B-lymfocyt overflademarkører

Humoral immunfunktionstest er en type test, hvor laboratoriet vurderer individuel humoral immunfunktion. Påvisningen af ​​humoral immunfunktion er baseret på de grundlæggende processer med humoral immunitet, herunder B-lymfocyt-påvisning, Ig-detektion og påvisning af antistofproduktionsfunktioner. Grundlæggende information Specialistklassificering: klassificering af vækst og udviklingskontrol: immunologisk undersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: ikke faste Tip: Hvis prøven ikke kan observeres dagen, suspenderes cellerne i den fluorescerende antistof-konserveringsopløsning, opbevares ved 4 ° C og tælles den næste dag. Normal værdi Det gennemsnitlige IgM var 11,2 ± 6,0%; det gennemsnitlige IgG var 7,5 ± 3,3%. Klinisk betydning Faldet i antallet af B-celler er relateret til den humorale immunmangel, og stigningen i antallet af B-celler er relateret til den ondartede proliferation af B-celler. Forholdsregler (1) Tilstedeværelsen af ​​agglomereret IgG i det fluorescerende antistofreagens og det agglomererede IgG kan være falsk-positivt bundet til Fc-receptoren på overfladen af ​​B-cellen. Derfor er det for at undgå agglomerering af IgG nødvendigt at være opmærksom på: 1 Fluorescerende antistoffer med et for stort F / P-molforhold kan ikke anvendes, og generelt foretrækkes 1 til 3. 2 Fluorescerende antistoffer, der indeholder proteiner med lav koncentration, er ustabile ved lav temperatur og bør ikke være lavere end 2 mg / ml. 3 Fluorescerende antistoffer, der er opbevaret ved lav temperatur, bør ikke fryses-optøes gentagne gange og centrifugeres i 30 minutter ved 150.000 r / min før brug for at fjerne aggregater. (2) Når der anvendes levende lymfocytter til immunofluorescensfarvning, tilsættes NaN3 til alle reagenser (mærket antistof, Hank-opløsning osv.) For at begrænse fluidmængden af ​​cellemembranen. Ellers forekommer cap-lignende fluorescens og fagocytose, og det faktiske antal fluorescerende celler vil falde. (3) Når der er farvet med et anti-IgG-fluorescerende antistof, binder antigen-antistoffet (IgG-typen) immunkompleks indeholdt i prøven sig til Fc-receptoren på overfladen af ​​B-cellen og er fluorescerende positiv. Af denne grund er det blevet foreslået at farve med fluorescerende mærket anti-F (ab) 2-antistof for at udelukke, at Fc-receptorer bliver farvet. På grund af fremkomsten af ​​monoklonale antistoffer mod B-celleoverfladespecifikke molekyler (CD19, CD20 osv.) Er det blevet tilbøjelig til at anvende fluoresceinmærkede monoklonale antistoffer mod CD19 eller CD20 til direkte reaktion med perifere blodlymfocytter; De monoklonale antistoffer (primære antistoffer) af CD19 og CD20 omsættes først med lymfocytter, derefter kombineret med fluoresceinmærket kanin eller gede-anti-mus-IgG (andet antistof), talt med fluorescensmikroskopi eller flowcytometri til at tælle perifert blod. B-lymfocytter. Inspektionsproces (1) Tag heparin-antikoagulant 2 ml, tilsæt en lige stor mængde Hank-væske og bland godt. Gentag laget på den lagdelte opløsning, 2000r / min, centrifuge i 20 minutter. Lymfocytlaget blev taget ud, Hank-opløsningen blev tilsat, vasket 3 gange, 1200 r / min., Centrifugeret i 10 minutter, lymfocytkoncentrationen blev indstillet til 1 x 107 / ml, og 0,1 ml blev dispenseret i to rør. (2) Vask lymfocyt-suspensionen igen med Hanks opløsning, smid supernatanten og brug filterpapiret til at fjerne den resterende væske fra rørets indre væg, og tilsæt 2 dråber kanin-anti-humant IgG og anti-humant IgM fluorescerende antistof (ca. 0,08 ml). Efter omrystning forsigtigt anbringes 37 ° C inkubator i 30 minutter. (3) Tag ud af inkubatoren og vask to gange med Hank-opløsning, centrifuger ved 1000 r / min i 10 minutter, absorber forsigtigt al supernatanten, tilsæt 1 dråbe 50 ml PBS-bufret glycerin til bunden af ​​røret, bland og tag 1 dråbe for at tilføje På dækslet skal du dække dækslet og observere under et fluorescensmikroskop. Ikke egnet til mængden Der er ingen tabuer. Bivirkninger og risici Ingen komplikationer eller farer.