Meerrettichperoxidase-Anti-Meerrettich-Peroxidase-Verfahren

Die Eigenschaften des PAP-Komplexes hängen mit der Herstellungsmethode des Reagens zusammen. HRP wird zuerst verwendet, um Tiere zu immunisieren, um hochtiterhafte, hochspezifische Anti-HRP-Antikörper zu produzieren, und dann wird HRP verwendet, um sie zu binden, da sich der in vitro hergestellte HRP-Anti-HRP-Komplex von anderen Antigen-Antikörper-Reaktionen unterscheidet . Wenn das Antigen leicht überschüssig ist, sind alle Anti-HRP-Antikörper an der Bildung löslicher PAP-Komplexe beteiligt, wobei nur wenig freies HRP übrig bleibt. Die meisten Antigen-Antikörper-Reaktionen erfordern jedoch einen absoluten Überschuss an Antigen, um einen löslichen Komplex zu bilden. Die Form des PAP-Komplexes ist ziemlich stabil und wird nicht von der Menge des Antigens beeinflusst. Unabhängig von der anfänglichen Zugabe von Antigenen und Antikörpern beträgt das HRP / Anti-HRP-Verhältnis des resultierenden PAP-Komplexes meist 3; 2. Es wird eine zentrifugale Sedimentation angewendet. Die Methoden der Flüssigphasendiffusion und der elektronenmikroskopischen Beobachtung zeigten, dass der PAP-Komplex eine fünfeckige Ringstruktur aufweist, drei Ecken HRP sind und die anderen beiden Ecken Anti-HRP-Antikörper mit einer Molekülmasse von 400-430 kDa sind und diese Struktur sehr stabil ist.