PHA-lymfocyttransformationsassay

PHA-lymfocyttransformationstesten er en morfologisk og biokemisk ændring, hvor T-lymfocytter og mitogener co-dyrkes in vitro, og nogle små lymfocytter omdannes til umodne moderceller og udsættes for mitose. metode. Grundlæggende information Specialistklassificering: Onkologisk undersøgelse: immunundersøgelse Gældende køn: om mænd og kvinder anvender faste: ikke faste Tips: Vær opmærksom på en sund kost og oprethold et godt humør. Normal værdi Tæller lymfocytter 200, identificerer lymfoblaster (mere end 2 til 4 gange mere end normale lymfocytter, klar nukleær membran, løs nuklear plaque, fin kerne, åbenbar nucleoli, rigelig cytoplasma, basofil), overgang Lymfocytter (mindre ændring i volumen, kun de ovennævnte åbenlyse nukleare ændringer), små lymfocytter (lidt større end røde blodlegemer, tæt kernekromatin, ingen nucleoli), konverteringsgraden blev talt. Den normale dermatologiske konverteringsgrad er større end 58%. Klinisk betydning Faldet i PHA-lymfocyttransformationshastighed er et svar på et fald i cellulær immunfunktion. Denne undersøgelse, dermatologi, bruges for det meste til sygdomsklassificering (såsom spedalskhed), bedømmelse af sygdomme (såsom ondartede hudtumorer), observation af lægemiddeleffektivitet og nogle undersøgelser af immundefekt og allergiske hudsygdomme. Unormalt resultat Forskellige symptomer forårsaget af nedsat immunfunktion. Den person, der har behov for undersøgelse, mistænkes for at lide af symptomer på spedalskhed eller malignitet i huden. Forholdsregler 1. Mediets sammensætning har stor indflydelse på konverteringsfrekvensen, vær opmærksom på dets effektive periode. 2. Kalveserum skal inaktiveres inden brug. 3. Sørg for, at der er tilstrækkelig gas ved kultivering. Generelt bør den samlede mængde væske i 10 ml kulturflaske ikke overstige 2 ml. 4. Overdreven PHA-dosis er toksisk for celler, for lille til at stimulere lymfocyttransformation Dosen af ​​PHA-konverteringsreaktion skal bestemmes inden testen. 5. Der bør udføres streng aseptisk operation i eksperimentet for at forhindre forurening. Tabu før testen: Vær opmærksom på en sund kost og oprethold et godt humør. Krav til inspektion: Samarbejde aktivt med lægen. Inspektionsproces Driftsmetode: 1. Tag aseptisk heparin-antikoagulant 0,1 ml, tilsæt 1,8 ml cellekulturmedium, tilsæt 1000μg / m1 PHA0,1 ml, kontrolrør uden PHA, dyrk cellerne ved 37 ° C, 5% CO2 til 3d, ryst 1 pr. Dag gange. 2. Ved afslutningen af ​​kulturen blev det meste af supernatanten kasseret, og 8,5 g / L NH4CI 4 ml blev tilsat og blandet og anbragt i et 37 ° C vandbad i 10 minutter. Centrifuger ved 3,2500 r / min i 10 minutter, kasser supernatanten, tilsæt 5 ml fikseringsmiddel til pelleten, og lad den stå ved stuetemperatur i 5 minutter. Centrifuger ved 4.2500 r / min i 10 minutter, kasser supernatanten, lad 0,2 ml pelleterede celler til tablettering og blæse hurtigt tørt. 5. Giemsa-farvningsopløsning farves i 10-20 minutter, vaskes med vand og tørres. 6. Oliespejl Tæller antallet af celler transformeret i 200 lymfocytter og beregner konverteringshastigheden. Resultatet bedømmes: 1. Morfologiske kriterier for lymfoblaster: størrelsen på kernen, forholdet mellem kerne og cytoplasma, farvning af cytoplasmaet og strukturen af ​​kernen og tilstedeværelsen eller fraværet af nukleoli. (1) Ældre små lymfocytter: størrelsen på de ukulturerede små lymfocytter er 6-8 um, den nukleare farvning er tæt, ingen nukleoli, forholdet mellem nuklear og cytoplasma er stort, og cytoplasmaen er farvet til mild basofil. (2) Overgangslymfocytter: større end små lymfocytter, ca. 10 ~ 20μm, nuklearfarvning er tæt, men nukleoli vises, som er nøglepunktet til identifikation af modne små lymfocytter. (3) lymfoblaster: cellevolumen stiger, ca. 20 ~ 30μm, formen er ikke pæn, ofte lille fremspring, nukleær udvidelse, nuklear farvning løs, der er 1 eller 2 nukleoli, cytoplasma udvides, ofte cytoplasma Tom boble. (4) Andre celler: F.eks. Efter neutrofilkultur i 72 timer er det meste af henfald eller død fragmentering. 2. Beregning af lymfocyttransformationshastighed Hoved, krop og hale blev undersøgt i ovennævnte klassificering, og 200 lymfocytter blev talt for at beregne procentdelen. Transformerede lymfocytter inkluderer lymfoblaster og overgangslymfocytter, og ikke-transformerede lymfocytter henviser til modne små lymfocytter. Under normale omstændigheder er den PHA-inducerede lymfocyttransformationhastighed 60 til 80%, og hvis den er 50 til 60%, er den lav, og når den er 50% eller mindre, nedsættes den. I henhold til resultaterne opnås den rigtige vurdering. Ikke egnet til mængden Upassende skare: midlertidigt ukendt. Bivirkninger og risici Der er ingen relaterede komplikationer og farer.