Prueba de inmunofluorescencia indirecta de malaria

Existen muchos métodos de diagnóstico serológico para la malaria, en esta sección solo se presenta la prueba de inmunofluorescencia indirecta de uso común. Personas que necesitan ser examinadas: personas con escalofríos evidentes, temblor corporal, tez pálida, labios cianóticos, piel seca, irritabilidad, dolor de cabeza, malestar, anorexia y otros síntomas. Información básica Clasificación de especialistas: examen de enfermedades infecciosas y clasificación: examen de sangre Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Valor normal: No Por encima de lo normal: Negativo: Negativo <1:20, lo que indica que no hay infección por malaria. Positivo: La tasa de detección positiva del método de anticuerpos fluorescentes es generalmente más alta que la tasa de detección de protozoos. El título de anticuerpos para pacientes con malaria falciparum es 1:80 o superior y puede considerarse como un marcador de portadores o infección reciente de malaria. Consejos: No coma alimentos muy grasosos y ricos en proteínas el día antes de la extracción de sangre, evite beber en exceso. El contenido de alcohol en la sangre afectará directamente los resultados de la prueba Después de las 8 pm del día anterior al examen médico, se debe comenzar el ayuno durante 12 horas para evitar afectar los resultados de la prueba. Valor normal Negativo <1:20. Importancia clínica La tasa de detección positiva del método de anticuerpos fluorescentes es generalmente más alta que la tasa de detección de protozoos. El título de anticuerpos para pacientes con malaria falciparum es 1:80 o superior y puede considerarse como un marcador de portadores o infección reciente de malaria. Los resultados positivos pueden ser enfermedades: malaria, malaria cerebral, malaria pulmonar, malaria Antes de la inspección: 1, no coma alimentos grasosos y ricos en proteínas el día anterior a la sangre, para evitar beber en exceso. El contenido de alcohol en la sangre afecta directamente los resultados de la prueba. 2. Después de las 8 p. M. Del día anterior al examen médico, debe comenzar a ayunar durante 12 horas para evitar afectar los resultados de la prueba. 3, debe relajarse al tomar sangre, para evitar la contracción de los vasos sanguíneos causada por el miedo, aumentar la dificultad de la extracción de sangre. Después de la inspección: 1. Después de extraer la sangre, se requiere una compresión local en el orificio durante 3-5 minutos para detener el sangrado. Nota: No frotar, para no causar hematoma subcutáneo. 2, el tiempo de prensado debería ser suficiente. Hay una diferencia en el tiempo de coagulación para cada persona, y algunas personas necesitan un poco más de tiempo para la coagulación. Por lo tanto, cuando la superficie de la piel parece sangrar, la compresión se detiene de inmediato y la sangre puede infiltrarse en la piel debido a una hemostasia incompleta. Por lo tanto, el tiempo de compresión es más largo para detener completamente el sangrado. Si hay una tendencia a sangrar, el tiempo de compresión debe extenderse. 3, después de que la sangre extraiga síntomas de desmayo tales como: mareos, vértigo, fatiga, etc., debe acostarse de inmediato, beber una pequeña cantidad de jarabe y luego someterse a un examen físico después de que se alivien los síntomas. 4. Si hay congestión localizada, use una toalla tibia después de 24 horas para promover la absorción. Proceso de inspección 1. Principio de la prueba de inmunofluorescencia indirecta para malaria El anticuerpo anti-Plasmodium en el suero de prueba se combina con el antígeno de Plasmodium en el corte de sangre, seguido del anticuerpo IgG antihumano marcado con fluorescencia, que actúa sobre la IgG humana en el corte de sangre y exhibe fluorescencia en el sitio del antígeno. 2, reactivos (1) La película de sangre de antígeno es una película delgada de sangre de Plasmodium cynomolgus y una película delgada de sangre de Plasmodium falciparum. Instituciones profesionales de investigación están disponibles. Almacenar en 4 ° C o congelador a baja temperatura. (2) IgG antihumana marcada con fluorescencia, que está disponible comercialmente en el país. 3, el método de operación (1) El suero se recogió mediante un método convencional o se presionó una mancha circular sobre el papel de filtro con un tubo de vidrio de 1,2 cm de diámetro (hierro). Se extrae sangre de la oreja o el dedo del sujeto y se llena con un círculo. El volumen de sangre es de aproximadamente 20 μl (aproximadamente 10 μl de suero). Después de secar el número, se coloca en una bolsa de plástico sellada con desecante y se transporta al laboratorio a 4 ° C. Ahorre durante medio año, -20 ° C se puede almacenar durante 2 años. Durante la prueba, las gotas de sangre secas se cortaron en los pocillos de la placa de reacción, se añadieron 0,2 ml (pH 7,2) de tampón de fosfato 0,01 mol / l, y la dilución de suero correspondiente a 1:20 se obtuvo en remojo durante la noche a 4ºC. (2) Retire la película de sangre de antígeno del refrigerador e inmediatamente séquela con un ventilador eléctrico. Divida cada lámina de antígeno en varias células pequeñas con un crayón especial. Pruebe 1 muestra o 1 título por célula y agregue 1 suero por célula. Gotas Se requirieron controles de suero negativos y positivos de referencia y PBS en blanco para cada lote de ensayos. Inmediatamente después de agregar suero, la mezcla se transfirió a una caja húmeda, y después de la incubación a 37 ° C durante 30 minutos, se lavó lentamente con 0.01 mol / L de PBS (pH 7.2) y luego se sumergió en un cilindro de PBS durante 5 a 10 minutos. (3) Diluya el anticuerpo fluorescente IgG antihumano diluido 1:10 con 0.01mol / L PBS (pH 7.2), y colóquelo en la cámara húmeda a 37 ° C durante 30 minutos. Después de lavar con el mismo método, agregue glicerol y PBS a cada célula. Se aplicó una cantidad igual de solución mixta o agua destilada a las láminas de cobertura, y los resultados de la reacción se examinaron bajo un microscopio de fluorescencia. (4) Interpretación de los resultados: se distinguen la intensidad de fluorescencia y la claridad de la estructura del citoplasma de esquizont y trofozoíto, no hay fluorescencia (-), la fluorescencia es débil, la estructura morfológica no está clara (±), la fluorescencia es débil y la estructura morfológica Todavía está claro (+), y se divide además en (2+) a (4+) de acuerdo con el aumento del brillo de fluorescencia y la definición estructural. Generalmente, la intensidad de fluorescencia (+) o más se considera positiva a una dilución de suero 1:20. No apto para la multitud. Aquellos que no tienen una indicación para el examen no deben hacer esta verificación. Reacciones adversas y riesgos En general no hay complicaciones y daños.