Telomerase

Telomerase er en speciel omvendt transkriptase, der består af RNA og protein involveret i syntesen af ​​telomerer (en specifik nukleotidsekvens og struktur) ved DNA-enderne af eukaryotiske celler. Telomererlængden af ​​normale somatiske celler forkortes gradvist, når cellen deler sig, og telomeraseaktiviteten forbedres, og telomerens længde kan opretholdes uden forkortelse, så cellerne kan sprede sig og blive kræftagtige. Derfor kan detektering af telomerase og dets inhibitorer bruges til tumordiagnose og -behandling. Grundlæggende information Specialistklassificering: Onkologisk undersøgelse: immunundersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: ikke faste Analyseresultater: Under det normale: Normal værdi: ingen Over normal: Negativ: Normalt negativ. positiv: Lillecellet lungekræft har øget telomeraseaktiviteten i det tidlige stadium, og ikke-småcellet lungekræft har flere aktivitetsændringer end i midttrinnet. Tip: Hold et normalt tankesæt. Normal værdi Negativ. Klinisk betydning Det er velegnet til diagnose og differentiel diagnose af forskellige tumorsygdomme. Forøgelse: leverkræft (93,88 OD / 30 μg protein), kræft omgivende væv (24,09 OD / 30 μg protein). Lillecellet lungekræft har øget telomeraseaktiviteten i det tidlige stadium, og ikke-småcellet lungekræft har flere aktivitetsændringer end i midttrinnet. Positive resultater kan være sygdomme: forholdsregler mod kræft i bugspytkirtlen og kræft i skjoldbruskkirtlen 1. Vær opmærksom for at forhindre laboratoriekontaminering og falsk positiv eller falsk negativ. 2. Vær opmærksom på at fjerne polymeraseinhibitoren i vævsprøven for at reducere falske negativer. 3. Scintillationsanalyseteknologi, ELISA-metode, hybridiseringsmetode in situ er mere pålidelige end TRAP-metoden. Inspektionsproces Umiddelbart efter indsamling af blodprøver sendes de til undersøgelse og tumorimmunanalyse. Registreringsoperation: Genomisk DNA var 0,1 μg, puffer indeholdende 50 mmol / L kaliumchlorid, 10 mmol / LTris-HCI (pH 8,4), 1,5 mmol / L magnesiumchlorid, 100 μg gelatine, hver primer var 0,25 μmol / L; dATP, dCTP, dGTP DTIP var 200 μmol / L hver, DNA-polymerasen var 2,5 U, og det endelige volumen var 100 μl. Tilsæt et par dråber flydende paraffin for at forhindre fordampning. Reaktionscyklus: 1 Denaturering: 90 ° C i 30-60 s, udglødningstemperatur på 2 primere og skabelon: 40-60 ° C 30-60 s, 3 forlængelse: 72 ° C 1-2 min. Efter gentagne cyklusser på 30 til 40 gange blev den sidste 7 ° 72 ° C primerforlængelse afsluttet i 7 minutter. Efter fjernelse af den flydende paraffin er produktet tilgængeligt til analyse. Efter elektroforese på agarosegel blev den farvet med ethidiumbromid, og en fluorescerende strimmel med forventet amplifikationslængde blev observeret ved bestråling med en UV-lampe. Produktet kan også hybridiseres til en Southern blot eller en spot blot med en radiomærket eller ikke-radiomærket oligonukleotidprobe. Det er mere praktisk at bruge det automatiske PCR-instrument. Efter tilsætning af reaktionsreagens, DNA-skabelon og Taq-DNA-polymerase til reagensglasset sættes det i den justerede procedure, det vil sige den krævede temperatur, tid og forlængelse af den respektive temperatur og tid og antallet af cykler. Reaktionen udføres i et automatisk instrument til opnåelse af et tilfredsstillende amplifikationsprodukt. Ikke egnet til mængden De, der ikke har en indikation til undersøgelse, bør ikke testes. Bivirkninger og risici 1. Infektion: Vær opmærksom på aseptisk operation, når blod opsamles, undgå forurening af vand og andre dele på blodopsamlingsstedet for at undgå lokal infektion. 2, blødning: efter at blodet har fået en komplet komprimeringstid, især koagulopati, blødningstendens, for at undgå lokal subkutan oser, blå mærker og hævelse.