Prueba de toxicidad de linfocitos

Cuando los linfocitos T efectores específicos se ponen en contacto con las células objetivo in vitro, pueden exhibir la propiedad de destruir y lisar las células objetivo, lo que se denomina toxicidad linfocitaria. La célula objetivo puede ser una célula tumoral u otra célula de tejido. La forma en que los linfocitos matan las células objetivo puede destruir las células objetivo mediante la muerte directa o la producción de linfocinas. Esta es la prueba de toxicidad linfocitaria. Algunos linfocitos, como CTL, NK, LAK, etc. tienen un efecto directo de destrucción en las células diana, y dependiendo de la naturaleza de las células efectoras a detectar, se pueden seleccionar las células diana correspondientes, como las células tumorales, las células donantes de trasplante, etc. Este experimento puede usarse en investigaciones sobre inmunidad tumoral, rechazo de trasplantes, infección viral y similares. Los métodos incluyen: método de liberación de cromo, método de liberación de lactato deshidrogenasa y ensayo de células apoptóticas. Información básica Clasificación del especialista: clasificación del examen oncológico: examen inmune Género aplicable: si los hombres y las mujeres aplican el ayuno: ayuno Resultados de análisis: Debajo de lo normal: Valor normal: No Por encima de lo normal: Negativo: Normal Positivo: No hay datos relevantes en este momento. Consejos: mantenga una mentalidad normal. Valor normal El método de examen morfológico se comparó entre el grupo de prueba y el grupo de control, P <0.05. Método 125I o 51Cr P> 0.05. Importancia clínica Resultados anormales: esta prueba puede usarse como un indicador para medir la inmunidad celular en pacientes con tumor in vitro; también puede determinar el pronóstico de los pacientes con tumor midiendo la capacidad de las células inmunes para matar las células tumorales; y también puede identificar subpoblaciones funcionales de linfocitos. La población a examinar: la prueba cruzada de toxicidad linfocitaria también se llama prueba de citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). Es para verificar si hay un donante en el receptor del trasplante de órganos, o el anticuerpo HLA del donante contra el receptor, y debe realizar una prueba de CDC antes del trasplante de órganos. Precauciones (1) Al medir la capacidad de los linfocitos del sujeto para atacar las células tumorales, las células tumorales y los linfocitos del sujeto se agregaron al grupo experimental, y las células objetivo del tumor y el medio de cultivo se agregaron al grupo de control. Si otras muestras, como antígenos tumorales o inmunógenos, fármacos terapéuticos, etc. están involucradas en la inmunidad celular, se debe agregar un tercer grupo. En este grupo de prueba, primero se permite que los linfocitos reaccionen con la muestra a analizar, luego se lavan y luego se observan. El efecto citotóxico de los linfocitos sensibilizados sobre las células diana tumorales. Los dos primeros grupos se convirtieron en el grupo de control en este momento. (2) La tasa de supervivencia de las células objetivo y los linfocitos debe estar en un estado óptimo, generalmente> 90%. (3) Primero se debe analizar la toxicidad del suero de ternera agregado a la solución de cultivo. (4) El recuento de células diana inoculadas y linfocitos debe ser preciso. (5) El grupo experimental y el grupo de control deben organizarse en el mismo tablero para reducir el error. (6) El pH de la solución de cultivo es más preferiblemente de 6,8 a 7,2. Proceso de inspección (1) Inoculación de células diana: seleccione células tumorales que puedan crecer de forma adherente, lávelas con solución de Hank, digiera con 2.5 g / L de tripsina durante 2 a 3 min, vierta la solución de tripsina (las células aún están unidas a la pared de la botella) y use Hank. Las células se lavaron ligeramente 3 veces y se vertió la solución de Hank. Las células adherentes se lavaron con una solución RPMI1640 que contenía suero de ternera del 10% al 20%, y el sedimento celular se retiró por filtración a través de un filtro de malla 100 para preparar una suspensión de células tumorales individuales de 1 x 106 / ml, y la suspensión celular se pipeteó con un gotero. Coloque en una placa de cultivo de 40 pocillos, 1 gota por pocillo (aproximadamente 100-150 células), y coloque la placa en una incubadora de CO2 al 5% a 37 ° C durante 20 h. Se sacó la placa de cultivo y se eliminó la solución de cultivo. Después de la tinción de Wright, se contó el número promedio de células tumorales adherentes por 10 pocillos. Si la diferencia entre los dos grupos era> 1/3, el error era demasiado grande para ser usado y el error no era grande. La placa de cultivo se puede probar formalmente. (2) Separación de linfocitos: tome la anticoagulación con heparina 3 ml del sujeto, separe los linfocitos con la solución de lixiviación de sacarosa-diazepam, luego lávelos con solución de Hank 3 veces y luego mézclelos con solución RPMI1640 (2 ~ 3) ) × 105 / ml de suspensión celular. (3) Prueba de citotoxicidad: los linfocitos y las células objetivo se mezclan en una proporción de 200: 1, y (2 ~ 3) × 104 linfocitos (en un volumen de 0.1 ml) se agregan a cada pocillo, y se agrega aproximadamente 20% de suero de ternera por pocillo. Se colocaron 0,1 ml de solución RPMI 1640 en una incubadora de CO2 al 5% a 37ºC durante 40 h. Se sacó la placa de cultivo y se eliminó la solución de cultivo.Después de la tinción de Wright, se contó al microscopio el número de células objetivo que quedaban en el fondo de la placa. No apto para la multitud. No hay tabúes. Reacciones adversas y riesgos No hay complicaciones y riesgos relacionados.