 Indlæsning: I lav strømtilstand (10 mA / plade) fortyndes det faste serum og prøver for at absorbere 5 μl (nøjagtigt), og tilsæt agarosegelprøven godt. Hvert bestyrelse skal gøre en række standarder. 4 effekt: stabil strømning 24mA / kort, terminal spænding 6 ~ 8V / cm, afkøling med rindende vand for at opretholde agarose 15 ° C, elektroforese 3 ~ 4h. 5 deproteiniseret protein og tørfilm: agarosepladen efter elektroforese blev nedsænket i 0,15 mol / l NaCI i 30 minutter, og filmen blev anbragt på polyesterfilmen, og limet blev absorberet af flerlagsfilterpapiret under blidt tryk. Fugt, tør derefter filterpapir, film og polyesterfilm sammen, eller tør det med en varmluftsblæser. Efter tørring vil filmen naturligvis adskilles fra filterpapiret og polyesterfilmen. 6 farvning: agarosefilmen blev nedsænket i farvningsopløsningen i 20 til 30 minutter. 7 Affarvning: Blødgør den farvede film med en farveløsning, indtil rakettoppen er klar, og baggrunden er dybest set farveløs. Det kan klemmes i to stykker cellofan i vand og kan opbevares i lang tid efter tørring. Det kan også blødgøres i rindende vand for at fjerne baggrunden. Ikke egnet til mængden Generelt ingen skarer. Bivirkninger og risici 1. Infektion: Vær opmærksom på aseptisk operation ved indsamling af blodprøver, og stop blødning efter blodopsamling for at undgå forurening af vand og væske for at undgå lokal infektion. 2, blødning: efter at blodet har fået en komplet komprimeringstid, især koagulopati, blødningstendens, for at undgå lokal subkutan oser, blå mærker og hævelse.