Enzym-linked immunosorbent assay

Det enzymbundne immunosorbentassay er et enzymbundet immunosorbentassay. Det bruges til at detektere antigenet (eller antistoffet), der skal testes, og som er coatet i brønden i fastfasepladen. Dvs. Farven udvikles efter underlaget for at bedømme resultatet. Dybden af ​​farvereaktionen er proportional med mængden af ​​det tilsvarende antistof eller antigen i prøven. Denne farvereaktion kan bestemmes kvantitativt af en ELISA-detektor, der kombinerer følsomheden af ​​den enzymkemiske reaktion med specificiteten af ​​antigen-antistofreaktionen, hvilket gør ELISA-metoden til en både specifik og følsom detektionsmetode. Grundlæggende information Specialistklassificering: klassificering af vækst og udviklingskontrol: immunologisk undersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: ikke faste Analyseresultater: Under det normale: Normal værdi: ingen Over normal: Negativ: Normal. positiv: Den menneskelige krop er i en dynamisk ligevægt og usund tilstand. Tip: Slap af under kontrol. Normal værdi Floraens type og andel i kroppen er normal, og den menneskelige krop er i en tilstand af dynamisk balance og sundhed. Klinisk betydning Det enzymbundne immunosorbentassay er den mest anvendte teknik til enzymimmunoanalyse. Almindeligt anvendte ELISA-metoder inkluderer en sandwich-metode med dobbelt antistof og en indirekte metode, førstnævnte til påvisning af makromolekylære antigener og sidstnævnte til måling af specifikke antistoffer. Med hensyn til parasitiske sygdomme bruges det til serologisk diagnose af Plasmodium, Amoeba, Liegemann, Trypanosoma, Schistosomiasis, cysticercosis, Toxoplasma, Schistosomiasis, Leverfleks, Blodorm, Trichinose Dette er vigtigt for både læger og dyrlæger. Det er blevet brugt til at detektere antistoffer mod Streptococcus, Salmonella, Brucella, Mycobacterium tuberculosis, Haemophilus, Vibrio cholerae, Neisseria gonorrhoeae, Candida osv., Og kan også bruges til tetanus antitoxin og Vibrio cholerae antitoxin. Bestemmelsen og påvisningen af ​​antistoffer mod rickettsia rickettsia-infektion kan diagnosticeres. Rickettsia kan også bruges til at identificere tæt beslægtede arter. Der er også rapporter om undersøgelse af antistoffer mod Chlamydia psittaci. Influenzavirus, fåresygevirus, mæslinger, røde hunde, rotavirus, herpesvirus, cytomegalovirus, EB-virus, adenovirus, enterovirus, encephalitisvirus, gul febervirus, rabies Giftig og poliovirus osv. Er mere følsomme end de aktuelt anvendte inspektionsmetoder. I immunologiske sygdomme er der test til påvisning af autoimmune sygdomme og diagnose af allergier, såsom antistoffer mod forskellige allergener, DNA-antistoffer og thyroglobulin-antistoffer, erythematosus-antistoffer og lignende. I hygiejne kan det bruges til at påvise stafylokokker-enterotoksin og salmonella-toksin i fødevarer. Positive resultater kan være sygdomme: erhvervet buløs epidermolyse, trypanosomiasis, schistosomiasis og hepatobiliary sygdomme, toxoplasmosis skleritis, Gestman syndrom, neonatal medfødt toxoplasmosis, leverfluke, Siberisk rickettsia opdaget feber, tarmpiriflagellat, turistforholdsregler for diarré 1. Underlag: Forskellige enzymer har specificitet for underlaget, så brug af forskellige typer enzymer kræver forskellige underlag. Når enzymkonjugatet er blevet bestemt (f.eks. AP eller HRP), er området for substrater, der er tilgængelige til selektion, meget begrænset. Hvordan man vælger et passende underlag inden for omfanget af dette begrænsede underlag, skal vælges under følgende betingelser: (1) Substratet skal være farveløst, inden det katalyseres af enzymet, og have en åbenlys farve efter at være blevet katalyseret af enzymet. Skift, så resultaterne kan skelnes tydeligt. (2) farven er let at tørre og elueres; (3) produktet efter farveudvikling skal være stabilt, det farvede stof, der er produceret i den kvantitative bestemmelse, skal være opløseligt; (4) prisen Billig, let at få og ikke-giftig. Derfor anvendes nitrophenylphosphat generelt til AP-enzymkonjugatet, og farven er orange efter farveudvikling, og farven er stabil Reaktionen afsluttes med 2 mol / L NaOH, og OD-værdien kan måles ved en bølgelængde på 403 nm. 2. Vaskemiddel og tyndere: For at maksimere mængden af ​​specifikt bundet antistof, bør antigenet, der er coatet i brønden på mikropladen, være lidt overskydende. Under inkubering eller vask kan imidlertid noget af det adsorberede antigen vaskes væk fra den faste bærer. Derfor er proteinet andet end det specifikke antistof, der er tilføjet til testserumet, sandsynligvis adsorberende til råemnet fra den oprindelige antigenovertrukne pit, forøgelse af baggrundsfarve og generering af en falsk positiv reaktion, hvilket er en faktor, der begrænser specificiteten af ​​ELISA. Mange forskere har tilføjet forskellige beskyttelsesmidler til fortyndingsmidler og detergenter for at hæmme den konkurrencedygtige adsorption af ikke-specifikke proteiner. Inspektionsproces Den grundlæggende metode er at adsorbere et kendt antigen eller antistof på overfladen af ​​en fastfasebærer (polystyrenmikro-reaktionsplade), reagere den enzymmærkede antigen-antistofreaktion på overfladen af ​​den faste fase og vaske de frie komponenter i væskefasen ved vask. desuden. I henhold til den faste fase-bærer, der bruges i ELISA, er den opdelt i tre typer: den ene er ELISA ved hjælp af polystyrenmikroplade som bærer, som er ELISA (mikroplade ELISA), som vi normalt henviser til, den anden bruger nitrocellulosemembran som bærer. ELISA kaldes spot ELISA (Dot-ELISA), den anden er ELISA ved hjælp af hydrofob polyester klud som en bærer, kaldet klud ELISA (C-ELISA). I mikropladen ELISA er det yderligere opdelt i indirekte ELISA, dobbelt antistofsandwich ELISA, dobbelt sandwich ELISA, konkurrence ELISA, blokerende ELISA og antistoffangst ELISA i henhold til dets egenskaber. Ikke egnet til mængden Der er ingen specielle tabuer. Bivirkninger og risici Der er ingen relaterede komplikationer og farer.