Lymfocyttoksicitetstest

Når specifikke effektor T-lymfocytter bringes i kontakt med målceller in vitro, kan de udvise egenskaben til at ødelægge og lysere målceller, kaldet lymfocyttoksicitet. Målcellen kan være en tumorcelle eller anden vævscelle. Den måde lymfocytter dræber målceller på kan ødelægge målceller ved direkte drab eller produktion af lymfokiner. Dette er lymfocyt-toksicitetstesten. Nogle lymfocytter, såsom CTL, NK, LAK, etc. har direkte dræbende virkning på målceller, og afhængigt af arten af ​​effektorcellerne, der skal påvises, kan de tilsvarende målceller, såsom tumorceller, transplanterede donorceller, etc. vælges. Dette eksperiment kan anvendes til forskning på tumorimmunitet, transplantatafstødning, virusinfektion og lignende. Metoder inkluderer: chromfrigørelsesmetode, lactatdehydrogenase-frigørelsesmetode og apoptotisk celleassay. Grundlæggende information Specialistklassificering: Onkologisk undersøgelse: immunundersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: faste Analyseresultater: Under det normale: Normal værdi: ingen Over normal: Negativ: Normal. positiv: Ingen relevante data på dette tidspunkt. Tip: Hold et normalt tankesæt. Normal værdi Den morfologiske undersøgelsesmetode blev sammenlignet mellem testgruppen og kontrolgruppen, P <0,05. 125I eller 51Cr metode P> 0,05. Klinisk betydning Unormale resultater: Denne test kan bruges som en indikator til måling af cellulær immunitet hos tumorpatienter in vitro; den kan også bestemme prognosen for tumorpatienter ved at måle immuncells evne til at dræbe tumorceller og kan også identificere funktionelle underpopulationer af lymfocytter. Befolkningen, der skal undersøges: Lymfocyt-toksicitet krydstesten kaldes også den komplementafhængige cytotoksicitetstest (CDC). Det er for at kontrollere, om der er en donor i organtransplantationsmodtageren, eller donorens HLA-antistof mod modtageren, og skal udføre CDC-test inden organtransplantation. Forholdsregler (1) Ved måling af individets lymfocyters evne til at angribe tumorceller blev tumorceller og lymfocytter fra individet sat til den eksperimentelle gruppe, og tumormålceller og kulturmedium blev føjet til kontrolgruppen. Hvis andre prøver såsom tumorantigener eller immunogener, terapeutiske medikamenter osv. Er involveret i cellulær immunitet, tilføjes en tredje gruppe. I denne testgruppe får lymfocytter først lov til at reagere med prøven, der skal testes, og vaskes derefter og observeres derefter. Den cytotoksiske virkning af sensibiliserede lymfocytter på tumormålceller. De to første grupper blev kontrolgruppen på dette tidspunkt. (2) Overlevelsesraten for målceller og lymfocytter bør være i en optimal tilstand, generelt> 90%. (3) Kalveserumet, der tilsættes til kulturopløsningen, skal først testes for toksicitet. (4) Antallet af inokulerede målceller og lymfocytter bør være nøjagtigt. (5) Den eksperimentelle gruppe og kontrolgruppen skal arrangeres på samme bræt for at reducere fejlen. (6) pH af kulturopløsningen er mest foretrukket 6,8 til 7,2. Inspektionsproces (1) Inokulering af målceller: Vælg tumorceller, der kan vokse klæbende, vask dem med Hank-opløsning, fordøj med 2,5 g / L trypsin i 2 til 3 minutter, hæld trypsinopløsningen (cellerne er stadig fastgjort til flaskevæggen) og brug Hank. Cellerne blev let vasket 3 gange, og Hank-opløsningen blev hældt. De vedhæftede celler blev vasket med RPMI1640-opløsning indeholdende 10% til 20% kalveserum, og cellepelleten blev fjernet ved filtrering gennem et 100-mesh filter til fremstilling af en enkelt tumorcellsuspension på 1 x 106 / ml, og cellesuspensionen blev pipetteret med en dråber. Dråbe i en 40-brønds kulturplade, 1 dråbe pr. Brønd (ca. 100-150 celler), og anbring pladen i en 5% CO2 inkubator ved 37 ° C i 20 timer. Kulturpladen blev taget ud, og kulturopløsningen blev fjernet. Efter Wrights farvning blev det gennemsnitlige antal vedhæftede tumorceller pr. 10 brønde talt. Hvis forskellen mellem de to grupper var> 1/3, var fejlen for stor til at blive brugt, og fejlen var ikke stor. Dyrkningspladen kan formelt testes. (2) Adskillelse af lymfocytter: Tag heparin-antikoagulation 3 ml af individet, adskill lymfocytterne med saccharose-diazepam-udvaskningsopløsningen, vask dem derefter med Hank-opløsning 3 gange, og bland dem derefter med RPMI1640-opløsning (2 ~ 3) ) × 105 / ml cellesuspension. (3) Cytotoksicitetstest: lymfocytter og målceller blandes i et forhold på 200: 1, og (2 ~ 3) × 104 lymfocytter (i 0,1 ml volumen) tilsættes til hver brønd, og ca. 20% kalveserum tilsættes per brønd. 0,1 ml RPMI 1640-opløsning blev anbragt i en 37 ° C 5% CO2-inkubator i 40 timer. Dyrkningspladen blev taget ud, og kulturopløsningen blev fjernet. Efter Wrights farvning blev antallet af målceller, der var tilbage i bunden af ​​pladen, talt under et mikroskop. Ikke egnet til mængden Der er ingen tabuer. Bivirkninger og risici Der er ingen relaterede komplikationer og farer.